牛细小病毒DPO-PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立牛细小病毒的快速检测方法,以牛细小病毒VP2基因为靶基因,设计了1对双启动寡核苷酸（dual-priming oligonucleotide,DPO）引物,建立了牛细小病毒DPO-PCR快速检测方法。退火温度不敏感试验、特异性试验和灵敏度试验的结果显示,与常规PCR方法相比,DPO-PCR方法在41～65℃退火温度范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感;该方法的最低检出量为3.94×103copies/uL;通过对牛细小病毒、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒进行检测,只有牛细小病毒的检测结果为阳性,且无非特异性扩增。结果表明,建立的DPO-PCR方法同传统PCR方法相比,特异性强、灵敏度高,为牛细小病毒的快速检测提供了一种新方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒株与细胞株
•   1.2 主要试剂与仪器
•   1.3 引物的设计
•   1.4 VP2基因的扩增
•   1.5 标准品DNA模板的制备
•   1.6 DPO-PCR检测方法的建立
•   1.7 DPO-PCR退火温度不敏感试验
•   1.8 DPO-PCR灵敏度试验
•   1.9 DPO-PCR特异性试验
•   1.1 0 临床样品检测
• 2 结果
•   2.1 标准品DNA模板的制备
•   2.2 DPO-PCR检测方法的建立
•   2.3 DPO-PCR退火温度不敏感性的检测
•   2.4 DPO-PCR方法灵敏度的检测
•   2.5 DPO-PCR方法特异性的检测
•   2.6 临床样品的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王孟孟,李振雪,汤婷婷,王瑞翀,王丽,徐义刚,唐丽杰,李一经,乔薪瑗

关键词: 牛细小病毒,快速检测

来源: 中国兽医科学 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 东北农业大学动物医学学院,黑龙江省疾病控制中心

基金: “十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0500904)

分类号: S852.653

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0045

页码: 269-273

总页数: 5

文件大小: 528K

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