风疹病毒结构蛋白多免疫显性区域诊断抗原的制备及其诊断效能评价

论文摘要

对串联风疹病毒（Rubella virus,RV） 3个结构蛋白6个免疫显性区域进行制备（命名为B103）,并将其应用于血清学诊断中。选取RV C aa 1–30&aa 96–123、E2 aa 31–105和E1 aa 11–39&aa 154–277&aa 389–412等6个免疫显性区域,将其串联并基因合成;将此基因片段插入TRX和His标签之间构建表达质粒;蛋白B103在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,并利用Streamline Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白,Sephadex G-25分子筛分析其折叠情况及均一性;利用免疫印迹技术对蛋白B103的抗原性进行鉴定,并建立RV-IgM抗体捕获法ELISA检测技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。蛋白B103以可溶性形式表达,其表达量约占菌体总蛋白的18.57%,经纯化后蛋白B103浓度为3.026 mg/mL,纯度为95.35%;免疫印迹实验表明蛋白B103能与RV急性期血清发生反应;对40份RV急性期血清及40份RV阴性血清进行检测发现可以很好地鉴别阴阳性血清标本;其灵敏度为92.50%,特异性为95.00%,阳性预测值为94.87%,阴性预测值为92.68%,符合率为93.75%,McNemer检验的结果提示与"金标准"诊断结果无差异,kappa=0.900,提示两种方法诊断结果一致性优异。原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的RV血清学诊断抗原,可以应用于RV早期诊断中。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要材料与试剂
•   1.2 表达质粒B103的构建
•   1.3 蛋白B103的制备
•   1.4 蛋白B103的Western blotting分析
•   1.5 蛋白B103-HRP酶标物的制备及其诊断效能评价
•   1.6 统计学分析
• 2 结果与分析
•   2.1 原核表达层析纯化可获取高度均质的蛋白B103
•   2.2 蛋白B103可以与RV急性期血清发生特异性反应
•   2.3 基于蛋白B103的捕获法ELISA技术可以很好地鉴别RV阴阳性血清标本
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 高健,赵鼎

关键词: 免疫显性区域,风疹病毒,原核表达,层析纯化,血清学诊断

来源: 生物工程学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 郑州大学附属儿童医院检验科,郑州儿童医院检验科,河南省儿童医院检验科

分类号: R392

DOI: 10.13345/j.cjb.190031

页码: 1529-1536

总页数: 8

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