猪肺炎支原体部分血清体液免疫显性蛋白抗原的筛选鉴定

论文摘要

旨在筛选猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）部分血清体液免疫显性蛋白抗原。利用生物信息学软件筛选到7个普遍存在于Mhp菌株中的蛋白Mhp104、Mhp299、Mhp367、Mhp462、Mhp465、Mhp477、Mhp488。将其对应的基因分别连接pGEX-6P-1载体后转化至大肠杆菌BL21（DE3）,诱导表达目的蛋白。将诱导表达目的蛋白的7个重组菌裂解液和GST工程菌裂解液分别加入谷胱甘肽板进行抗原包被,以PBS+10%FBS+2.5%脱脂奶粉为封闭液,血清和酶标二抗分别按照1∶500,1∶40 000稀释,将抗原包被板分别与11份Mhp恢复期血清和7份Mhp阴性血清进行ELISA反应。结果表明,所有7个重组融合蛋白均能以可溶形式表达,且GST-Mhp299、GST-Mhp367、GST-Mhp488能被PreScission Protease酶切。最终共筛选出5个Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原,分别为Mhp104、Mhp367、Mhp462、Mhp477、Mhp488,从而为Mhp基因工程亚单位疫苗的研发提供了抗原靶标。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 血清样品
•   1.3 主要试剂
•   1.4 Mhp蛋白的同源性和亚细胞定位分析
•   1.5 Mhp重组蛋白的原核表达与纯化
•   1.6 Mhp恢复期血清、阴性血清的准备
•   1.7 Mhp重组蛋白的大规模表达
•   1.8 部分Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原的筛选鉴定
• 2 结果
•   2.1 蛋白的同源性分析
•   2.2 蛋白的亚细胞定位分析
•   2.3 重组蛋白的原核表达、纯化与鉴定
•   2.4 Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原的鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 钟杰,蔡宜冰,周瑶琴,徐作波,吴建云,丁红雷

关键词: 猪肺炎支原体,血清体液免疫显性蛋白抗原,原核表达

来源: 中国兽医学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西南大学兽医传染病学实验室

基金: 重庆市社会事业与民生保障科技创新专项资助项目(cstc2015shmszx80033),国家级大学生创新创业训练计划资助项目(201710635077)

分类号: S852.4

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.05.15

页码: 894-900

总页数: 7

文件大小: 772K

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