导读:本文包含了腈水合酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:水合,酰胺,丙烯酰胺,杆菌,选择性,芽孢,细胞。
腈水合酶论文文献综述
张颖,王莹,杨立荣,吴坚平[1]（2019）在《DA-F127水凝胶包埋固定化含腈水合酶细胞》一文中研究指出腈水合酶是一类可催化腈类化合物转化生成相应酰胺类物质的酶。含腈水合酶的游离细胞催化水合反应存在酶容易失活、细胞无法重复利用、分离纯化困难等缺陷,细胞固定化技术可有效解决这些问题。为探索合适的固定化方法,以含腈水合酶的重组E. coli细胞为研究对象,以固定化酶活回收率和批次反应情况为评价指标,筛选比较了几种常用的包埋固定化方法。结果表明,DA-F127水凝胶包埋固定化细胞不仅具有较高的酶活回收率,而且稳定性也很好。对该方法进行了固定化条件和操作稳定性优化,当DA-F127浓度为15%、UV光源距离为20cm、光照时间为6min、菌体含量为20mg/g固定化细胞时,酶活回收率为89. 74%,并且可以催化9批次150g/L的3-氰基吡啶完成转化,第九批次转化率可达98. 26%。与游离细胞催化过程相比,单位质量游离细胞的烟酰胺产量提高了12倍,具有良好的工业应用前景。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年11期）
夏媛媛[2]（2019）在《亚基融合型腈水合酶的构建及成熟机制研究》一文中研究指出腈水合酶(Nitrile hydratase,简称NHase;EC:4.2.1.84)能够催化腈在常温中性条件下与水化合形成酰胺,是替代高温强酸催化工艺实现酰胺类大宗化学品绿色制造的关键酶种。常见NHase是含?和?亚基的金属酶,酶的成熟遵循亚基自身交换机制。但酶的热稳定性和有机溶剂耐受性较差,难以满足工业化生产对酶学性质的应用要求。因此,亟需发掘新型NHase,改良酶的催化性能。本研究依据新发现的领鞭毛虫(Monosiga brevicollis)单肽链腈水合酶的蛋白结构特点,对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida 5B/NRRL-18668)腈水合酶进行亚基融合重构,大幅提高腈水合酶的热稳定性和产物耐受性;又研究了来源于P.putida 5B和玫瑰色红球菌(Rhodococcus rhodochrous J1)的腈水合酶亚基融合突变体的活化机理,揭示了调控蛋白对于融合型腈水合酶的激活机制。主要研究结果如下:(1)对P.putida 5B来源的腈水合酶PpNHase进行亚基融合重构,获得了活性和稳定性均大幅提高的亚基融合型腈水合酶。基于M.brevicollis单链腈水合酶的蛋白结构特点,采用亚基融合策略对PpNHase进行改造,获得了两种活性和稳定性均大幅提高的亚基融合型腈水合酶。其中共表达调控蛋白的融合型腈水合酶NHase-(BA)P14K的比酶活比PpNHase提高了54%,而融合了调控蛋白的融合型腈水合酶NHase-(BAP14K)的比酶活较PpNHase提高了39%,两者在50°C的半衰期分别为PpNHase的2.8倍和2倍,对烟酰胺的产物耐受性也较PpNHase有一定的提高。(2)基于半理性改造,进一步提高腈水合酶的稳定性。以NHase-(BA)P14K为出发蛋白,通过结合点突变扫描程序和分子动力学模拟手段,建立了一个高效的小型突变库,并从中筛选出叁个酶活和稳定性均提高的突变体B-M150C、B-T173Y和B-S189E,其催化效率较出发蛋白提高了1.1倍、1.5倍和2.2倍,在50°C的半衰期分别较出发蛋白提高了32%、7%及107%。(3)解析了融合型腈水合酶的成熟活化机理。通过优化表达策略,获得了来源于P.putida 5B和R.rhodochrous J1的腈水合酶调控蛋白P14K及NhlE。在此基础上对腈水合酶激活机制进行了探究。用单独的调控蛋白在体外与同源的不含钴的融合型腈水合酶进行混合后,获得了活化的成熟酶;此外,用调控蛋白激活不同来源的腈水合酶,也可以实现部分激活。本结果表明,调控蛋白起着类似金属伴随子的作用,协助输送钴离子到腈水合酶中;另外,调控蛋白不仅可以激活同源腈水合酶,也能激活异源腈水合酶,但对于自身来源的腈水合酶有着更高的激活效率。(4)成功表达M.brevicollis来源的单链腈水合酶Mb NHase。以大肠杆菌作为表达宿主对Mb NHase进行了可溶性表达,并测定了其比酶活为88.4 U·mg~(-1)。根据调控蛋白可以激活异源腈水合酶的结论,构建了MbNHase与两种调控蛋白P14K、NhlE共表达的质粒,表达纯化后酶活测定发现,比酶活分别为220.2 U·mg~(-1)和127.0 U·mg~(-1),是MbNHase的2.5和1.4倍。结果表明,两种细菌来源的调控蛋白可以协助真核来源的天然融合型腈水合酶提高活性。(本文来源于《江南大学》期刊2019-06-01）
程中一[3]（2019）在《基于半理性设计的腈水合酶底物选择性及热稳定性的改造》一文中研究指出腈水合酶(NHase,EC 4.2.1.84)是一种存在于原核和真核生物中的金属酶,能够催化腈类生成相应的酰胺类产物,而酰胺类产物作为重要的化工原料和有机合成中间体,在大宗化学品生产及医药领域有着广泛的应用。相较于传统的化学催化剂,腈水合酶转化腈类体现出一定的优势,反应条件温和且反应过程中无副产物产生。尽管如此,现阶段已报导的NHase大多底物谱较窄,选择性较差,难以定向高效地合成目标产物;此外,腈水合酶所催化的腈类水合反应为放热反应,而该酶热稳定性往往较差,以上这些因素限制了腈水合酶在更广范围内的应用。本文通过半理性设计,基于生物信息学与蛋白质工程,改变了腈水合酶对于多氰基腈类底物以及外消旋腈类底物的区域选择性和对映选择性,并通过基因融合技术,提高了腈水合酶的热稳定性,主要研究结果如下:(1)基于序列比对,通过定点突变改变了腈水合酶对于多氰基腈类底物的区域选择性。以恶臭假单胞菌Pseudomonas putida NRRL-18668来源的腈水合酶(PpNHase)和睾丸酮丛毛单胞菌Comomonas testosteroni来源的腈水合酶(CtNHase)为对象,研究两者对二氰基底物的催化特点。结果发现,PpNHase主要催化α,ω-二腈中的一个氰基,生成反应中间产物ω-氰基单酰胺,而CtNHase催化己二腈主要生成反应终产物α,ω-二酰胺,即二腈类底物的两个氰基都能被催化。通过比对PpNHase和CtNHase的一级氨基酸序列,发现两者的序列相似度达到95.6%。两者共有17个不同的氨基酸位点,分布于α和β两个亚基上。以Ct NHase为模板,将PpNHase中的上述17个氨基酸突变为CtNHase对应位点上的氨基酸残基,17个突变体中βL37F突变体催化二腈类底物的区域选择性发生了改变,随后对该位点进行了饱和突变,最终得到催化二腈类底物主要生成α,ω-二酰胺的叁个突变体,βL37F、βL37W和βL37Y。另外,对CtNHase上β亚基37位的苯丙氨酸残基也进行了定点饱和突变,得到了主要生成ω-氰基单酰胺的两个突变体,βF37L和βF37P。基于Caver软件对底物通道的对比发现,底物通道的瓶颈越大,曲率越小,腈水合酶趋向于催化二腈中的两个氰基,生成二酰胺;而底物通道的瓶颈越小,曲率越大,腈水合酶趋向于只催化二腈中的一个氰基,生成ω-氰基单酰胺。(2)基于分子对接,通过定点突变改变了腈水合酶对于多氰基腈类底物的区域选择性。构建来源于玫瑰色红球菌Rhodococcus rhodochrous J1中低分子量腈水合酶(L-NHase)的蛋白模型,通过分子对接将己二腈,丙二腈,邻苯二腈和对苯二腈与腈水合酶活性中心进行对接,判断构成底物结合口袋的氨基酸残基。对底物结合口袋氨基酸进行饱和突变,得到了βY68T和βW72Y两株单点突变体,他们对于二腈类底物的区域选择性发生了改变,由偏好生成二酰胺变为偏好生成ω-氰基单酰胺。进一步的迭代饱和突变得到只生成氰基单酰胺的双点组合突变体Y68T/W72Y。计算机辅助手段分析显示,Y68T/W72Y组合突变对于氰基单酰胺产物的结合能力变弱,结合自由能增加,导致单酰胺不能被进一步转化成二酰胺,区域选择性发生改变。(3)基于拉伸分子动力学模拟,通过定点突变改变了腈水合酶对于外消旋腈类底物的对映选择性。以L-NHase为研究对象,借助于蛋白建模及拉伸分子动力学模拟,准确定位了影响L-NHase对外消旋扁桃腈对映选择性的四个氨基酸残基,并对这四个氨基酸残基进行饱和突变。突变株对于(S)-扁桃腈的选择性明显提高,其中突变体βF37H表现出96.8%的对映体过剩率,远高于野生型的52.6%。拉伸分子动力学模拟分析发现,突变体增大了对(R)-扁桃腈的空间位阻,从而突变体βF37H偏向于选择(S)-扁桃腈。(4)基于蛋白质融合提高了腈水合酶的稳定性。以L-NHase为研究对象,将一种高热稳定的加帽蛋白TERM融合至L-NHase的C端,得到新的融合型腈水合酶。该融合型腈水合酶在50°C处理20分钟后依然保持80%以上的残余酶活,远高于野生型的40%。透射电子显微镜观测发现融合后的腈水合酶可形成直径约为25 nm的环状纳米结构,蛋白建模结果显示该环状结构可能为L-NHase的多亚基聚集体,多聚体的形成降低了酶分子的比表面积,有利于稳定性的提高。(本文来源于《江南大学》期刊2019-06-01）
张娱,刘智峰,陈明,唐志书,刘世军[4]（2018）在《铁型腈水合酶降解苯甲腈的分子模拟研究》一文中研究指出为探索铁型腈水合酶降解腈的微观降解机制,文章用分子对接的方法模拟了铁型腈水合酶与腈的相互作用,得到它们复合物结构的理论模型,根据打分函数最低原则筛选出的铁型腈水合酶ReNHase与苯甲腈之间最佳构象打分函数为-64.881 5,二次打分函数为-56.663 1。并应用LPC/CSU server研究最佳构象的相互作用情况,结果表明,ReNHase与苯甲腈之间以疏水作用数量最多,ReNHase的PRO125 A、ILE24 B、LEU123 A和THR27 B在催化过程中起到了重要作用。(本文来源于《环境科学与技术》期刊2018年12期）
杨正飞[5]（2018）在《功能表达来源于Aurantimonas manganoxydans SI85-9A1的腈水合酶及其应用》一文中研究指出腈水合酶(EC 4.2.1.84)是微生物体内代谢臆类物质的关键酶之一,可以催化腈水合成相应的酰胺。由于其催化效率高、反应条件温和、环境友好等特点,腈水合酶已经成功的应用于化学工业中合成酰胺类物质。腈水合酶基因一般以基因簇形式存在,包含α亚基,β亚基和激活蛋白。本实验室前期将来源于Aurantingaas manganoxydans SI85-9A1的腈水合酶基因NH08克隆并构建在重组大肠杆菌中。然而,β亚基的表达量远远低于α亚基,激活蛋白表达量也偏低。本文首先通过融合标签策略、双质粒策略、多顺反子策略等一系列研究,使激活蛋白的表达量提高了 5.14倍,酶活提高了 44.6%,达到120U/mL。其次,通过同义突变策略,使β亚基的表达量提高了 33%,最终酶活达到160U/mL。比酶活达到了 620.2U/mg,提高了 52.9%。再次,通过摇瓶培养条件优化,酶活达到了 1531.2U/mL,OD600达到了 15.6。最后在15L罐中进行高密度发酵,酶活达到了 9080U/mL,OD600达到123。目前谷氨酸棒杆菌被广泛的应用于代谢工程研究中,利用其为宿主进行蛋白表达的研究相对较少。本文首先通过不同组成型启动子与诱导型启动子比较、密码子优化、RBS序列设计和新型mmp诱导系统的应用等表达策略研究,实现腈水合酶在谷氨酸棒杆菌中的高效诱导表达,最终蛋白表达量占总蛋白的29.9%,酶活达到52.4U/mL。其次,通过摇瓶优化,酶活达到了 143.1U/mL,OD600达到了 15.6。最后,在10L发酵罐中进行高密度发酵,酶活达到了 1420U/mL,OD600达到了 200。使用重组大肠杆菌全细胞进行烟酰胺和2,6-二氟苯甲酰胺的制备,最终产物浓度分别达到了 439.2 g/L和314 g/L,转化率都大于99%,具有潜在的应用价值。此外,使用重组谷氨酸棒杆菌全细胞进行烟酰胺的制备,最终烟酰胺的浓度达到了 292.8 g/L,转化率大于99%,证明了利用重组谷氨酸棒杆菌生产烟酰胺的应用潜力。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-09-07）
张玉香,韩平平,李晋,申杰,李娜[6]（2018）在《1株腈水合酶产生菌株的筛选、鉴定及酶学特性》一文中研究指出从济宁农田土壤分离筛选产生腈水合酶的菌株,利用薄层层析法(TLC)初步判断产酶能力,液体发酵复筛测定酶活力,筛选到酶活力达到3.6 U/m L的菌株Jn-102。通过菌体形态及菌落特征、生理生化及16S rDNA序列分析鉴定菌株Jn-102为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)。对其所产腈水合酶进行酶学性质分析,结果表明酶的最适反应温度和pH分别为50℃和7.0,在40℃以下和pH6.0~8.0范围内酶活力较稳定,具有较宽的底物谱,对芳香腈有较好的水合作用,以对羟基苯乙腈为底物时K_m值和V_(max)值分别为21.3 mmol/L和60.2μmol/(min·mg),Co~(2+)和Mg~(2+)等对酶活力有轻微的促进作用,而Zn~(2+)对酶活力有强烈的抑制作用。阿氏芽孢杆菌Jn-102是1株腈水合酶活力较高的生产菌株,具有潜在的研究和应用价值。(本文来源于《食品工业科技》期刊2018年23期）
张娱,刘智峰,陈明,刘世军,许洪波[7]（2018）在《钴型腈水合酶降解腈的分子模拟研究》一文中研究指出为探索钴型腈水合酶降解腈的微观降解机制,用分子对接的方法模拟了钴型腈水合酶与腈的相互作用,得到他们复合物结构的理论模型,根据打分函数最低原则筛选出的PtNHase与烟腈之间最佳构象打分函数为-63.9557,二次打分函数为-56.056。应用LPC/CSU server研究最佳构象的相互作用情况,结果表明,PtNHase与烟腈之间以疏水作用数量最多,钴型腈水合酶的氨基酸残基αLeu88、βAla122、βLeu127、βPhe37、βPhe41和βPhe118在催化过程中起到了关键作用。(本文来源于《中国食品添加剂》期刊2018年04期）
张群[8]（2017）在《腈水合酶制备关键技术研究》一文中研究指出腈水合酶是一类可以催化腈类物质转化相应的酰胺类化合物的金属酶,工业上利用其催化丙烯腈转化为丙烯酰胺。该生物法制备丙烯酰胺工艺在1985年被开发,是生物法替代化学法的典型案例。随着丙烯酰胺的需求不断扩大,国内外研究机构及学者对腈水合酶产生菌的分离选育、菌株特性研究、酶的形成条件、酶的结构和性质、生物合成机制、翻译后的成熟机制等进行了深入研究。如中国专利CN201710456875.6公开了一种改造腈水合酶及其应用,该发明改造腈水合酶的抗逆性、耐热性和产物耐受(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2017年12期）
郭军玲,王哲,刘中美,周哲敏[9]（2018）在《高分子量腈水合酶工程菌生产烟酰胺的工艺建立》一文中研究指出为提高表达玫瑰色红球菌(Rhodococcus rhodochrous J1)来源的高分子量腈水合酶大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET-24a(+)-nhh Brbs Arbs G(BAG)的菌体酶活,建立了合适的烟腈全细胞催化工艺以及重组工程菌的高密度发酵工艺。采用正交试验L_9(3~4)对摇瓶培养基中各组分进行优化,比较烟腈底物流加和底物分批补料工艺,对重组菌进行分批补料高密度发酵培养。培养基优化后其菌体生物量提高到4.42 gDCW/L,细胞比酶活提高到30.91 U/mgDCW;与烟腈底物流加相比,烟腈分批补料工艺更适合烟酰胺的生产,通过此工艺的反应,摇瓶发酵后的BAG能够生产390 g/L烟酰胺;对BAG进行5 L发酵罐分批补料扩大培养,菌体生物量最高达到73.97 gDCW/L(OD600=200),细胞比酶活最高为42.70 U/mgDCW,单位发酵液酶活最高为2 813 U/mL,用较高密度的发酵罐培养后重组菌进行烟腈催化反应,产物质量浓度能达到537 g/L,是已报道的大肠杆菌重组表达腈水合酶产烟酰胺所得终质量浓度的最高水平。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2018年02期）
于昊[10]（2017）在《磁性介孔氧化硅固定化腈水合酶的制备及应用》一文中研究指出腈水合酶是催化腈类化合物生成相应酰胺类化合物的重要工业酶,利用其生产酰胺能耗低、副产物少,符合经济环保的绿色化工发展方向。然而游离的腈水合酶存在稳定性差、无法回收再利用、易受周围环境影响而失活等缺陷,通过将游离腈水合酶进行固定化可以有效解决上述问题。磁性介孔氧化硅材料易于操作分离,比表面积大,孔径可调节,孔体积大,具有良好的生物相容性和化学稳定性,表面容易进行功能修饰,是良好的固定化酶载体。本研究以磁性介孔氧化硅材料为载体,采用固载化交联酶聚集体及共价结合方法进行腈水合酶的固定化,对固定化酶的制备过程、催化性能和稳定性进行研究,并将其应用于烟酰胺及头孢氨苄的生产。主要内容如下:(1)以鞣酸为模板剂合成介孔氧化硅纳米颗粒(TA-MSNs),采用吸附与交联结合的方法,在氧化硅介孔内制备腈水合酶交联酶聚集体(CLNHAs@TA-MSNs)。TA-MSNs是直径约200 nm的单分散球形多孔颗粒,其比表面积为438.5 m~2/g,孔体积为1.245 cm~3/g,孔径为9.559 nm。将制备的CLNHAs@TA-MSNs进行性能研究,得出如下结论:CLNHAs@TA-MSNs的最适温度为40 ~oC,最适pH为7.0。与游离腈水合酶相比,CLNHAs@TA-MSNs表现出了较高的热稳定性、pH稳定性、机械稳定性及储存稳定性,并且CLNHAs@TA-MSNs在烟酰胺的制备中表现出较高的高浓度底物耐受性和重复使用性,在重复反应6次后,烟酰胺产率为29.31%。从动力学角度进行分析,CLNHAs@TA-MSNs的K_m值比游离腈水合酶大,且其V_(max)、K_(cat)和K_(cat)/K_m值均比游离腈水合酶小,说明CLNHAs@TA-MSNs对底物的亲和力比游离腈水合酶差,且其催化效率比游离腈水合酶有所降低。(2)以四氧化叁铁为磁源粒子,以鞣酸为模板剂合成磁性介孔氧化硅纳米颗粒(TA-MMSNs)。采用吸附与交联结合的方法,在磁性氧化硅介孔内制备腈水合酶交联酶聚集体(CLNHAs@TA-MMSNs)。TA-MMSNs是直径为250 nm左右的单分散球形多孔颗粒,其比表面积为423.4 m~2/g,孔体积为1.071 cm~3/g,孔径为9.349 nm,饱和磁化强度为35.26 emu/g。将制备的CLNHAs@TA-MMSNs进行性能研究,得出如下结论:CLNHAs@TA-MMSNs的最适温度为40 ~oC,最适pH为7.0。与游离腈水合酶相比,CLNHAs@TA-MMSNs表现出了较高的胰蛋白酶耐受性、热稳定性、pH稳定性、机械稳定性及储存稳定性,并且CLNHAs@TA-MMSNs在烟酰胺的制备中表现出较高的有机溶剂耐受性、高浓度底物耐受性和重复使用性,重复反应7次后,烟酰胺的产率为29.74%。从动力学角度进行分析,CLNHAs@TA-MMSNs的K_m值比游离腈水合酶大,且其V_(max)、K_(cat)和K_(cat)/K_m值均比游离腈水合酶小,说明CLNHAs@TA-MMSNs对底物的亲和力比游离腈水合酶差,且其催化效率比游离腈水合酶有所降低。(3)以TA-MMSNs经氨基修饰后得到的TA-MMSNs-NH_2为载体,通过共价结合法制备固定化腈水合酶/青霉素G酰化酶双酶体系(NHase-PGA@TA-MMSNs-NH_2)。TA-MMSNs-NH_2载体的比表面积为276.5 m~2/g,孔体积为0.4380 cm~3/g,孔径为9.479nm,饱和磁化强度为30.10 emu/g。将NHase-PGA@TA-MMSNs-NH_2应用于头孢氨苄的生产中,利用响应面分析法优化温度、pH、反应时间及酶用量等条件。在响应面分析法求得的最佳条件下,即温度为34.74 ~oC,pH为7.75,反应时间为6.26 h,酶用量为56.76 mg,头孢氨苄的产率可达85.37%。重复反应4次后,头孢氨苄的产率仍能达到27.19%。(本文来源于《河北工业大学》期刊2017-05-01）
腈水合酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
腈水合酶(Nitrile hydratase,简称NHase;EC:4.2.1.84)能够催化腈在常温中性条件下与水化合形成酰胺,是替代高温强酸催化工艺实现酰胺类大宗化学品绿色制造的关键酶种。常见NHase是含?和?亚基的金属酶,酶的成熟遵循亚基自身交换机制。但酶的热稳定性和有机溶剂耐受性较差,难以满足工业化生产对酶学性质的应用要求。因此,亟需发掘新型NHase,改良酶的催化性能。本研究依据新发现的领鞭毛虫(Monosiga brevicollis)单肽链腈水合酶的蛋白结构特点,对恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida 5B/NRRL-18668)腈水合酶进行亚基融合重构,大幅提高腈水合酶的热稳定性和产物耐受性;又研究了来源于P.putida 5B和玫瑰色红球菌(Rhodococcus rhodochrous J1)的腈水合酶亚基融合突变体的活化机理,揭示了调控蛋白对于融合型腈水合酶的激活机制。主要研究结果如下:(1)对P.putida 5B来源的腈水合酶PpNHase进行亚基融合重构,获得了活性和稳定性均大幅提高的亚基融合型腈水合酶。基于M.brevicollis单链腈水合酶的蛋白结构特点,采用亚基融合策略对PpNHase进行改造,获得了两种活性和稳定性均大幅提高的亚基融合型腈水合酶。其中共表达调控蛋白的融合型腈水合酶NHase-(BA)P14K的比酶活比PpNHase提高了54%,而融合了调控蛋白的融合型腈水合酶NHase-(BAP14K)的比酶活较PpNHase提高了39%,两者在50°C的半衰期分别为PpNHase的2.8倍和2倍,对烟酰胺的产物耐受性也较PpNHase有一定的提高。(2)基于半理性改造,进一步提高腈水合酶的稳定性。以NHase-(BA)P14K为出发蛋白,通过结合点突变扫描程序和分子动力学模拟手段,建立了一个高效的小型突变库,并从中筛选出叁个酶活和稳定性均提高的突变体B-M150C、B-T173Y和B-S189E,其催化效率较出发蛋白提高了1.1倍、1.5倍和2.2倍,在50°C的半衰期分别较出发蛋白提高了32%、7%及107%。(3)解析了融合型腈水合酶的成熟活化机理。通过优化表达策略,获得了来源于P.putida 5B和R.rhodochrous J1的腈水合酶调控蛋白P14K及NhlE。在此基础上对腈水合酶激活机制进行了探究。用单独的调控蛋白在体外与同源的不含钴的融合型腈水合酶进行混合后,获得了活化的成熟酶;此外,用调控蛋白激活不同来源的腈水合酶,也可以实现部分激活。本结果表明,调控蛋白起着类似金属伴随子的作用,协助输送钴离子到腈水合酶中;另外,调控蛋白不仅可以激活同源腈水合酶,也能激活异源腈水合酶,但对于自身来源的腈水合酶有着更高的激活效率。(4)成功表达M.brevicollis来源的单链腈水合酶Mb NHase。以大肠杆菌作为表达宿主对Mb NHase进行了可溶性表达,并测定了其比酶活为88.4 U·mg~(-1)。根据调控蛋白可以激活异源腈水合酶的结论,构建了MbNHase与两种调控蛋白P14K、NhlE共表达的质粒,表达纯化后酶活测定发现,比酶活分别为220.2 U·mg~(-1)和127.0 U·mg~(-1),是MbNHase的2.5和1.4倍。结果表明,两种细菌来源的调控蛋白可以协助真核来源的天然融合型腈水合酶提高活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
腈水合酶论文参考文献
[1].张颖,王莹,杨立荣,吴坚平.DA-F127水凝胶包埋固定化含腈水合酶细胞[J].中国生物工程杂志.2019
[2].夏媛媛.亚基融合型腈水合酶的构建及成熟机制研究[D].江南大学.2019
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[4].张娱,刘智峰,陈明,唐志书,刘世军.铁型腈水合酶降解苯甲腈的分子模拟研究[J].环境科学与技术.2018
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[7].张娱,刘智峰,陈明,刘世军,许洪波.钴型腈水合酶降解腈的分子模拟研究[J].中国食品添加剂.2018
[8].张群.腈水合酶制备关键技术研究[J].食品与生物技术学报.2017
[9].郭军玲,王哲,刘中美,周哲敏.高分子量腈水合酶工程菌生产烟酰胺的工艺建立[J].食品与发酵工业.2018
[10].于昊.磁性介孔氧化硅固定化腈水合酶的制备及应用[D].河北工业大学.2017
论文知识图
