茶尺蠖丝氨酸蛋白酶基因EoSP1的克隆、时空表达及对饥饿的表达响应

论文摘要

丝氨酸蛋白酶是鳞翅目昆虫消化系统中一类重要的蛋白酶。本研究从茶尺蠖（Ectropis obliqua）中克隆到一条丝氨酸蛋白酶基因EoSP1并分析了其结构特征和表达特性。EoSP1基因序列全长858 bp,编码285个氨基酸,预测蛋白分子量为29.53 kDa,等电点为5.44。经与其他丝氨酸蛋白酶比对,EoSP1含有保守的丝氨酸蛋白酶催化位点（H95,A161和S328）及蛋白互作结构域,与蓓带夜蛾（Mamestraconfigurata）中SPs亲缘关系较近。进一步获得了与EoSP1-GST融合蛋白大小接近的目的蛋白。qRT-PCR分析发现,EoSP1在幼虫期的表达显著高于成虫、蛹和卵期,并在幼虫中肠中特异性表达;饥饿处理后EoSP1表达下降,恢复饲喂后表达量接近对照组。以上结果为茶尺蠖消化酶功能解析及抗虫新靶点的筛选提供了依据。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 供试昆虫
•     1.1.1 不同发育时期
•     1.1.2 不同组织部位
•     1.1.3 饥饿处理
•   1.2 RNA提取
•   1.3 EoSP1基因的克隆
•   1.4 生物信息学分析
•   1.5 原核表达载体构建及蛋白纯化
•   1.6 定量分析
•   1.7 数据分析
• 2 结果与分析
•   2.1 EoSP1全长克隆及蛋白结构预测
•   2.2 EoSP1蛋白结构及进化树分析
•   2.3 EoSP1原核表达及纯化
•   2.4 EoSP1在茶尺蠖不同发育时期的表达特征
•   2.5 EoSP1在不同组织中的表达特征
•   2.6 饥饿胁迫下EoSP1的表达响应
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张新,陈成聪,杜琴,李喜旺,孙晓玲

关键词: 茶尺蠖,丝氨酸蛋白酶,克隆,表达分析

来源: 茶叶科学 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 植物保护

单位: 中国农业科学院茶叶研究所,农业农村部茶树生物学与资源利用重点实验室,国家茶叶质量安全工程技术研究中心

基金: 国家自然科学基金项目（31272053）,中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（1610212017017,1610212018004）,国家茶叶质量安全工程技术中心开放课题基金项目（2018NTQS0102）

分类号: S435.711

DOI: 10.13305/j.cnki.jts.2019.06.006

页码: 669-680

总页数: 12

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