pSim6质粒与新型反选择kil系统联用在重组工程的应用

论文摘要

基因工程中,无痕修饰是一种很受欢迎的基因组操作技术。反选择系统的严谨性决定了无痕修饰的效率。近期有文献报道了一种新型的反选择系统kil,该系统与质粒pSim6联用后反选择严谨性较pKD46质粒更高,预示着kil与pSim6质粒联用可以更高效地选择出重组子。据此,对大肠杆菌菌株W3110、MG1655和DH10B中的4个不同的非必需基因位点(lacI、dbpa、ack和glk)进行了分析,将不同长度的外源基因片段对预先插入这些位点的tet/kil进行基因替换。结果表明kil与pSim6质粒联用较其与pKD46质粒联用,重组效率均有显著提高,并且随着外源片段的增长,效果更明显。外源片段为1 000 bp时,kil与pSim6质粒联用是其与pKD46联用的1.2–2倍;外源片段为2 000 bp时,则是pKD46的2.2–5倍。综上,kil与pSim6联用具有更高的重组效率,更有利于大肠杆菌基因组的无痕修饰操作,这为大肠杆菌重组工程提供了更多的选择。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李玉娟,陈如意,杨缅峰,陈伟

关键词: 重组系统,选择反选择系统,无痕修饰,大肠杆菌

来源: 生物工程学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室

基金: 广东省科技计划项目(No.2015A01017014)资助,国家自然科学基金(No.31501895)~~

分类号: Q78

DOI: 10.13345/j.cjb.190079

页码: 1761-1770

总页数: 10

文件大小: 2041K

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本文来源: https://www.lunwen90.cn/article/551893380478985599e3401b.html