导读:本文包含了胚胎聚合论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:五指山小型猪,巴马,嵌合体,受体母猪
胚胎聚合论文文献综述
龙川,纪慧丽,冯冲,石宁宁,高景波[1]（2016）在《早期胚胎的卵裂球聚合制备GFP示踪的嵌合体小型猪》一文中研究指出引言/目的日本科学家将大鼠多功能干细胞注入小鼠囊胚,在敲除Pdx1基因的胰腺缺失小鼠体内生长出大鼠胰腺,成功生成种间嵌合体。表明异种器官移植未来通过基因编辑技术与嵌合体技术结合在动物体内长出人类器官成为可能,而小型猪的生理特征和器官大小与人类相似,因此利用小型猪作为受体生长出人类器官更具优势。本研究利用早期胚胎卵裂球聚(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集》期刊2016-08-18）
纪慧丽[2]（2016）在《核移植胚胎聚合法制备嵌合体猪》一文中研究指出猪,尤其是小型猪在体型大小、消化代谢和基因组等方面都与人的极为相似,是人类疾病模型和异种器官移植研究的首选动物；通过胚胎补偿的方法制作嵌合体,是在猪体内长出人源化器官研究的重要技术手段。体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)是目前获得转基因个体的重要技术手段,本研究利用Primo Vision Time-Lapse时差分析系统观察猪体细胞核移植胚胎的体外发育,选择合适时期的胚胎进行聚合制备嵌合体小型猪的研究。1、利用Primo Vision Time-Lapse时差分析系统观察猪SCNT胚胎的体外发育,统计克隆胚胎与孤雌胚胎早期发育的卵裂时间及发育到囊胚期的时间,并比较微孔培养与微滴培养体系SCNT胚胎的发育。结果显示克隆胚胎2-、4-、8-、16-细胞的卵裂时间分别为18.5+3.5 h、35±4 h、67.5±3.5 h、80±4.5 h,与孤雌胚胎的卵裂时间没有显着性差异,而克隆胚胎发育到囊胚期的时间显着延长(108±8 h vs.96±6 h)；微孔与微滴培养体系的克隆胚胎不同时期的卵裂率逐渐下降,两种体系之间没有显着性差异,但微滴培养的囊胚率显着高于微孔胚胎体系(26.9%vs.16.7%)。2、比较不同时期SCNT胚胎聚合制作嵌合体效率,发现SCNT胚胎中4-8细胞胚胎的获得率为49.5%(657/1326),8-16细胞胚胎的获得率只有33.9%(499/1474),4-8细胞胚胎的聚合效率显着高于8-16细胞胚胎的聚合效率(23.9%vs.20.0%),而4-8细胞胚胎聚合获得囊胚及嵌合囊胚效率与8-16细胞的聚合效率没有显着差异(54.1%vs.56.O%；38.8%vs.37.5%),因此,选择4-8细胞期胚胎制备嵌合体猪。分别以表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的雄性五指山猪WPF19和雌性五指山猪1220耳成纤维细胞,以及雌性巴马小型猪BMM2耳成纤维细胞为供核细胞进行SCNT,胚胎发育至4-8细胞阶段时,两种胚胎以2：2比例进行聚合,772枚聚合胚胎有391枚发育至囊胚(50.6%),387枚囊胚移植到5头受体母猪,4头怀孕并到妊娠终期,获得2头具有明显毛色嵌合的小型猪。通过荧光及微卫星分析,死亡小猪的皮肤、心脏和肾脏存在嵌合特征。(本文来源于《广西大学》期刊2016-06-01）
赵静[3]（2016）在《DNA聚合酶βR137Q突变影响小鼠胚胎发育的研究》一文中研究指出脱氧核糖核酸(DNA)是生命遗传信息的载体。DNA分子的完整性和稳定性对于细胞的存活和正常的生命活动具有重要意义。DNA聚合酶β(Polβ)是碱基切除修复途径中的关键酶,在维持基因稳定性和完整性的过程中起着重要作用。PolβR137Q位点是将Polβ的第137位精氨酸替换成谷氨酰胺,实验室前期研究已经发现该位点突变会降低DNA碱基切除修复效率,而降低DNA碱基切除修复效率的分子机制目前还不清楚。本研究通过经典的基因打靶的方法成功获取了R137Q突变的转基因小鼠。我们研究发现,R137Q突变的纯合小鼠的出生率显着低于野生型对照小鼠,对孕鼠进行解剖后发现,R137Q小鼠E15.5,E17.5和E19.5天的胚胎体型和体重都显着低于野生型小鼠胚胎。免疫组化实验表明,R137Q小鼠胚胎增殖显着低于野生型小鼠。胚胎成纤维细胞(MEFs)的细胞生长曲线进一步证实了免疫组化实验的结果。我们对磷酸化细胞周期检验点蛋白pCHK1进行检测后发现,pCHK1在R137Q细胞中的表达量显着高于对照组,表明R137Q细胞周期检验点被激活。同时,TUNEL凋亡测定发现,R137Q细胞存在更高的凋亡比例。R137Q细胞增殖较慢并且凋亡增加同时细胞周期检验点被激活,而只有当细胞周期异常时检验点才会被激活,基于此我们观察DNA结构是否发生变化。通过核型分析发现,R137Q细胞内存在更多的染色体断裂。考虑到Polβ是碱基切除修复中的关键酶,Polβ位点突变可能会影响DNA碱基切除修复能力。于是我们采用组织裂解液和原代胚胎成纤维细胞裂解液来重构短片段碱基切除修复(SP-BER)和长片段碱基切除修复(LP-BER)过程。实验结果显示,与WT相比,R137Q小鼠的组织和细胞裂解液均不能有效修复DNA损伤,R1 37Q细胞BER修复效率明显降低,提示细胞内的DNA损伤修复系统出现障碍。伴随着R137Q细胞碱基切除修复效率的降低,细胞进行DNA修复时产生大量的DNA中间产物如DNA断裂,免疫印迹和免疫荧光实验结果显示R137Q细胞存在着更多的DNA双链断裂。我们之前体外的研究已经表明,R137位点的突变导致了Polβ聚合酶活性的降低和碱基切除修复效率的下降。该结果表明体内的R137Q突变影响了聚合酶活性和碱基切除效率,进而导致了DNA双链断裂和染色体异常。此外,我们通过烷化剂和氧化剂处理细胞来模拟正常生理条件下细胞所受的各类DNA损伤刺激。结果发现,当用MMS和双氧水分别处理纯合子的R137QMEFs,杂合子WT/R137Q MEFs和野生型WT MEFs之后,R137Q纯合子MEFs的生存率大大降低,磷酸化的组蛋白H2AX表达量显着增加,这一结果表明,R137Q突变增加了细胞对DNA损伤试剂的敏感性,诱发了更多的DNA损伤。综上,我们的实验通过R137Q的转基因小鼠,用体内的实验结果证明,R137是Polβ的关键位点,R突变成Q导致了Polβ功能受损,DNA修复能力下降以及基因组的不稳定,最终引起了细胞和小鼠整体的生理功能异常。我们的结果再次证实了Polβ结构和功能的完整性对于维持生物体正常生命活动的重要作用。本研究不仅有助于我们对于Polβ在肿瘤和其他相关疾病中作用机制的理解,同时为预防和治疗DNA修复相关疾病提供新的理论依据及新的靶点。(本文来源于《南京师范大学》期刊2016-04-18）
宋司航,王振东,单智焱,孙瑞珍,刘春佳[4]（2015）在《多个胚胎聚合对小鼠孤雌胚胎干细胞印记基因表达影响的研究》一文中研究指出小鼠孤雌胚胎干细(PgESCs)能作为种子细胞应用于细胞治疗,避开了伦理和道德的限制,但其建系效率低。课题组前期研究发现,两个8-cell时期小鼠孤雌胚胎聚合后培养至囊胚期分离内细胞团建立孤雌聚合胚胎干细胞(a2PgESCs)的效率显着升高且父源表达的印记基因明显上调。在此基础上,本研究提出增加聚合的胚胎数目并提早聚合的时期可能会(本文来源于《中国解剖学会2015年年会论文文摘汇编》期刊2015-08-08）
武建中,田青[5]（2015）在《聚合酶链式反应在小鼠雄性胚胎性别鉴定中的优化研究》一文中研究指出为了提高聚合酶链式反应(PCR)在小鼠雄性胚胎性别鉴定中的应用效果,试验利用单一扩增雄性特有Sry基因法选取60枚雄性胚胎,将其中40枚平均分为2组,试验组1利用双重基因扩增法进行复检,试验组2利用两步双重基因扩增法进行复检,比较这2种方法对雄性胚胎的鉴定效果;利用两步双重基因扩增法分别以1,2,3个卵裂球模板量对其余20枚雄性胚胎进行体外扩增,确定卵裂球的适宜使用量。结果表明:利用两步双重基因扩增法进行雄性胚胎判定的准确率为100%,显着高于双重基因扩增法的准确率(85.00%)(P<0.05)。以3个卵裂球作为模板时的准确率为100%,可以成功复检所有雄性胚胎。因此,利用两步双重基因扩增法可以有效对小鼠雄性胚胎进行性别鉴定。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2015年09期）
武迪迪,具英花,孟峻,刘超,冯晨[6]（2011）在《激光共聚焦显微镜观察小鼠早期胚胎中PKB/Akt对微丝聚合的影响》一文中研究指出在本实验中我们用优化的免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微技术,观察了微丝在小鼠卵细胞不同期的分布情况及PKB/Akt对小鼠卵母细胞和早期胚胎的微丝聚合的影响。结果显示,在小鼠卵母细胞及早期胚胎中均有微丝的表达,且主要集中在纺锤体处的质膜处、极体及分裂沟处。注射激活型PKB/Akt mRNA能够增强微丝的聚集。相反,注射激酶失活型的PKB/AktmRNA减弱了微丝的聚合。因而我们认为PKB/Akt可以影响小鼠卵细胞和早期胚胎的微丝聚集。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2011年03期）
刘卫生,王英杰,张世昌,刘涛[7]（2008）在《胚胎干细胞在可降解聚合叁维支架上的生长增殖与分化》一文中研究指出目的:叁维可降解生物材料是组织工程的重要载体,观察胚胎干细胞在聚合叁维支架上的生长、增殖和分化状态,为胚胎干细胞分化形成任何组织修复替代治疗机体组织器官的损伤和功能衰竭提供实验学依据。方法:实验于2007-05/09在解放军第叁军医大学西南医院感染病研究所人工肝实验室完成。①材料:鼠胚胎干细胞CCE株为加拿大Stem Cell Technologies公司产品,由聚乳酸和聚乙醇酸聚合而成的非编织型叁维支架为美国Synthecon公司产品,细胞外基质Matrigel TM由BD Biosciences公司提供。②实验方法:将鼠胚胎干细胞株接种于被覆明胶的培养瓶内,加入含0.1mmol/L非必需氨基酸、2mmol/LL-谷酰胺、0.1mmol/L二羟基丙硫醇、15%胎牛血清、1000U/mL白血病抑制因子的IMDM培养液。3d后采用"悬滴法"使细胞在不含白血病抑制因子的上述IMDM培养液中形成胚胎体,6d后胰酶消化得到胚胎干细胞,浓度调整为(3~4)×109L-1,与Matrigel TM按1∶1混合并接种于剪成5mm×4mm×1mm小片的叁维支架内,加入含1%二甲基亚酚、10-7mol/L地塞米松、5mg/LITS、15%胎牛血清的IMDM培养液进行诱导分化。③实验评估:激光共聚焦显微镜观察胚胎干细胞在叁维支架上的生长与增殖情况;应用荧光染色检测细胞活性;苏木精-伊红染色光镜下观察胚胎干细胞的组织分化情况。结果:①细胞生长与增殖:接种培养1d多数胚胎干细胞粘连在一起形成聚集体,状似球形,附着于叁维支架的纤维上。7d时聚集的胚胎干细胞开始沿纤维支架生长,互相粘连,呈片状和网状。细胞数随培养时间延长而不断扩大,至14d细胞交织在一起呈现多层面立体景象,布满整个叁维支架。②活细胞观察:接种培养1,7,14d的胚胎干细胞绝大多数发出绿色荧光,始终保持良好的细胞活性。③胚胎干细胞的组织分化:在非特异诱导培养液作用下,胚胎干细胞可向原始血细胞样细胞、血管样结构、软骨样结构和腺样结构分化。结论:胚胎干细胞能够附着于可降解聚合叁维支架上生长增殖,并在保持细胞活性的情况下呈现向多细胞、多组织分化的良好态势。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2008年14期）
关云谦,蔡彦宁,谢淑,朱宛宛,徐艳玲[8]（2006）在《利用巢式聚合酶链反应检测单个胚胎小体细胞中时钟基因的表达》一文中研究指出目的建立一组灵敏的检测时钟基因(c lock gene)的巢式聚合酶链反应(nested PCR)方法,并检测小鼠胚胎小体(EB)来源的单细胞中重要时钟基因的表达情况。方法培养小鼠胚胎干细胞(mESC),体外诱导分化为EB,提取总RNA并进行反转录,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特异引物进行巢式聚合酶链反应,电泳检测扩增产物,从而建立相应的巢式PCR反应体系。利用膜片钳获取胚胎小体来源的单个细胞,通过巢式PCR反应检测相应时钟基因的表达情况。结果确定了BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因的扩增参数。证明在此条件下无非特异扩增,并且能够检测到至少两个拷贝的目的分子。利用此检测体系发现,部分胚胎小体细胞中BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2时钟基因环路不完整。结论巢式PCR方法能够灵敏地、而且特异地从单细胞中检测出一组时钟基因的表达,时钟基因的转录在胚胎小体细胞中并不一致,即时钟基因的环路不完整。时钟基因可能在细胞分化过程中发挥着某种作用。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2006年12期）
华云芳[9]（2005）在《聚合法制作猪嵌合胚胎初步研究》一文中研究指出嵌合体是由两个或两个以上具有不同遗传性状的胚胎(细胞)结合在一起发育而成的个体。嵌合体的制作主要有囊胚注入法和聚合法两种。相比较而言,聚合法操作简单,但成功率较低,究其原因,主要是因为胚胎聚合是建立在发育相对同步化胚胎的基础上,而同时获得这种胚胎较为困难;另外,聚合过程中各个环节的技术性和操作性都很强,影响因素很多,比如透明带去除,胚胎聚合条件、聚合胚的培养液和培养环境等。近年来随着干细胞技术的快速发展和应用潜力的不断显现,通过个体间的胚胎嵌合技术获得具有组织相容性的胚胎干细胞,业已成为解决众多医学问题的有效途径,因此,同品种内不同个体间胚胎的相互嵌合已经成为汇聚该途径的焦点。然而,胚胎嵌合技术成功率低的问题严重地制约了这一技术领域的快速发展。本实验通过对嵌合技术主要环节,如透明带去除、聚合浓度选择、聚合胚胎发育时期选择、聚合体系建立以及培养方法创新等方面进行系统研究,探讨其对品种内个体间胚胎聚合法猪嵌合体制作的影响,旨在摸索出一套适宜的猪嵌合体胚胎制作程序,以提高聚合胚胎的发育率,延长聚合胚胎的发育阶段。研究结果如下: 1 猪嵌合胚制作中透明带去除研究 实验采用酸性台氏液、0.25%链霉蛋白酶液、0.3%链霉蛋白酶液、0.5%链霉蛋白酶液四种去除透明带液(以下简称去带液)对不同个体8细胞胚胎进行去除透明带处理,以获得的裸胚率、聚合率及聚合胚发育率为指标,判断四种去带液对胚胎聚合效果的影响。结果表明:在四个处理组中,获得裸胚率最高的是0.3%链霉蛋白酶液处理组(14/17,82.4%),差异显着(P<0.05):获得裸胚率最低的是酸性台氏液处理组(8.5/16,53.1%),差异显着(P<0.05):0.25%链霉蛋白酶液(9/13,69.2%)和0.3%链霉蛋白酶液处理组(10/14,71.4%)的聚合率显着高于酸性台氏液(5/8.5,53.1%)和0.5%链霉蛋白酶液处理组(7/11,63.6%)(P<0.05):0.259%链霉蛋白酶液(6/9,66.7%)和0.3%链霉蛋白酶液处理组(7/10,70.0%)聚合胚的发育率高于酸性台氏液(1/5,20.0%)和0.5%链霉蛋白酶液(3/7,42.9%),差异显着(P<0.05),酸性台氏液处理组的聚合胚的发育率显着低于其他叁组(P<0.05)。由上可知,用0.3%的链霉蛋白酶处理对猪胚胎透明带进行处理时的效果较好,获得的裸胚率、聚合率和聚合胚发育率均较高。 2 猪胚胎聚合液浓度研究 实验通过观察叁种浓度的植物凝集素(0.03%PHA、0.06%PHA、0.12%PHA)对猪胚胎聚合的处理情况,依据聚合率和聚合胚发育率判断不同PHA浓度对聚合效果的影响。结果表明:随着PHA浓度的升高,胚胎的聚合率逐渐增加,依次为:11/17(64.7%),12/16(75.0%),14/18(77.8%):而0.06%PHA处理组的聚合胚发育率(9/12,75.0%)显着高于0.03%PH～7/11,63.6%)和0.12%PHA处理组(9/14,64.3%)(P<0.05)。故为得到较高的聚合率和聚合胚的发育率,制作猪嵌合胚时应选用0.06%PHA进行胚胎的聚合。(本文来源于《西南农业大学》期刊2005-05-20）
周汝江,陈建泉,胡以平,成国祥[10]（2005）在《小鼠遗传背景对4n胚胎及2n-4n聚合胚制作效率的影响》一文中研究指出不同品系小鼠的 2 细胞期胚胎 (二倍体 ,2n) ,经电融合后 ,获得发育的 4 细胞期四倍体胚胎 (4n)的能力上存在着差异。将不同品系小鼠的 2n、 4n胚胎分别配对作聚合 ,所获 2n 4n聚合胚的发育结果表明 :在着床前 ,2n 4n聚合胚的获得率因胚胎品系组合的不同而异 ;胚胎移植后 ,聚合胚在与 4n胚胎相同或相近品系的移植受体中 ,其着床率较高 ;在着床后胎儿及出生仔鼠的获得率上 ,采用遗传杂合性的 2n胚胎所组成的 2n 4n聚合组合较高。上述结果提示 :小鼠的遗传背景可影响到 4n胚胎及相应 2n 4n聚合胚的制作效率。以GFP标记跟踪2n 4n聚合胚 4n细胞着床后的发育命运 ,发现 :妊娠中后期的孕体中 ,4n细胞限制性地分布至胚外组织(本文来源于《动物学报》期刊2005年01期）
胚胎聚合论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
猪,尤其是小型猪在体型大小、消化代谢和基因组等方面都与人的极为相似,是人类疾病模型和异种器官移植研究的首选动物；通过胚胎补偿的方法制作嵌合体,是在猪体内长出人源化器官研究的重要技术手段。体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)是目前获得转基因个体的重要技术手段,本研究利用Primo Vision Time-Lapse时差分析系统观察猪体细胞核移植胚胎的体外发育,选择合适时期的胚胎进行聚合制备嵌合体小型猪的研究。1、利用Primo Vision Time-Lapse时差分析系统观察猪SCNT胚胎的体外发育,统计克隆胚胎与孤雌胚胎早期发育的卵裂时间及发育到囊胚期的时间,并比较微孔培养与微滴培养体系SCNT胚胎的发育。结果显示克隆胚胎2-、4-、8-、16-细胞的卵裂时间分别为18.5+3.5 h、35±4 h、67.5±3.5 h、80±4.5 h,与孤雌胚胎的卵裂时间没有显着性差异,而克隆胚胎发育到囊胚期的时间显着延长(108±8 h vs.96±6 h)；微孔与微滴培养体系的克隆胚胎不同时期的卵裂率逐渐下降,两种体系之间没有显着性差异,但微滴培养的囊胚率显着高于微孔胚胎体系(26.9%vs.16.7%)。2、比较不同时期SCNT胚胎聚合制作嵌合体效率,发现SCNT胚胎中4-8细胞胚胎的获得率为49.5%(657/1326),8-16细胞胚胎的获得率只有33.9%(499/1474),4-8细胞胚胎的聚合效率显着高于8-16细胞胚胎的聚合效率(23.9%vs.20.0%),而4-8细胞胚胎聚合获得囊胚及嵌合囊胚效率与8-16细胞的聚合效率没有显着差异(54.1%vs.56.O%；38.8%vs.37.5%),因此,选择4-8细胞期胚胎制备嵌合体猪。分别以表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的雄性五指山猪WPF19和雌性五指山猪1220耳成纤维细胞,以及雌性巴马小型猪BMM2耳成纤维细胞为供核细胞进行SCNT,胚胎发育至4-8细胞阶段时,两种胚胎以2：2比例进行聚合,772枚聚合胚胎有391枚发育至囊胚(50.6%),387枚囊胚移植到5头受体母猪,4头怀孕并到妊娠终期,获得2头具有明显毛色嵌合的小型猪。通过荧光及微卫星分析,死亡小猪的皮肤、心脏和肾脏存在嵌合特征。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胚胎聚合论文参考文献
[1].龙川,纪慧丽,冯冲,石宁宁,高景波.早期胚胎的卵裂球聚合制备GFP示踪的嵌合体小型猪[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集.2016
[2].纪慧丽.核移植胚胎聚合法制备嵌合体猪[D].广西大学.2016
[3].赵静.DNA聚合酶βR137Q突变影响小鼠胚胎发育的研究[D].南京师范大学.2016
[4].宋司航,王振东,单智焱,孙瑞珍,刘春佳.多个胚胎聚合对小鼠孤雌胚胎干细胞印记基因表达影响的研究[C].中国解剖学会2015年年会论文文摘汇编.2015
[5].武建中,田青.聚合酶链式反应在小鼠雄性胚胎性别鉴定中的优化研究[J].黑龙江畜牧兽医.2015
[6].武迪迪,具英花,孟峻,刘超,冯晨.激光共聚焦显微镜观察小鼠早期胚胎中PKB/Akt对微丝聚合的影响[J].中国细胞生物学学报.2011
[7].刘卫生,王英杰,张世昌,刘涛.胚胎干细胞在可降解聚合叁维支架上的生长增殖与分化[J].中国组织工程研究与临床康复.2008
[8].关云谦,蔡彦宁,谢淑,朱宛宛,徐艳玲.利用巢式聚合酶链反应检测单个胚胎小体细胞中时钟基因的表达[J].基础医学与临床.2006
[9].华云芳.聚合法制作猪嵌合胚胎初步研究[D].西南农业大学.2005
[10].周汝江,陈建泉,胡以平,成国祥.小鼠遗传背景对4n胚胎及2n-4n聚合胚制作效率的影响[J].动物学报.2005