肠道轮状病毒巢式PCR检测方法的建立及初步应用

论文摘要

目的 建立一种特异性和灵敏度高的检测婴幼儿腹泻粪便标本中肠道轮状病毒（RV）的巢式PCR方法,并探讨其在临床诊断中的初步应用价值。方法 根据RV保守区基因序列并利用Primer5.0软件设计巢式PCR两对引物,建立一种特异性和灵敏度高的检测RV的巢式PCR方法,并评价其特异度和敏感度。同时采用所建立的巢式PCR法对136份临床样品进行检测,并用单一的RT-PCR法、胶体金和基因序列法进行结果验证。结果 巢式PCR法只扩增检测出192 bp的RV特异性条带,对其他肠道病毒均呈阴性反应,特异性好;巢式PCR法最低能检测到8.705 fg/μL的RV;巢式PCR法与单一的RT-PCR法检测结果符合率为100%,但灵敏度低于胶体金法,差异有统计学意义（χ2=2.615,P<0.05）;将巢式PCR法扩增的RV产物进行核苷酸正反向测序,经BLAST比对,RV与EU679386、DQ870492、AF531912等20多株已知序列的同源性为98%～100%。结论 建立了检测肠道病毒RV的巢式PCR法,具有特异性强、灵敏度高,且检测快速,值得临床推广应用。

论文目录

• 材料与方法
•   1 标本来源
•   2 仪器与试剂
•   3 方法
•     3.1 病毒核酸提取:
•     3.2 引物对的选择:
•     3.3 巢式PCR:
•     3.4 灵敏度试验:
•     3.5 特异度试验:
•     3.6 巢式PCR的应用:
•     3.7 电泳和测序:
•   4 统计学处理
• 结 果
•   1 巢式PCR特异性
•   2 巢式PCR 敏感度
•   3 临床标本检测
•   4 巢式PCR产物鉴定
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘爱玲,刘爱胜,罗小芳,吴敏

关键词: 肠道轮状病毒,巢式,建立,应用

来源: 临床输血与检验 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 临床医学,儿科学

单位: 广东省深圳市龙华区人民医院检验科,广东医学院

基金: 广东省深圳市龙华区科技创新局基金项目(No.2017112),医学检验技术创新研究重点实验室项目(No.20150925A0410015)资助

分类号: R725.1;R440

页码: 604-608

总页数: 5

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