柔嫩艾美耳球虫AMA1基因DNA疫苗的免疫保护效果

论文摘要

本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）顶膜抗原1（Apical membrane antigen 1,Et AMA1）基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真核表达重组质粒p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ。将重组质粒p CAGGS-Et AMA1转染进293T细胞中,经间接免疫荧光和Western blot实验鉴定,观察其在体外表达情况。将p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ于7日龄和14日龄腿部肌肉注射免疫雏鸡,21日龄人工感染1×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,第29日龄时处死试验鸡,以平均增重、卵囊产量和病变记分来评价重组质粒的免疫保护效果。结果显示,p CAGGS-Et AMA1转染的293T细胞出现明显的红色荧光;两种真核表达重组质粒免疫组鸡的平均增重与未攻虫组的平均增重差异不显著,不具有统计学意义,而未免疫攻虫组则与未攻虫组在增重方面差异具有显著统计学意义;免疫组鸡相较于未免疫攻虫组在病变记分方面显著下降;免疫组的卵囊减少率分别为67.43%和72.89%;p CAGGSEt AMA1-IFN-γ组在增重、盲肠病变记分和卵囊减少率方面都优于p CAGGS-Et AMA1组,但差异不具有统计学意义。表明构建的2种重组质粒对雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染有一定的免疫保护效果。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 实验动物及所用虫株
•   1.3 Et AMA1基因的克隆
•   1.4 pCAGGS-Et AMA1真核重组表达质粒构建
•   1.5 鸡IFN-γ基因的克隆
•   1.6 pCAGGS-Et AMA1-IFN-γ真核重组表达质粒构建
•   1.7 293T细胞的复苏培养
•   1.8 间接免疫荧光（indirect fluorescent assay,IFA）鉴定pCAGGS-Et AMA1的表达情况
•   1.9 Western blot鉴定pCAGGS-Et AMA1的表达情况
•   1.1 0 动物分组及免疫
•   1.1 1 免疫保护评价指标
• 2 结果
•   2.1 Et AMA1基因的克隆
•   2.2 真核重组表达质粒pCAGGS-Et AMA1的构建和鉴定
•   2.3 鸡IFN-γ基因PCR扩增结果及序列分析
•   2.4 重组质粒pCAGGS-Et AMA1-IFN-γ的构建及鉴定
•   2.5 间接免疫荧光（IFA）检测pCAGGS-Et AMA1在293T细胞中的表达
•   2.6 Western blot分析pCAGGS-Et AMA1在293T细胞中的表达
•   2.7 免疫保护效果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王晔,赵其平,朱顺海,董辉,姜连连,薛璞,舒凡帆,黄兵,韩红玉

关键词: 柔嫩艾美耳球虫,基因,真核表达,免疫保护效果

来源: 中国动物传染病学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院上海兽医研究所农业农村部动物寄生虫学重点实验室,华南农业大学兽医学院

基金: 国家自然科学基金(31672551),国家寄生虫种质资源共享服务平台(平台-TDRC-22)

分类号: S852.7

页码: 1-9

总页数: 9

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