慢病毒介导牛pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型建立研究

论文摘要

为了通过慢病毒感染的方法建立pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型,从而研究miR-29b在动物模型体内过表达对牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）感染和复制的影响,试验根据miRBase数据库中牛miR-29b前体pre-miR-29b序列设计引物,以MDBK细胞全基因组DNA为模板,PCR扩增pre-miR-29b基因,并克隆至空质粒pLL3.7中;共同转染pLL3.7-pre-miR-29b及慢病毒包装辅助质粒（pRSV-Rev、pCMV-VSVG和pMDLg/pRRE）至HEK-293T细胞中,于48,72小时时收集病毒液,浓缩后接种至HEK-293T细胞中进行慢病毒效价测定。将6只Balb/c小鼠平均分成2组,即空质粒pLL3.7感染组和慢病毒pLL3.7-pre-miR-29b感染组,每只小鼠尾静脉注射5.0×107 infection units（IU）/mL病毒液,于注射后96小时时处死小鼠,采集肝脏、脾脏、肾脏等器官,提取总miRNA,并反转录成cDNA,使用TaqMan荧光定量RT-PCR法检测miR-29b在小鼠不同器官中的表达情况。结果表明:试验成功扩增得到牛pre-miR-29b并构建出pLL3.7-pre-miR-29b;成功包装pLL3.7-pre-miR-29b慢病毒,其效价为5.8×108IU/mL;经尾静脉注射慢病毒后,在慢病毒pLL3.7-pre-miR-29b感染的小鼠不同器官中均有较高水平的miR-29b表达。说明试验成功建立了慢病毒介导牛pre-miR-29b表达的Balb/c小鼠模型。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 试验动物
•   1.2 细胞和细菌
•   1.3 载体
•   1.4 主要试剂
• 2 方法
•   2.1 pLL3.7-pre-miR-29b慢病毒载体的构建
•     2.1.1 引物的设计与合成
•     2.1.2 MDBK细胞DNA提取
•     2.1.3 PCR扩增
•     2.1.4 pLL3.7-pre-miR-29b的构建
•   2.2 慢病毒包装和效价的测定
•     2.2.1 慢病毒包装
•     2.2.2 慢病毒效价测定
•   2.3 慢病毒注射Balb/c小鼠及miR-29b表达情况的检测
•     2.3.1 慢病毒注射Balb/c小鼠
•     2.3.2 Balb/c小鼠器官采集及miRNA提取
•     2.3.3 TaqMan 荧光定量RT-PCR检测miR-29b表达情况
• 3 结果与分析
•   3.1 pLL3.7-pre-miR-29b慢病毒载体的鉴定
•   3.2 慢病毒包装和效价测定
•   3.3 miR-29b表达情况检测
• 4 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田瑞鑫,王勇,关团,史慧君,史梦婷,张辉,陈创夫,付强

关键词: 慢病毒,前体,小鼠,尾静脉注射,荧光定量,牛病毒性腹泻病毒

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年15期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室,新疆农业大学动物医学学院,石河子大学动物科技学院,哈密市动物疫病预防控制中心

基金: 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室2016年度开放课题项目(2016BTDJ01,2016BTDJ02)

分类号: Q78;S852.653

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.12.0050

页码: 23-27+177

总页数: 6

文件大小: 415K

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