L1.LtrB内含子编码蛋白反转录结构域关键催化位点分析及功能验证

论文摘要

【目的】筛选影响Ll.LtrB内含子编码蛋白(Intron encoded protein,IEP)反转录功能的关键催化位点,并获得无反转录活性的IEP突变体。【方法】首先,利用NCBI数据库,通过序列比对及同源建模方法筛选影响IEP反转录功能的关键氨基酸催化位点;然后,对筛选获得的关键催化位点进行定点突变,同时以Targetron载体为模板,构建无反转录功能的突变型Targetron打靶系统;最后,以大肠杆菌lacZ基因为例,体内验证IEP突变体的功能及其对Ⅱ型内含子"归巢"效率的影响。【结果】筛选到C164和G214两个位点是影响内含子编码蛋白反转录功能的关键氨基酸残基,并获得C164K和G214W两个突变体。体内功能分析表明,此两个位点突变完全失活了Ⅱ型内含子的"归巢"功能。【结论】筛选并获得了失活反转录功能的Ll.LtrB内含子编码蛋白突变体,为深入研究Ⅱ型内含子的结构和"归巢"机理奠定了基础。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 主要试剂与仪器：
•     1.1.2 培养基及培养方法：
•     1.1.3 引物：
•     1.1.4 菌株及质粒：
•   1.2 内含子编码蛋白生物信息学分析
•   1.3 定点突变及突变型Targetron载体构建
•   1.4 遗传筛选及打靶效率计算
•   1.5 菌落PCR鉴定
• 2 结果和分析
•   2.1 内含子编码蛋白同源序列分析及反转录核心催化位点筛选
•   2.2 C164和G214在IEP蛋白中的相互作用分析
•   2.3 IEP蛋白反转录结构域关键氨基酸位点突变对内含子“归巢”效率的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈相好,张峥嵘,刘芳,陈峥宏,洪伟,綦廷娜,谷俊莹,崔古贞

关键词: 型内含子,内含子编码蛋白,反转录

来源: 微生物学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 贵州医科大学基础医学院,贵州医科大学医学检验学院,贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室,贵州医科大学分子生物学重点实验室,贵州医科大学附属医院

基金: 国家自然科学基金(31760318,31500078,31560318,31601012),贵州省科技计划项目(黔科合基础[2018]1132,[2019]1441),贵州省教育厅自然科学研究项目(黔教合KY字[2014]216),贵州省研究生科研基金立项项目(11348)~~

分类号: Q78

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20190048

页码: 2357-2366

总页数: 10

文件大小: 1106K

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