谷氨酰胺酶基因的克隆、表达和酶学性质研究

论文摘要

以枯草芽孢杆菌基因组为模板通过PCR扩增获得谷氨酰胺酶基因ylaM,构建重组质粒p MA5-ylaM,将其转化到枯草芽孢杆菌168中获得重组菌BS168/pMA5-ylaM,并在宿主菌成功得到表达,纯化后的谷氨酰胺酶比酶活大小为939.48 U/mg。谷氨酰胺酶的反应最适pH为7.5,反应最适温度为55℃,La3+、Zn2+、Fe3+和Al3+对谷氨酰胺酶活力具有一定的抑制作用,在NaCl浓度为15%～17.5%的条件下,该酶酶活力可以保留50%以上。在5 L罐中,通过分批补料发酵,其最高酶活力产量为215.06 U/mL。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 基因组提取，ylaM基因的克隆
•     1.2.2 重组质粒的构建和转化
•     1.2.3 重组菌的谷氨酰胺酶表达和纯化
•     1.2.4 谷氨酰胺酶的酶活测定
•     1.2.5 酶学性质研究
•     1.2.6 5 L罐发酵培养
• 2 结果与讨论
•   2.1 重组载体的构建和表达
•   2.2 谷氨酰胺酶的酶学性质研究
•     2.2.1 反应最适pH和p H稳定性研究
•     2.2.2 反应最适温度和热稳定性研究
•     2.2.3 金属离子和EDTA的影响
•     2.2.4 谷氨酰胺酶的耐盐性研究
•   2.3 5 L罐发酵结果
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张美丹,饶志明,张显,杨套伟,徐美娟

关键词: 枯草芽孢杆菌,谷氨酰胺酶,酶学性质

来源: 食品与生物技术学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室

基金: 国家863计划项目(2015AA021004),国家自然科学基金项目(21276110,31500065,31400082),江苏省青年自然科学基金项目(BK20150142),中国博士后科学基金资助项目(2015M570407,2016T90421),江苏高校优势学科建设工程资助项目

分类号: Q55

页码: 60-66

总页数: 7

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