盐泽螺旋藻藻蓝蛋白裂合酶CpcS的分子克隆及功能研究

论文摘要

为研究盐泽螺旋藻（Spirulina subsalsa）藻蓝蛋白裂合酶CpcS的催化功能,首先通过PCR技术从S. subsalsa FACHB351基因组DNA中扩增藻蓝蛋白裂合酶的编码基因SscpcS,构建表达质粒pCDFDuet-SscpcS,然后再与脱辅基蛋白和色素合成酶表达质粒pETDuet-SscpcB-Ssho1::SspcyA共同转入大肠杆菌BL21（DE3）,并经IPTG（Isopropyl β-D-Thiogalactoside,异丙基硫代半乳糖苷）诱导重组合成藻蓝蛋白。PCR产物测序表明SscpcS扩增成功;双酶切检测和SDS-PAGE电泳分析表明质粒pCDFDuet-SscpcS构建成功,且能表达目的蛋白。重组藻蓝蛋白PCB-CpcB细胞产物为深蓝色;纯化后的色素蛋白展现620 nm的最大吸收峰和646 nm的最大荧光发射峰;色素蛋白通过锌离子染色,在紫外线照射下展现明显荧光。该研究成功克隆源自盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白裂合酶SsCpcS的编码基因,其表达产物SsCpcS能有效催化藻蓝蛋白的生物合成。此研究为S. subsalsa藻蓝蛋白的重组合成及抗氧化试剂的研制奠定基础,也为探明盐泽螺旋藻中CpcS的催化机理提供科学依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 引物设计与分子克隆
•   1.3 蛋白的表达与纯化
•   1.4 SDS-PAGE电泳和色素蛋白锌电泳
•   1.5 光谱分析
• 2 结果与分析
•   2.1 裂合酶SsCpcS编码基因的PCR扩增和质粒构建
•   2.2 裂合酶SsCpcS序列分析
•   2.3 裂合酶SsCpcS的表达
•   2.4 裂合酶SsCpcS的功能
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 盛怡,李慧敏,伍贤军,杨红,朱咏莉,李萍萍

关键词: 盐泽螺旋藻,裂合酶,藻蓝蛋白,重组表达,生物合成

来源: 农业现代化研究 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,经济与管理科学,基础科学

专业: 生物学

单位: 南京林业大学生物与环境学院,南京林业大学江苏省南方现代林业协同创新中心

基金: 国家自然科学基金项目(41977354),江苏省自然科学基金青年基金(BK20150884),江苏省高校优势学科建设工程项目(PAPD)~~

分类号: Q78

DOI: 10.13872/j.1000-0275.2019.0099

页码: 1048-1055

总页数: 8

文件大小: 2604K

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