导读:本文包含了核酸杂交论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:核酸,动力学,核苷酸,阴道炎,阴道,荧光,免疫。
核酸杂交论文文献综述
李田,李小毛,丁杰,黄敏,禹夜[1]（2018）在《核酸杂交检测在细菌性阴道病及外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的应用价值》一文中研究指出目的评估核酸杂交法在检测和识别细菌性阴道病、外阴阴道假丝酵母菌病相关微生物的灵敏性和特异性,评估其临床应用价值。方法对门诊具有阴道炎症状或体征的103例患者阴道分泌物进行检测,以Nungent评分、真菌培养为金标准,BV蓝试剂检测法、湿片镜检为常用检测方法,比较核酸检测法的灵敏性、特异性及检测的一致性。结果与Nungent评分相比,核酸检测法的敏感性为98%,特异性为96.2%,高于湿片镜检和BV蓝试剂检测法;与真菌培养相比,核酸杂交法检测的敏感性为89.4%,特异性为98.3%,核酸杂交法与金标准检测方法比较具有较好的一致性。对混合感染的检出准确性高于镜检(83.3%vs.70.8%)。结论与传统的检测方法比较,核酸杂交检测具有较高的敏感度和特异性,可以同时区分和识别细菌性阴道病、外阴阴道假丝酵母菌病和滴虫性阴道炎的致病微生物,尤其在细菌性阴道病的诊断方面优势明显。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2018年10期）
王瑞明,王一新,李建亮,崔言顺[2]（2017）在《鸭坦布苏病毒NS5基因核酸杂交检测方法的建立与应用》一文中研究指出【目的】鸭坦布苏病毒病是一种由鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)引起的以感染鸭产蛋下降、生长缓慢和瘫痪为特征的传染病。TMUV属于黄病毒科、黄病毒属、恩塔亚病毒群,它对包括人类在内的哺乳动物具有潜在的健康威胁。建立快速、特异、敏感的TMUV诊断方法,是防控该病流行的有效措施之一。本研究根据病毒NS5基因序列,利用非放射性标记物地高辛制备DNA探针,建立了TMUV病毒核酸的核酸杂交检测方法,并将该方法应用于临床病料的检测。【方法】运用Primer Premier 5.0软件设计引物,以本实验室分离保存的TMUV分离株SD1601 RNA为模板,使用地高辛标记试剂盒DIG-High prime DNA Labeling Kit(Roche),通过PCR扩增的方法制备NS5基因地高辛核酸探针,并对该探针进行灵敏性和特异性检测。收集山东省内种鸭场疑似坦布苏病毒感染病料,提取病毒RNA,进行RT-PCR,将产物点样至硝酸纤维素膜,进行核酸杂交并判断结果。【结果】以TMUV的病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增的方法,成功合成了162bp的地高辛标记核酸探针。以该探针进行斑点杂交反应,结果发现,只有TMUV核酸样品呈阳性,其余病毒如DPV、AIV、NDV等核酸样品呈阴性,表明该方法具有较好的特异性。将定量TMUV核酸梯度稀释后,进行核酸杂交。结果表明,该探针的最低检出量为10pg,表明该方法具有较高的灵敏度。用建立的核酸探针检测方法对40份山东省内种鸭场疑似坦布苏病毒感染病料的核酸样品进行检测,共检测到4份阳性样品,结果与经典RT-PCR方法一致,符合率为100%。【结论】本研究制备的探针仅与目的核酸特异性杂交,其对TMUV核酸的最低检出限量为10pg,表明该探针在TMUV检测中具有较强特异性和敏感性。本实验所建立的TMUV核酸探针检测方法为该病的防控和流行病学调查奠定了基础。(本文来源于《中国毒理学会兽医毒理学委员会与中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会联合学术研讨会暨中国毒理学会兽医毒理学委员会第5次全国会员代表大会会议论文集》期刊2017-09-22）
陈莹[3]（2016）在《基于核酸杂交链式反应的新型生物传感器的研究》一文中研究指出杂交链式反应(HCR)作为一种新型的体外核酸扩增技术,近年来引起了研究者们的广泛关注。其实验原理是基于两个自身稳定的核酸发夹探针只有在目标DNA存在下才开始杂交,并自组装形成一条带切口的dsDNA长链。荧光共振能量转移(FRET)是一种与两个荧光团之间的距离密切相关的基于近场偶极-偶极相互作用的能量转移。利用两个波长下荧光强度的比值所设计的比率型传感器可以减小外界因素(如激发光源的波动、荧光探针浓度的微小变化等)的干扰,检测结果更可靠。本论文基于HCR和FRET技术,构建了两种新的比率型荧光生物传感器。本论文主要分为以下叁部分:第一章,简单介绍了几种体外核酸扩增技术的基本原理和应用,重点介绍了”…HCR技术在不同领域的应用;同时,也介绍了 FRET技术的原理及应用。最后提出了本论文的研究目的和主要内容。第二章,基于HCR和FRET技术,构建了一种灵敏的无酶DNA荧光传感器。根据目标DNA的碱基序列设计两个发夹探针H1和H2并分别标记FAM和TAMRA荧光团。当目标DNA存在时,基于链取代原理引发两个发夹探针发生HCR,自组装成带切口的dsDNA长链,FAM和TAMRA之间的距离靠近,引起TAMRA和FAM的相对荧光强度发生变化。该传感器检测目标DNA的线性范围为2.0～40.0 nM,检出限为0.7 nM。这种方法成功应用于血清模拟样品中DNA的检测。第叁章,基于特异性识别Cu2+的DNAzyme,结合HCR和FRET技术,构建了一种新型检测水溶液中Cu2+的荧光传感器。利用生物素-链酶亲和素相互作用将标记生物素的DNAzyme修饰到磁珠上。当Cu2+存在时,DNAzyme被Cu2+特异性切割,释放出的单链DNA作为引物引发发夹探针H1和H2发生HCR,自组装成的带切口的长链dsDNA,弓引起分别标记在H1和H2上的供体FAM和受体TAMRA之间的距离靠近,产生FRET。受体和供体的荧光强度比值的改变量与Cu2+浓度在1.0～100.0 nM范围内有良好的线性,检出限为0.5 nM。这种方法应用于自来水中的Cu2+的检测,具有较好的回收率。(本文来源于《福州大学》期刊2016-06-01）
刘婷,冯守帅,辛瑜,王武,杨海麟[4]（2015）在《微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立》一文中研究指出以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株,针对具有高保守性及特异性的16SrRNA设计一组核酸探针,建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂交检测方法,优化了关键检测条件。结果表明,当S1酶反应温度为42℃时,芽孢杆菌属检测探针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属。当捕获探针和信号探针工作浓度均为5nmol/L,与分析探针杂交温度都为50℃,杂交时间分别为60min和15min时,检测信号的强弱与细菌数呈良好的线性关系,能实现定量检测,灵敏度高达1.33×102cells/mL。本方法提供了一个快速定性定量的检测技术,具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2015年02期）
孟凡峰,范建华,徐步,时建蓬,董宣[5]（2015）在《核酸杂交技术在禽白血病病毒TCID_(50)测定中的应用》一文中研究指出为探索核酸杂交技术在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)细胞半数感染量(TCID50)中的可行性,将ALV-J传染性克隆r NX0101株以10倍梯度稀释后按常规方法接种已长满单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板,在维持7 d后收集细胞培养上清。上清液部分按照试剂盒说明书进行p27抗原的ELISA检测,另一部分提取RNA后以鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒进行Dot-blot检测,每孔中细胞固定后以ALV-J特异性单克隆抗体进行IFA检测,确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算叁种方法测定的TCID50。结果显示ELISA法、IFA法和Dot-blot法在确定病毒感染中能够相互验证和补充,该病毒在CEF的TCID50分别为10-4.7TCID50/0.1 m L、10-5.2TCID50/0.1 m L和10-5.3TCID50/0.1 m L。表明采用Dot-blot法测定ALV-J的TCID50是可行的,不仅能够排除内源性的干扰,并且比ELISA和IFA具有更高的灵敏度。(本文来源于《中国家禽》期刊2015年01期）
赵运转,史从宁,张国军,康熙雄[6]（2014）在《镜检法和核酸杂交法检测念珠菌性阴道炎的差异及评价》一文中研究指出目的分析念珠菌性阴道炎菌种的构成及2种念珠菌检测方法(镜检法、核酸杂交法)的差异。方法选取2012年1~4月北京天坛医院90例念珠菌培养阳性的阴道分泌物标本,分析以镜检法和核酸杂交法检测的结果。结果白色念珠菌是念珠菌性阴道炎的主要致病菌(77.8%),其他所有念珠菌中克柔念珠菌的比例最高(12.2%);镜检法对白色念珠菌检测的灵敏度为69.2%,对其他念珠菌的检测灵敏度为0或很低,核酸杂交法对白色念珠菌的检测灵敏度为95.4%,对其他所有念珠菌的检测灵敏度为100.0%,对少量白色念珠菌的检出率为40.0%。结论白色念珠菌是念珠菌性阴道炎的主要致病菌,2种检测方法各有利弊,需根据实际情况选择合适的方法。(本文来源于《检验医学与临床》期刊2014年23期）
付洁,刘潜,欧伦,孙云娟,李梦怡[7]（2014）在《基于核酸杂交-酶联桥接分析法在siRNA药物定量分析中的应用》一文中研究指出目的考察基于核酸的酶联桥接分析(ELBA)法定量分析生物基质中双链siRNA药物的反义链RNA的可行性,为研究siRNA药物提供可靠的检测方法。方法在LNCap细胞空白基质中采用ELBA方法建立siRNA反义链的标准曲线(5~50 000 pmol·L-1)。LNCap细胞中转染双链siRNA(终浓度100 nmol·L-1),24 h后取上清、细胞裂解物及RNA诱导沉默复合体(RISC),根据标准曲线对各组分中反义链RNA浓度进行定量。分别配制含双链siRNA 5~25 000 pmol·L-1或反义siRNA 5~25 000 pmol·L-1的小鼠全血浆样品,用小鼠肝、心、肾和脾生物基质配制反义siRNA 3~6250 pmol·L-1样品,考察ELBA方法对血浆和生物基质中siRNA反义链进行定量的特异性和定量范围。sc给予C57小鼠LNCap细胞制备移植瘤模型,iv给予双链siRNA药物15 nmol·kg-1,30 min后ELBA法测定血浆、肿瘤组织、肝、肾、心和脾中反义链siRNA浓度。结果基于ELBA方法对细胞基质中反义链siRNA定量范围为5~50 000 pmol·L-1,且ELBA可以对转染双链siRNA的细胞裂解物和RISC复合物中的反义链siRNA进行特异定量。ELBA对血浆中双链siRNA中的反义链无响应,对血浆和组织中siRNA反义链的定量分析范围分别为5~25 000 pmol·L-1和3~3125 pmol·L-1。双链siRNA在前列腺特异膜抗原-适配子递送系统下静脉给药30 min后,ELBA检测发现,反义链RNA分布丰度依次为肿瘤组织、肝、肾、血和脾。结论ELBA方法可用于siRNA药物的反义链的定量分析及组织分布研究。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2014年05期）
刘潜,孙云娟,付洁,宋海峰[8]（2014）在《基于核酸杂交-酶联桥接的悬浮芯片技术同时定量反义寡核苷酸药物原型及其代谢物方法的初步建立》一文中研究指出目的利用悬浮芯片技术,建立基于核酸杂交-酶联桥接的悬浮芯片技术对反义寡核苷酸药物原型及其代谢产物同时定量的分析方法。方法本研究在确证探针与微球偶联的基础上,考察生物基质效应、偶联微球浓度、检测探针浓度、S1核酸酶用量以及荧光显色液浓度等因素对方法定量的影响。最终在同一生物样品中对反义寡核苷酸原型及其代谢产物进行同时定量分析。结果通过考察生物基质效应,确定稀释10倍的PBS作为条件优化及样品定量分析的生物学基质;微球浓度为150个/μl,检测探针浓度为400 nmol/L,S1核酸酶用量为1 U/孔,荧光显色液浓度为1μg/ml。在猕猴血浆基质中该方法针对原型与代谢产物序列的定量范围均为7.81~2000 nmol/L。在同时含有低浓度(20 nmol/L)和高浓度(1500 nmol/L)AI-ON1原型(Ai)与AI-ON1缩短代谢产物(Am)的混合血浆样品中,该方法可同时特异性地定量分析Ai与Am。结论本研究成功建立基于核酸杂交-酶联桥接的悬浮芯片定量分析方法,可在微量生物样品中实现对反义寡核苷酸药物原型及其代谢产物的同时定量分析。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2014年01期）
孙云娟,付洁,王清清,周磊,董立厚[9]（2012）在《核酸杂交酶联桥接分析系统定量分析寡核苷酸》一文中研究指出建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析(ELBA)系统,用于生物基质中反义寡核苷酸(ODN)药物的定量分析。对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4DNA连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进行了优化,确定使用中性亲和素包被的酶标板,俘获探针与检测探针浓度比为2∶3,S1酶为40U/孔,显色15min为最优条件,并考察了生物基质效应和稀释效应对方法的影响,建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸的定量方法,并进行方法学确证,方法学定量范围为0.10～6.25nmol/L。本方法成功应用于反义硫代寡核苷酸药物在低剂量(1mg/kg)静脉滴注后的药代动力学研究,成为生物基质中寡核苷酸类药物定量分析的有效手段。(本文来源于《分析化学》期刊2012年04期）
张文娟[10]（2011）在《基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法检测DNA结合蛋白》一文中研究指出转录因子,也被称为序列特异性DNA结合蛋白,含有一个或多个DNA结合结构域(DBDs)。它们定位于细胞质中,在正常细胞功能状态下或受到特定因子诱导后,从细胞质进入细胞核,与基因组中的顺式作用元件诸如启动子、增强子、衰减子等发生特异性识别结合,组成基因转录机器,进而实现其调控基因表达的功能。因此,检测分析转录因子的表达及活化程度对我们了解细胞功能具有至关重要的作用。目前常用的检测技术主要建立在DNA和蛋白质相互作用这一层次,即运用含有顺式作用元件的DNA为探针,来分析转录因子的DNA结合活性。本课题“基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法检测DNA结合蛋白”技术巧妙的利用在高严谨度洗脱条件下转录因子蛋白对与之特异性结合的双链核酸序列的保护作用,将对转录因子的检测转换为对相应的特异核酸序列的检测。该方法不需要复杂的仪器、繁琐的操作步骤和特异性抗体就可以对转录因子的表达及活化程度进行定量研究,而且可在较短时间内完成对转录因子的检测。我们以检测转录因子c-Jun的活性为模型来对该检测方法进行评价,在较短的时间内该方法可以准确的检测到3.5ng的转录因子c-Jun纯蛋白和0.625ug的Hela细胞核粗提取物,具有较高的灵敏度。而且该检测方法可以用于任何一种转录因子的检测。鉴于“基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法”的快速、简便、高灵敏度和选择性,该检测方法可以应用到需要对转录因子的DNA结合活性进行定量,有效,大规模检测的领域和科学研究中,诸如细胞分子生物学中对多种处理的刺激应答筛选方面,进化生物学研究方面,环境监测方面和药物筛选方面等等。(本文来源于《中国科学技术大学》期刊2011-10-01）
核酸杂交论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】鸭坦布苏病毒病是一种由鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)引起的以感染鸭产蛋下降、生长缓慢和瘫痪为特征的传染病。TMUV属于黄病毒科、黄病毒属、恩塔亚病毒群,它对包括人类在内的哺乳动物具有潜在的健康威胁。建立快速、特异、敏感的TMUV诊断方法,是防控该病流行的有效措施之一。本研究根据病毒NS5基因序列,利用非放射性标记物地高辛制备DNA探针,建立了TMUV病毒核酸的核酸杂交检测方法,并将该方法应用于临床病料的检测。【方法】运用Primer Premier 5.0软件设计引物,以本实验室分离保存的TMUV分离株SD1601 RNA为模板,使用地高辛标记试剂盒DIG-High prime DNA Labeling Kit(Roche),通过PCR扩增的方法制备NS5基因地高辛核酸探针,并对该探针进行灵敏性和特异性检测。收集山东省内种鸭场疑似坦布苏病毒感染病料,提取病毒RNA,进行RT-PCR,将产物点样至硝酸纤维素膜,进行核酸杂交并判断结果。【结果】以TMUV的病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增的方法,成功合成了162bp的地高辛标记核酸探针。以该探针进行斑点杂交反应,结果发现,只有TMUV核酸样品呈阳性,其余病毒如DPV、AIV、NDV等核酸样品呈阴性,表明该方法具有较好的特异性。将定量TMUV核酸梯度稀释后,进行核酸杂交。结果表明,该探针的最低检出量为10pg,表明该方法具有较高的灵敏度。用建立的核酸探针检测方法对40份山东省内种鸭场疑似坦布苏病毒感染病料的核酸样品进行检测,共检测到4份阳性样品,结果与经典RT-PCR方法一致,符合率为100%。【结论】本研究制备的探针仅与目的核酸特异性杂交,其对TMUV核酸的最低检出限量为10pg,表明该探针在TMUV检测中具有较强特异性和敏感性。本实验所建立的TMUV核酸探针检测方法为该病的防控和流行病学调查奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
核酸杂交论文参考文献
[1].李田,李小毛,丁杰,黄敏,禹夜.核酸杂交检测在细菌性阴道病及外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的应用价值[J].实用医学杂志.2018
[2].王瑞明,王一新,李建亮,崔言顺.鸭坦布苏病毒NS5基因核酸杂交检测方法的建立与应用[C].中国毒理学会兽医毒理学委员会与中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会联合学术研讨会暨中国毒理学会兽医毒理学委员会第5次全国会员代表大会会议论文集.2017
[3].陈莹.基于核酸杂交链式反应的新型生物传感器的研究[D].福州大学.2016
[4].刘婷,冯守帅,辛瑜,王武,杨海麟.微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立[J].食品与生物技术学报.2015
[5].孟凡峰,范建华,徐步,时建蓬,董宣.核酸杂交技术在禽白血病病毒TCID_(50)测定中的应用[J].中国家禽.2015
[6].赵运转,史从宁,张国军,康熙雄.镜检法和核酸杂交法检测念珠菌性阴道炎的差异及评价[J].检验医学与临床.2014
[7].付洁,刘潜,欧伦,孙云娟,李梦怡.基于核酸杂交-酶联桥接分析法在siRNA药物定量分析中的应用[J].中国药理学与毒理学杂志.2014
[8].刘潜,孙云娟,付洁,宋海峰.基于核酸杂交-酶联桥接的悬浮芯片技术同时定量反义寡核苷酸药物原型及其代谢物方法的初步建立[J].国际药学研究杂志.2014
[9].孙云娟,付洁,王清清,周磊,董立厚.核酸杂交酶联桥接分析系统定量分析寡核苷酸[J].分析化学.2012
[10].张文娟.基于微孔板核酸杂交酶联免疫吸附法检测DNA结合蛋白[D].中国科学技术大学.2011
论文知识图
