副猪嗜血杆菌血清4型不同菌株间毒力相关基因验证及LpxC基因生物信息学分析

论文摘要

为探究副猪嗜血杆菌同一血清型不同菌株间毒力相关基因的差异以及LpxC基因的遗传特性,本试验设计35种毒力相关基因的特异性引物,对副猪嗜血杆菌血清型4型的两种菌株进行PCR验证,并将两株菌株的LpxC基因连接到T5载体上,转化到大肠杆菌感受态细胞中进行克隆及测序,得到921bp目的片段。在NCBI上进行比对分析,运用DNA star软件对LpxC基因进行核苷酸同源性比对,同时对LpxC基因编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明:35种毒力相关基因中除SapA基因,其余34种在两个菌株中共同存在,两株HPS的LpxC基因序列与各参考菌株之间的同源性均在97%～100%之间,说明LpxC基因在副猪嗜血杆菌中保守存在。系统进化树结果显示XM1602菌株LpxC基因与SH0165菌株处于同一分支,FS0035菌株LpxC基因与ZJ0906菌株处于同一分支。同时,菌株FS0035和XM1602的LpxC基因编码的蛋白质等电点分别为5.59和5.45;该蛋白质为亲水性蛋白,无跨膜结构;二级结构包括α螺旋、伸展链、β转角和无规卷曲。结果证实,同一血清4型,两株不同的副猪嗜血杆菌菌株在毒力相关基因上存在一定的差异;LpxC基因在两个菌株中保守性较高,变异性较低。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌种来源
•   1.2 试验仪器
•   1.3 培养基及主要试剂
•   1.4 菌种的复苏与验证
•   1.5 毒力相关基因验证
•   1.6 LpxC基因的克隆与分析
•     1.6.1 LpxC基因的克隆
•     1.6.2 LpxC核苷酸序列分析
•   1.7 LpxC基因编码蛋白质的生物信息学分析
• 2 结果与分析
•   2.1 复苏菌株染色镜检结果
•   2.2 XM1602和FS0035毒力相关基因PCR扩增结果
•   2.3 LpxC基因验证
•   2.4 LpxC基因序列比对及基因进化分析
•   2.5 LpxC基因的生物信息学分析结果
•     2.5.1 LpxC基因编码蛋白质的理化性质
•     2.5.2 LpxC基因编码蛋白质亲疏水性分析
•     2.5.3 LpxC基因编码蛋白质跨膜信号分析
•     2.5.4 LpxC基因编码蛋白质二级结构预测
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周媛媛,张学谅,王静,陈欣,李睿,尹荣兰,王超,黄晨,尹荣焕

关键词: 副猪嗜血杆菌,毒力相关基因,序列分析,生物信息学分析

来源: 沈阳农业大学学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 沈阳农业大学东北畜禽疫病研究教育部重点实验室/畜牧兽医学院,吉林省畜牧兽医科学研究院

基金: 辽宁省人兽共患病研究工程实验室项目(01072917001),辽宁省自然科学基金项目(201602667),辽宁省教育厅科学研究项目(2019-17)

分类号: S858.28;S852.61

页码: 550-558

总页数: 9

文件大小: 1611K

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