猪源IFN-λ3的克隆、表达及抗病毒活性分析

论文摘要

为了解猪源IFN-λ3的体外抗病毒活性,本研究利用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞（CRL2845）中扩增获得猪源IFN-λ3基因（pIFN-λ3）,并将pIFN-λ3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pCDNA3.1-pIFN-λ3,利用脂质体转染293细胞。48 h后通过Western blot分析p IFN-λ3瞬时表达情况,取转染后上清分别作用于PK15、MDCK细胞进行p IFN-λ3抗病毒活性分析。结果显示,本研究成功扩增获得pIFN-λ3基因,并在293细胞内成功表达;瞬时表达能够抑制表达绿色荧光蛋白的重组水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus-green fluorescent protein,VSVG）在PK15、MDCK细胞上的增殖。本研究结果为深入研究猪源IFN-λ3在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用机理及其应用提供参考和依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 引物设计及合成
•   1.3 pIFN-λ3基因的克隆及序列分析
•   1.4 重组表达质粒构建与鉴定
•   1.5 细胞转染
•   1.6 Western blot分析pIFN-λ3表达
•   1.7 pIFN-λ3在PK15、MDCK细胞上的抗病毒活性分析
•     1.7.1 结晶紫染色法
•     1.7.2 荧光观察法
•     1.7.3 流式细胞术
• 2 结果
•   2.1 pIFN-λ3基因的扩增、克隆及鉴定分析
•   2.2 重组表达质粒构建与鉴定
•   2.3 pcDNA3.1-pIFN-λ3的表达鉴定
•   2.4 结晶紫染色法分析pIFN-λ3在PK15、MDCK细胞上的抗病毒活性
•   2.5 荧光观察法分析pIFN-λ3在PK15、MDCK细胞上的抗病毒活性
•   2.6 流式细胞术分析pIFN-λ3在PK15、MDCK细胞上的抗病毒活性
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈竞,许汪,宋利娜,郝鹏飞,姜宇航,付婷婷,金鑫,金宁一,李昌

关键词: 猪肺巨噬细胞,抗病毒活性

来源: 中国动物传染病学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 延边大学农学院,军事医学研究院军事兽医研究所

基金: 国家重点研发计划资助项目(2017YFD0501002),国家自然科学基金(31702210)

分类号: S828

页码: 32-37

总页数: 6

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