中华绒螯蟹金属硫蛋白基因在A549细胞中的表达及鉴定

论文摘要

目的:克隆中华绒螯蟹金属硫蛋白（metallothionein,MT）基因至真核表达载体,表达蛋白,为进一步研究中华绒螯蟹金属硫蛋白的结构和功能打下基础。方法:设计特异性引物,PCR扩增得到MT基因编码序列,定向克隆至带GFP标签的真核表达载体p EGFP-C1,双酶切及测序鉴定重组质粒后转染A549细胞,荧光观察及Western Blot检测目的蛋白表达情况。结果:通过双酶切和测序确认成功构建了中华绒螯蟹MT基因的真核表达载体;重组质粒转染A549细胞24 h后观察到了绿色荧光,细胞裂解物经过Western Blot检测到符合预期的MT-GFP融合蛋白特异性条带。结论:成功构建了中华绒螯蟹MT基因的真核表达载体,证实了该基因能在A549细胞中成功表达,为进一步研究MT的结构功能打下了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 载体与细胞
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 构建表达载体
•     1.2.2 pEGFP-MT转染A549细胞
•     1.2.3 荧光观察及Western Blot鉴定
• 2 结果
•   2.1 MT基因的PCR扩增
•   2.2 菌落PCR及双酶切鉴定
•   2.3 重组质粒的测序结果
•   2.4 p EGFP-MT质粒转染A549细胞后的荧光观察
•   2.5 MT蛋白的Western Blot鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邓小亮,钟秋珍,付欣,洪玮,谭茵,马文康

关键词: 中华绒螯蟹,金属硫蛋白,表达

来源: 广州医科大学学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 广州医科大学生命科学学院

基金: 国家自然科学基金(81500043),广州医科大学校级资助项目(L1751002)

分类号: Q78

页码: 1-5

总页数: 5

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