迟缓爱德华菌分子伴侣蛋白GroEL原核表达及免疫特性

论文摘要

GroEL是细菌内分子伴侣蛋白,参与细菌多种生命活动,在布鲁菌、链球菌研究中,GroEL蛋白展示了良好的疫苗潜力。前期利用迟缓爱德华菌抗体Pull-down技术筛选到GroEL蛋白,揭示了该蛋白的潜在应用价值,本试验以迟缓爱德华菌GroEL蛋白作为研究对象,利用大肠杆菌表达系统表达纯化GroEL重组蛋白（rGroEL）,进一步通过动物模型评估rGroEL的免疫效果。结果显示,rGroEL能够激发小鼠产生高水平的特异性抗体,具有较好的免疫原性,免疫小鼠对迟缓爱德华菌感染具有较好的抵抗力,相对保护率达95%。斑马鱼感染试验结果表明,rGroEL免疫对迟缓爱德华菌感染具有一定保护效果,保护率为60%。用rGroEL免疫斑马鱼可以产生针对嗜水气单胞菌的免疫保护力,保护率可达45%。本试验初步探索了迟缓爱德华菌重组蛋白rGroEL的免疫特性,为研制迟缓爱德华菌亚单位疫苗和核酸疫苗提供了依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、质粒与实验动物
•   1.2 酶及其他试剂 LA Taq DNA
•   1.3 groeL基因序列分析
•   1.4 重组原核表达载体的构建
•   1.5 rGroEL蛋白的原核表达及验证
•   1.6 目的蛋白的可溶性分析及纯化
•   1.7 rGroEL蛋白免疫小鼠保护试验
•   1.8 免疫小鼠血清抗体水平的检测
•   1.9 rGroEL蛋白免疫斑马鱼试验
• 2 结果
•   2.1 groeL基因克隆与重组表达载体pET-32a-groeL的构建
•   2.2 重组蛋白rGroEL的表达验证
•   2.3 rGroEL表达的可溶性分析及纯化
•   2.4 rGroEL蛋白免疫小鼠试验结果
•   2.5 rGroEL蛋白免疫斑马鱼试验结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张志强,葛成,杜万年,于秀剑,康元环,单晓枫,潘晓艺,史秋梅,刘莉

关键词: 迟缓爱德华菌,免疫保护力

来源: 中国兽医学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室,浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室,吉林农业大学动物科学技术学院

基金: 农业部淡水渔业健康养殖重点实验室开放基金资助项目(ZJK201812),中国博士后科学基金资助项目(2017M611935),河北科技师范学院海洋专项资助项目(2018HY007)

分类号: S852.61

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.12

页码: 2161-2165+2172

总页数: 6

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