人肠道来源大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因突变株的构建

论文摘要

目的:使用嗜热二型内含子基因失活系统（Thermotargetron）失活人肠道来源大肠杆菌（HSM174 DE3）β-半乳糖苷酶基因（LacZ）,构建lacZ失活突变株。方法:使用分子克隆方法,构建lacZ基因失活质粒pHK-TT1A-lacZ426a、pHK-TT1A-lacZ1879a、pHK-TT1A-lacZ1880a及pHK-TT1A-lacZ1155s,将基因失活质粒转化大肠杆菌HSM174菌株（E.coli HSM174）,转化子培养时提高温度至48℃,诱导TeI3c/4c二型内含子"归巢"活性,采用蓝白斑及PCR筛选lacZ基因失活突变株。结果:随机挑选20株克隆菌株的PCR结果显示,lacZ426a、lacZ1879a、lacZ1880a及lacZ1155s基因失活效率分别为60%、75%、60%及75%;白斑克隆基因失活效率为100%。结论:Thermotargetron系统可高效的实现E.coli HSM 174菌株lacZ基因失活,并可能具有在中温菌中广泛应用的潜力。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株与其培养条件
•   1.2 方法
•     1.2.1 Thermotargetron靶位点寻找及突变引物设计
•     1.2.2 质粒构建
•     1.2.3 Thermotargetron失活lacZ基因
•     1.2.4 丢失打靶质粒
• 2 结果
•   2.1 E. coli HSM174 lacZ 基因打靶位点设计
•   2.2 E. coli HSM174 lacZ 基因敲除载体的构建
•   2.3 lacZ基因敲突变株鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 洪伟,赵行行,吴昌学,饶凤琴,程玉梅,张婷,齐晓岚,禹文峰,官志忠

关键词: 基因失活系统,二型内含子,大肠杆菌,半乳糖苷酶基因,基因失活,质粒,分子克隆

来源: 贵州医科大学学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 基础医学

单位: 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省分子生物学重点实验室,贵州医科大学附院ICU

基金: 国家自然科学基金(31560318,31601012,31760318),贵州省自然科学基金资助项目[黔科合基础(2019)1441,(2018)1132,(2018)5779-17]

分类号: R378

DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.12.002

页码: 1370-1376

总页数: 7

文件大小: 1805K

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