肿瘤靶向FoxM1-DBDp蛋白的噬菌体随机肽库筛选与分子模拟

论文摘要

目的从噬菌体随机十二肽库中筛选和获得分子靶向FoxM1-DBDp重组蛋白的高亲和力和肿瘤细胞毒性作用的多肽小分子。方法通过IPTG诱导、原核细菌体外重组表达和Ni-NTA亲和纯化,获得FoxM1-DBDp结合结构域蛋白;以其为靶标对噬菌体随机十二肽库进行四轮生物淘选,获取噬菌斑单克隆,反筛测定阳性克隆与靶蛋白亲和力;采用Discovery Studio 3.0 （DS 3.0）分子模拟对接并用CCK-8测定高亲和力多肽对肿瘤细胞的抑制作用。结果经过四轮生物淘选,高亲和力噬菌体明显得到富集;成功测序了15条序列。反筛测定结果表明:多肽P15具有较高的亲和力;DS分子模拟对接发现该序列与FoxM1-DBD具有最低的结合自由能。CCK-8测定结果显示:100μg·mL-1处理浓度下,P15多肽对肝癌HepG2细胞的抑制率达75.52%。结论通过噬菌体随机十二肽库筛选,成功筛选获得了多条分子靶向FoxM1-DBDp的高亲和力多肽序列,为分子靶向肿瘤密切相关FoxM1的多肽先导药物的研发提供了重要的前期理论基础。

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 仪器与试药
•   1.2 方法与结果
•     1.2.1 重组菌鉴定与重组蛋白的诱导表达及纯化
•     1.2.2 噬菌体随机十二肽库亲和筛选蛋白
•     1.2.3 噬菌体克隆亲和力反筛测定
•     1.2.4 Discovery Studio 3.0 （DS 3.0）分子模拟与对接
•     1.2.5 P15多肽对肝癌HepG2细胞的抑制作用
• 2 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 付鹏德,邬怡然,王思怡,李良建,郭红萍,崔健,茆灿泉

关键词: 噬菌体随机肽库,生物淘选,多肽,分子对接,反筛测定,细胞生长抑制率,肿瘤

来源: 华西药学杂志 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 药学

单位: 西南交通大学生命科学与工程学院生物信息与创新药物实验室

基金: 国家自然科学基金资助项目(批准号:81872789),成都市重点研发支撑计划(编号:2018-YF05-00004-SN)

分类号: R91

DOI: 10.13375/j.cnki.wcjps.2019.06.002

页码: 559-563

总页数: 5

文件大小: 8899K

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