能源甜菜BvGST基因在大肠杆菌体内对镉逆境的应答特性分析

论文摘要

为了进一步研究BvGST基因（LOC104898671）在能源甜菜耐受重金属镉逆境胁迫过程中的功能,明确其在细胞解毒镉离子中的作用和应答特性,本研究以780016B/12优为植物材料,通过RT-PCR的方法将BvGST基因克隆并构建于大肠杆菌原核表达载体pEASY-Blunt E1上,并转化到大肠杆菌BL21中。SDS-PAGE电泳表明,通过1 mmol/L IPTG诱导,在重组菌BL21总蛋白的25.9 kDa左右的位置上,获得了大肠杆菌his tag-BvGST的融合蛋白。当施加0.5 mmol/L CdCl2逆境胁迫后,表达BvGST蛋白的重组菌表现出优于对照菌的生长状态;与此同时,大量表达BvGST的大肠杆菌体内的GST酶活性也要远高于对照。这说明,能源甜菜BvGST基因通过在E. coli体内大量表达高活性的谷胱甘肽转移酶,来解毒细胞内由镉胁迫带来的氧化伤害,从而提高大肠杆菌对Cd的耐受性。研究结果暗示了能源甜菜BvGST在镉逆境胁迫分子机制中发挥着重要作用。

论文目录

• 0 引言
• 1 材料与方法
•   1.1 实验时间、地点
•   1.2 实验材料
•   1.3 实验方法
•     1.3.1 RNA的提取
•     1.3.2 RT-PCR
•     1.3.3 大肠杆菌原核表达重组质粒的构建
•     1.3.4 融合蛋白的诱导表达
•     1.3.5 Cd逆境下大肠杆菌耐受性分析
•     1.3.6 GST酶活性测定
• 2 结果与分析
•   2.1 pEASY-Blunt E1-BvGST大肠杆菌原核表达载体的构建
•   2.2 His tag-BvGST融合蛋白的诱导表达
•   2.3 重组菌的Cd逆境耐受性分析
•   2.4 重组菌体内的GST酶活性分析
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘大丽,李林,王锦霞,马龙彪,鲁振强

关键词: 能源甜菜,镉逆境,基因,活性,大肠杆菌

来源: 中国农学通报 2019年36期

年度: 2019

分类: 农业科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 环境科学与资源利用,植物保护,农作物

单位: 黑龙江大学省高校甜菜遗传育种重点实验室/农作物研究院,黑龙江大学黑龙江省甜菜工程技术研究中心/农作物研究院,黑龙江大学省高校生化与分子生物学重点实验室/生命科学学院

基金: 国家自然基金青年基金项目“能源甜菜应答重金属Cd逆境胁迫分子机制的转录组学研究及差异表达基因功能鉴定”(31601229),黑龙江省自然基金“BvHIPP24基因在能源甜菜重金属镉污染生物修复中的分子机制研究”(LH2019C057),农业部糖料现代产业技术体系建设项目“甜菜高品质品种改良”(CARS-170111),农业部糖料现代产业技术体系建设项目“甜菜养分管理与土壤肥料”(CARS-170204)

分类号: S566.3;X503.231

页码: 116-121

总页数: 6

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