嗜吞噬细胞无浆体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

论文摘要

为建立荧光定量PCR方法检测嗜吞噬细胞无浆体（Anaplasma.phagocytophilum）,针对GenBankA.phagocytophilum 16S rRNA基因保守序列（JN558815）,设计1对引物1-25 F/183-205R。以已知引物EE1/EE2和该引物进行巢式PCR扩增出预期大小片段（205bp）,构建含有16Sr RNA基因的重组质粒,以质粒为模板构建了标准曲线。以1-25 F/183-205R为荧光定量PCR引物,建立了A. phagocytophilum荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样本检测。结果表明,该方法在6.4×103～6.4×108 copies/μL范围内相关系数为0.99,显示出良好的线性关系;所建方法能特异地检出A. phagocytophilum,对绵羊无浆体、牛无浆体和环形泰勒虫基因组DNA和灭菌双蒸水均无交叉反应;可检测到6.4×102copies/μL的标准质粒DNA,比常规PCR敏感性高100倍;批内及批间变异系数均低于2%,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法对30份羊血液临床样品检出率比巢式PCR高16.67%。该研究为A. phagocytophilum临床检测和定量分析病原感染程度奠定了基础。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 样品
•   1.2 主要试剂
•   1.3 引物的设计及合成
•   1.4 重组质粒标准品的制备
•   1.6 标准曲线的绘制
•   1.7 特异性试验
•   1.8 敏感性试验
•   1.9 重复性试验
•   1.1 0 临床样品检测
• 2 结果
•   2.1 阳性标准品的制备
•   2.2 标准曲线的建立及反应条件的优化
•   2.3 荧光定量PCR的特异性试验结果
•   2.4 荧光定量PCR敏感性试验结果
•   2.5 荧光定量PCR重复性试验结果
•   2.6 临床样品检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 国内会议

作者: 崔艳艳,王晓星,张艳,史柯,菅复春,张龙现,王荣军,宁长申

关键词: 嗜吞噬细胞无浆体,荧光定量,基因

来源: 第十六届（2019）中国羊业发展大会暨庆阳农耕文化节 2019-09-16

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学牧医工程学院

分类号: S852.6

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.023215

页码: 160-166

总页数: 7

文件大小: 1985k

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