对硫磷纳米抗体筛选及分子识别机制研究

论文摘要

对硫磷是一种广谱的有机磷酸酯类杀虫、杀螨剂,毒性极强,可对环境和人类健康造成严重危害。尽管我国已禁止使用对硫磷,但仍存在违禁使用现象,加强对其监测十分必要。纳米抗体是已知最小的与抗原结合的片段（15 kDa）,来源于骆驼科动物体内重链抗体的可变区,具有稳定性强、灵敏度高、易表达、水溶性好等特性。本研究基于噬菌体展示技术构建了抗对硫磷纳米抗体库,其库容为2.41×107cfu/mL,经抗原-抗体固相亲和筛选及噬菌体酶联免疫法（Phage ELISA）鉴定,获得5种抗对硫磷纳米抗体VHH1、VHH6、VHH13、VHH21和VHH24。以结合能力最强的VHH1为基础,采用同源建模和分子对接技术探讨VHH1与对硫磷分子的识别机制,发现VHH1与对硫磷存在氢键和疏水间分子作用力,关键氨基酸是Ser60、Lys104、Phe105、Gly106和Arg107。本研究为抗体的进化改造和半抗原的设计提供了新思路。

论文目录

• 1 引 言
• 2 实验部分
•   2.1 仪器与试剂
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 羊驼免疫和抗血清检测
•     2.2.2 抗对硫磷噬菌体展示纳米抗体库构建
•     2.2.3 抗对硫磷噬菌体展示纳米抗体库筛选与鉴定
•     2.2.4 纳米抗体氨基酸序列的测定和分析
•     2.2.5 分子模拟
• 3 结果与讨论
•   3.1 羊驼抗血清效果检测
•   3.2 纳米抗体库的构建
•   3.3 纳米抗体库筛选与鉴定
•   3.4 氨基酸序列分析
•   3.5 同源建模
•   3.6 分子对接
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张玉琪,张瑾如,王锋,李家冬,司睿,吕丽珊,沈玉栋,王弘,HAMMOCK Bruce D,孙远明

关键词: 纳米抗体,对硫磷,噬菌体展示,分子模拟

来源: 分析化学 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,农业科技

专业: 有机化工,材料科学,植物保护

单位: 华南农业大学食品学院,广东省食品质量与安全重点实验室,畜禽产品精准加工与安全控制技术国家地方联合工程研究中心(广东),Department of Entomology and UCD Comprehensive Cancer Center,University of California,Davis

基金: 十三五重点研发计划项目(Nos.2016YFE0106000,2018YFC1602904),广州市科技计划项目(No.201804020077),广东省重点领域研发计划项目(No.2019B020211002),广东省高等学校珠江学者岗位计划项目(2017)资助~~

分类号: TB383.1;TQ450.1

DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.181772

页码: 1419-1428

总页数: 10

文件大小: 2812K

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