小鼠脑干3β羟基类固醇脱氢酶1免疫阳性神经元信号检测方法的优化

论文摘要

类固醇激素合成关键调节酶-3β羟基类固醇脱氢酶1 （3β-HSD1）是类固醇激素合成途径中的关键调节酶,其活性的改变可影响雄激素（睾酮）的分泌水平。检测3β-HSD1在脑组织的分布对研究脑干调节类固醇激素的分泌具有重要意义。但常规检测手段难以检测出3β-HSD1阳性信号的分布。为优化检测小鼠3β-HSD1在脑神经元中分布的方法,本研究分别采用不同固定液（4%多聚甲醛、20%甲醇+0.2%丙酮、4%多聚甲醛+10 mmol/L柠檬酸钠）预先灌注小鼠,取其脑组织制作冰冻切片,经优化的封闭前预处理后,经免疫组化方法检测3β-HSD1在小鼠脑组织中的分布以及不同固定液对其在小鼠脑干中的阳性信号检测结果的影响。同时采用western blot验证该免疫组化试验结果。结果显示,3β-HSD1主要在小鼠后脑脑干内分泌类固醇激素的主要核团,即在脑干中的缝苍白核（RPa）、巨细胞网状核（GRN）及臂旁核（PB）中表达。4%多聚甲醛固定组小鼠在上述核团内均未观察到3β-HSD1阳性荧光信号;20%甲醇+0.2%丙酮固定组小鼠在上述核团内虽可见3β-HSD1阳性信号分布,但荧光信号较模糊;4%多聚甲醛+10 mmol/L柠檬酸铵固定组小鼠在其脑干上述核团内获得染色结果清晰,神经元形态饱满的3β-HSD1阳性荧光信号。Western blot结果也证实了3β-HSD1蛋白在小鼠脑干内上述3个神经核团内的特异表达。综上所述,采用免疫组化试验检测3β-HSD1在小鼠脑内的定位时,经4%多聚甲醛+10 mmol/L柠檬酸钠固定液组的小鼠脑组织切片可在小鼠脑干RPa、GRN及PB核团内获得饱满的3β-HSD1阳性荧光信号。本实验方法的优化将为进一步研究脑内3β-HSD1影响类固醇激素合成过程的研究提供技术手段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要实验材料
•   1.2 小鼠脑组织处理
•   1.3 不同固定液对小鼠脑组织内3β-HS D1阳性信号影响的检测
•   1.4 小鼠脑组织中3β-HS D1的we s te rn blot检测
• 2 结果与讨论
•   2.1 不同固定液对小鼠脑组织3β-HS D1阳性荧光信号影响的检测结果
•   2.2 小鼠脑组织中3β-HS D1蛋白表达的we s te rn blot检测结果

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 曹晓娟,李强,范奎奎,潘登,刘昊东,王昆,海日汗,杜晨光

关键词: 免疫荧光,羟基类固醇脱氢酶,脑干

来源: 中国预防兽医学报 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 内蒙古农业大学职业技术学院,内蒙古农业大学兽医学院,河北省农林科学院粮油作物研究所

基金: 国家自然科学基金(31660701),内蒙古自然科学基金(2018MS03046),河北省现代农业产业技术体系肉牛产业创新团队建设(HBCT20181302)

分类号: S852.4

页码: 1280-1284

总页数: 5

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