凝胶过滤层析一步纯化MC-LR Fab的方法及吸附机制初探

论文摘要

为高效制备高纯微囊藻毒素（MC-LR）Fab片段,采用木瓜蛋白酶酶解腹水中纯化获得的单克隆抗体,利用该Fab片段与凝胶过滤层析介质结合的特殊现象分离酶解混合物。通过单因素实验考察流动相中离子强度和pH对Fab片段在柱中保留行为的影响,结合Fab片段等电点（pI）及聚集性质分析二者结合机制。结果表明,腹水经protein G纯化得到纯度大于90%的IgG,IgG经木瓜蛋白酶酶解,主要产物为Fab片段、Fc片段和少量IgG,酶解混合物经凝胶过滤层析一步纯化获得纯度为94.5%,回收率为51%,对MC-LR抑制率为94%的Fab片段。Fab片段pI为6.02,由于表面较强疏水性产生聚集,疏水吸附导致Fab片段与凝胶过滤层析介质结合,降低流动相中离子强度,减弱疏水作用同时提高pH增强离子排阻作用可使Fab片段消除吸附,实现了Fab片段的高效制备。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 MC-LR单克隆抗体的制备及酶解
•     1.2.2 凝胶过滤层析纯化酶解液及Fab片段纯度、收率分析
•     1.2.3 间接ELISA检测Fab片段效价与抑制
•     1.2.4 Fab片段与S-75填料结合机制分析
• 2 结果与分析
•   2.1 IgG纯化和酶解片段的电泳分析
•   2.2 Fab片段的纯化
•   2.3 Fab片段效价与抑制测定
•   2.4 Fab片段与S-75填料结合机制研究
•     2.4.1 Fab片段聚集研究
•     2.4.2 Fab片段pI测定
•     2.4.3 Fab片段在不同缓冲液下的凝胶过滤层析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 焦文阳,陆宁,王兰腾,关甜,雷红涛,沈兴

关键词: 抗原结合片段,凝胶过滤层析,纯化,疏水作用

来源: 食品工业科技 2019年21期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 化学

单位: 华南农业大学食品学院

基金: 国家自然科学基金(31601555)

分类号: O658.1;O647.31

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.21.014

页码: 84-89

总页数: 6

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