番茄煤污假尾孢叶斑病菌实时荧光定量PCR检测技术的建立及应用

论文摘要

为快速、准确地对番茄煤污假尾孢Pseudocercospora fuligena进行检测与定量分析,基于其Avr4基因设计特异性引物JWB-9F/JWB-7R,建立实时荧光定量PCR检测技术,分析该检测技术的特异性和灵敏度,并利用采集自重庆市、河北省和广西壮族自治区的14份材料对该检测技术的应用效果进行验证。结果表明,引物JWB-9F/JWB-7R仅可从番茄煤污假尾孢基因组DNA中扩增出232 bp的目的片段,特异性良好;实时荧光定量PCR检测技术的灵敏度为67.09 copies/μL,是普通PCR检测技术的1 000倍。且该实时荧光定量PCR检测技术可以实现未显症样本中番茄煤污假尾孢的定量检测,检测限为6.02×102copies/μL,实际应用效果较好。表明所建立的实时荧光定量PCR检测技术可用于番茄煤污假尾孢叶斑病的早期诊断和预测预报。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 供试菌株基因组DNA的提取
•     1.2.2 特异性引物的设计及验证方法
•     1.2.3 普通PCR与qPCR的灵敏度比较
•     1.2.4 qPCR标准曲线的建立
•     1.2.5 人工模拟接种发病样本的定量检测
•     1.2.6 田间发病样本病原菌的定量检测
• 2 结果与分析
•   2.1 特异性引物的设计与验证结果
•   2.2 普通PCR与qPCR的灵敏度比较
•   2.3 qPCR标准曲线的建立
•   2.4 人工模拟接种番茄叶片上煤污假尾孢定量检测
•   2.5 田间病害样本中病原菌的定量检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 康华军,柴阿丽,石延霞,谢学文,郭建光,李宝聚

关键词: 煤污假尾孢,实时荧光定量,检测

来源: 植物保护学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 植物保护,园艺

单位: 中国农业科学院蔬菜花卉研究所

基金: 国家重点研发计划(2017YFD0200300),中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-IVFCAAS),农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室开放课题(IVF2017)

分类号: S436.412.1

DOI: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2019.2018216

页码: 1214-1221

总页数: 8

文件大小: 2160K

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