水稻WRKY转录因子OsWRKY76 RNA干扰载体的构建及表达分析

论文摘要

为研究水稻WRKY蛋白在应对各种生物以及非生物胁迫中发挥的作用,探明OsWRKY76是否参与调控水稻系统获得抗性,明确OsWRKY在植物抗病及耐逆反应过程中的作用机理,对OsWRKY76进行了氨基酸序列分析,发现OsWRKY76具有典型的WRKY结构域,属于WRKY-GCM1锌指WRKY超家族。克隆了OsWRKY76中300 bp的cDNA片段OsWRKY76-300,并扩增GUS基因中500 bp的片段作为连接物,通过片段末端人为增加的酶切位点将上述片段与Gateway系统的入门载体pENTR L16连接,形成中间由GUS 500连接、两端是OsWRKY76-300反向重复的发夹结构的载体,利用LR反应将dsWRKY76 pENTR L16中发夹结构的插入片段分别重组到诱导型双元载体GVG-TA7002和组成型双元载体Ubi-C1300中,获得RNA干扰载体。利用农杆菌介导的转化方法将诱导型双元表达载体转化水稻,获得7个转化株系。利用实时定量RT-qPCR检测转化株系中OsWRKY76的表达量,获得了2个沉默株系。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 载体与试剂
•   1.3 试验方法
•     1.3.1 总RNA提取及反转录
•     1.3.2 OsWRKY76-300片段的克隆
•     1.3.3 GUS片段的克隆
•     1.3.4 OsWRKY76-300 RNAi载体的构建
•     1.3.5 诱导型RNAi载体转化水稻
•     1.3.6 转化株系OsWRKY76表达量检测
• 2 结果与分析
•   2.1 OsWRKY76序列分析
•   2.2 OsWRKY76-300的克隆与鉴定
•   2.3 GUS片段的克隆与鉴定
•   2.4 OsWRKY76 RNAi载体的构建
•   2.5 OsWRKY76沉默株系的获得
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王双,杨瑞,白薇

关键词: 水稻,转录因子,干扰,载体构建,表达分析

来源: 华北农学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农作物

单位: 内蒙古农业大学植物逆境生理与分子生物学自治区重点实验室,内蒙古赛科星繁育生物技术(集团)股份有限公司

基金: 国家自然科学基金项目(31560535)

分类号: Q943.2;S511

页码: 9-13

总页数: 5

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