线性聚乙烯亚胺(LPEI)介导DNA转染的优化研究

论文摘要

线性聚乙烯亚胺（LPEI）是一类广泛用于核酸转染或药物传递的阳离子聚合物.为了进一步探究25 kDa LPEI的转染条件,通过凝胶电泳阻滞试验评估N/P,聚合pH及聚合时间对LPEI-DNA复合物形成的影响,继而利用大范围N/P的25 kDa LPEI对HEK293 T细胞进行绿色荧光蛋白表达质粒转染,转染48 h后通过绿色荧光细胞比例及MTT的统计分析,评估转染效率与LPEI造成的细胞毒性.结果表明, N/P的上升能增强LPEI-DNA的电泳阻滞;随着共孵育pH值从6～8升高, LPEI-DNA聚合逐渐减弱;随着共孵育时间延长, LPEI-DNA聚合逐渐增强,孵育1 h时达到饱和.随着体外转染HEK293 T细胞的N/P升高,转染阳性细胞比例逐渐升高,当N/P达到40～60时转染效率达到最高,进一步提高N/P后转染效率极显著下降（p<0.01）;随着N/P升高,细胞活力逐渐下降.结果表明, N/P, pH,聚合时间均可影响LPEI聚合核酸能力;综合考虑N/P对HEK293 T细胞转染效率及细胞毒性的影响,确定25 kDa LPEI转染细胞适宜的条件为N/P为40～60,聚合pH值为6.0,聚合时间为1 h.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞与试剂
•   1.2 核酸阻碍试验
•   1.3 聚合时间优化
•   1.4 聚合pH优化
•   1.5 HEK293 T细胞培养
•   1.6 转染效率检测
•   1.7 MTT检测
•   1.8 统计学分析
• 2 结 果
•   2.1 N/P对LPEI-DNA复合物形成的影响
•   2.2 聚合时间对LPEI-DNA复合物形成的影响
•   2.3 pH对LPEI-DNA复合物形成的影响
•   2.4 N/P对LPEI介导的DNA转染效率的影响
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 马兴宇,叶国根,乔冰珂,赵建军,刘安芳

关键词: 线性聚乙烯亚胺,核酸聚合,体外转染

来源: 西南大学学报(自然科学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 西南大学动物科学学院

基金: 重庆市基础与前沿研究计划项目(cstc2016jcyjA0386),中央高校基本科研业务费(XDJK2018D016)

分类号: Q78

DOI: 10.13718/j.cnki.xdzk.2019.06.005

页码: 28-36

总页数: 9

文件大小: 1731K

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