人LRG1基因的原核表达及生物信息学分析

论文摘要

为了探讨LRG1基因结构与功能,对该基因进行克隆并构建到原核表达载体上,并对其进行表达及生物信息学分析。用Trizol法提取人肝癌HepG2细胞总RNA后,PCR扩增得到LRG1片段,经鉴定后将目的基因与原核表达载体pET28a连接,经诱导表达获得His-LRG1蛋白。LRG1基因cDNA片段大小为1 044 bp,编码347个氨基酸;成功构建pET28a原核表达载体,经多次不同条件诱导后,得到大小约40 kD目的蛋白;利用软件对LRG1蛋白的一级、二级结构进行了预测,分析总结得LRG1基因编码的蛋白是一个不稳定且具有亲水性的蛋白,可与多种信号开关相互作用。LRG1属于高度保守的富亮氨酸重复家族成员,其原核表达载体不易诱导产生大量目的蛋白,克隆表达该基因有利于验证其结构与功能关系。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 LRG1基因的原核表达
•     1.1.1 PCR扩增出的LRG1基因片段
•     1.1.2 重组质粒pET28a-LRG1 PCR鉴定
•     1.1.3 重组蛋白表达的SDS-PAGE电泳
•     1.1.4 Western blotting鉴定
•   1.2 LRG1基因的结构与生物信息学分析
•     1.2.1 LRG1基因的理化性质
•     1.2.2 LRG1编码蛋白的信号肽预测
•     1.2.3 LRG1编码蛋白的跨膜区预测
•     1.2.4 LRG1蛋白二级结构预测
•     1.2.5 LRG1蛋白翻译后修饰位点预测
•     1.2.6 LRG1蛋白亚细胞定位及B细胞线性表位预测
•     1.2.7 LRG1蛋白三维结构预测
•     1.2.8 LRG1基因编码的蛋白相互作用分析
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 质粒和感受态细胞
•   3.2 酶和试剂
•   3.3 RNA的提取及反转录
•   3.4 LRG1基因片段的获得与重组质粒构建
•   3.5 重组质粒的鉴定
•   3.6 pET28a-LRG1蛋白的原核表达与检测
•   3.7 生物信息学分析
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈旗,胡伟杰,腾桥,夏丽洁

关键词: 肝癌,克隆表达,生物信息学

来源: 基因组学与应用生物学 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 新疆大学生命科学与技术学院生物资源基因工程重点实验室

基金: 国家级大学生创新训练计划项目(201610755042),国家自然科学基金项目(31500752),新疆大学博士启动基金项目(BS150241)共同资助

分类号: Q78

DOI: 10.13417/j.gab.038.000983

页码: 983-989

总页数: 7

文件大小: 417K

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