导读:本文包含了基因表达与纯化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,蛋白,李斯特,密码子,鞭毛虫,鳗鲡,夜蛾。
基因表达与纯化论文文献综述
陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰[1]（2019）在《山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化》一文中研究指出山葡萄苯丙胺酸解氨酶(PAL)是苯丙烷途径的关键酶,在果皮着色中能够调控花色苷合成途径。构建PAL基因原核表达重组质粒pET28a-PAL,并对重组蛋白表达条件进行优化,以山葡萄DNA扩增PAL并连接到p MD18-T,筛选得到阳性克隆后连接到pET28a原核表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21后经不同浓度的IPTG、不同诱导温度、不同诱导时间处理,通过DPS设计正交试验优化重组蛋白的表达条件,并将重组蛋白纯化。结果显示,正交试验不同处理下的蛋白表达差异显着(P<0.05),诱导因素的影响程度从强到弱分别为IPTG浓度、温度和时间。IPTG诱导浓度对其影响最显着(P=0.015<0.05),且IPTG浓度为0.6mmol·L-1,诱导温度为22℃,诱导时间为5h时,诱导重组蛋白PAL的效果最佳。成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达,为探究PAL蛋白的表达提供参考。(本文来源于《安徽农业大学学报》期刊2019年05期）
吴文杰,郑国侠,高倩,杜曙光,王云华[2]（2019）在《蓝氏贾第鞭毛虫甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因的克隆、表达与纯化》一文中研究指出目的蓝氏贾第鞭毛虫(简称为贾第虫)甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因(GlMSR),进行原核表达获得其重组蛋白。方法依据GenBank中GlMSR序列设计引物,以贾第虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码序列,将所得片段连接至质粒pET28a以构建原核表达载体pET28a-GlMSR,将pET28a-GlMSR导入大肠杆菌E.coli JM109并挑取阳性克隆进行基因测序和鉴定。用化学方法将经测序验证的重组质粒pET28a-GlMSR转化至E.coli BL21(DE3)。经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside, IPTG)诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白表达结果。收集沉淀中的重组表达产物,镍柱亲和层析纯化带组氨酸标签的重组蛋白,并通过免疫印迹鉴定纯化结果。结果电泳结果显示在约624 bp处出现目的 DNA条带,表明成功得到GlMSR编码序列;PCR鉴定、酶切鉴定以及基因测序结果表明成功构建重组表达载体pET28a-GlMSR,经IPTG诱导后在沉淀中获得目的蛋白,目的蛋白分子量(Mr)约为25 000,与预期分子量(Mr)22 800基本相符。经Western blot分析显示该重组蛋白含有His6标签。结论本研究克隆、表达了蓝氏贾第虫GlMSR基因,并纯化获得重组蛋白,为进一步探索该酶的功能奠定了基础。(本文来源于《中国热带医学》期刊2019年11期）
杨付来,王月华,赵真真,张兰,张燕宁[3]（2019）在《甜菜夜蛾SeGrx1基因的克隆原核表达纯化及酶动力学研究》一文中研究指出克隆甜菜夜蛾(Spodoptera exigua,H(u|¨)bner)的谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)基因,构建甜菜夜蛾的谷氧还蛋白原核蛋白表达系统,最终得到高纯度的谷氧还蛋白,并测定SeGrx1的酶动力学参数。RACE技术克隆甜菜夜蛾SeGrx1基因全长,构建pET16b-SeGrx1原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,用镍柱初步纯化裂解菌液上清可溶性蛋白,Tev酶切除融合蛋白的6x His标签,再用Superdex75/200分子筛进一步纯化,目的蛋白的Western-bloting (WB)验证,酶动力学参数测定。SeGrx1基因的GeneBank的注册号MK318813,构建了表达效率很高的pET16b-SeGrx1重组质粒,最佳诱导方式:在细菌生长至OD_(600)=0.6时加入终浓度0.5mM的IPTG,30℃诱导4h;最佳纯化方式为:先用镍柱纯化菌液上清中可溶性蛋白,20mM,50mM咪唑梯度洗脱杂蛋白,300mM咪唑洗脱融合蛋白;最佳酶切融合蛋白的条件为:在含有0.5mM EDTA和1mM DTT的酶切缓冲液中,去除融合蛋白中的高浓度盐和咪唑,在pro:tev=2:5时(质量比)可以得好的酶切效果;再用Superdex 75/200分子筛进一步纯化,可获得纯度在95%以上目的蛋白。WB验证我们所表达的蛋白就是SeGrx1,以谷胱甘肽还原酶作为反应底物测定酶的活性为3.1倍hGrx1活性,酶学动力学参数Vmax=13.87 (±0.083),Km=6.5 (±0.17)×10～(-3)。成功在体外大量表达高纯度高活性的甜菜夜蛾谷氧还蛋白Grx1,并且获得了它的酶学动力学参数,将为进一步挖掘谷氧还蛋白的生物学功能,为探索以谷氧还蛋白作为特异性杀虫剂靶标打下了基础。(本文来源于《中国植物保护学会2019年学术年会论文集》期刊2019-10-23）
袁媛,陈志,罗卫星,蔡惠芬[4]（2019）在《RERG基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备》一文中研究指出目的:为了制备抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG基因(Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor)上蛋白的相关测定,填补RERG多克隆抗体的研究空白。方法:试验使用已经在实验室中克隆的RERG基因序列用于原核表达载体,构建原核表达载体pET32a-RERG;随后进行RERG蛋白的原核表达;完成RERG蛋白的纯化以及大白兔RERG多克隆抗体的制备与纯化。结果:通过Western-blot鉴定发现RERG的目的条带单一;使用ELISA检测纯化后的抗体效价,说明其效价达到合格抗体标准。结论:试验制作的RERG抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG蛋白的相关测定,填补了RERG的多克隆抗体的研究空白。(本文来源于《黑龙江医药科学》期刊2019年05期）
郭一星,杨银龙,马玥,岳盈盈,宋楠楠[5]（2019）在《鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白的基因密码子优化及异源表达纯化》一文中研究指出目的优化鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白基因密码子并在大肠埃希菌中进行异源表达纯化。方法依据大肠埃希菌密码子偏好性对鼠疫耶尔森菌YopJ基因进行全基因序列优化,并设计引物。分别以密码子优化前后的鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白的基因为模板,将包含YopJ(22aa-288aa)和YopJ(22aa-250aa)的基因片段连接到载体pGI01中。重组质粒转化到大肠埃希菌BL21菌株中,扩大培养后,IPTG诱导目的蛋白表达。提取大肠埃希菌表达蛋白并使用镍离子柱进行纯化。结果鼠疫耶尔森菌YopJ密码子优化前YopJ(22aa-288aa)及YopJ(22aa-250aa)在大肠埃希菌内表达水平较低,密码子优化后YopJ(22aa-288aa)及YopJ(22aa-250aa)在大肠埃希菌内大量表达可溶性YopJ蛋白。结论对鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白进行基因密码子优化能够提高其在大肠埃希菌内的表达量。获得的鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白具有可溶性,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年09期）
刘成倩,李红,高骏,姚惠娟,易建中[6]（2019）在《羧肽酶A抑制剂Latexin基因的原核表达与纯化》一文中研究指出根据Gen Bank上公布的Latexin基因核酸序列设计并合成引物,用RT-PCR方法扩增出Latexin基因,并将其克隆到T载体,转化构建到原核表达载体PET-30a上,得到重组质粒PET-30a-Latexin。将重组质粒转化大肠杆菌transetta(DE3)感受态细胞,并进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析。结果表明:所得重组蛋白大小约32 ku,以可溶形式存在,且该蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。(本文来源于《上海农业学报》期刊2019年05期）
赵加玲,武舒佳,王红,李芊璘,孙金帅[7]（2019）在《结核分枝杆菌H37Rv新基因Rv2742克隆表达及纯化》一文中研究指出Rv2742是本课题组前期基于蛋白质基因组学策略从结核分枝杆菌Mycobacteriumtuberculosis H37Rv中发现、鉴定的遗漏注释基因。文中旨在建立结核分枝杆菌H37Rv漏注释蛋白Rv2742的可溶性诱导表达、纯化体系,为进一步探索Rv2742基因参与的生物学功能奠定基础。前期实验发现构建的pGEX-4T-2-Rv2742、pET-28a-Rv2742、pET-32a-Rv2742及pMAL-c2X-Rv2742原核表达载体均无法实现目的蛋白的诱导表达。但经密码子优化后,仅有pMAL-c2X-Rv2742载体能够实现目的蛋白的可溶性诱导表达。此外,通过比较不同宿主菌、温度及IPTG浓度对目的蛋白表达量的影响,发现目的蛋白在Rosetta (DE3)中,16℃及0.5mmol/LIPTG诱导条件下表达量最高。直链淀粉树脂(Amyloseresin)亲和层析柱纯化获得较纯的产物,经LC-MS/MS验证确认是Rv2742融合蛋白肽段序列。成功获得结核分枝杆菌H37Rv新基因Rv2742的重组蛋白,可进一步开展其潜在相互作用及免疫原性研究工作。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年09期）
李想,黄文树,黄贝,徐继松,翟少伟[8]（2019）在《日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究》一文中研究指出分别以日本鳗鲡(Anguilla japonica)pMD19-T-IFNγ和pMD19-T-IFN-γrel重组克隆质粒为模板,采用PCR方法扩增日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因,而后分别将IFN-γ和IFN-γrel成熟肽的编码序列克隆至原核表达载体pQE30和pET32a上,成功构建了重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel。将重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel分别转化入Escherichia coli M15和Escherichia coli BL21感受态细胞进行表达,并优化IPTG诱导表达体系后用SDS-PAGE电泳鉴定IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白表达形式。IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定。结果显示,重组表达载体pQE30-IFN-γ与pET32a-IFN-γrel分别在E.coli M15和E.coli BL21中得以正确表达。重组IFN-γ蛋白分子量为21 kD左右,表达的融合蛋白以可溶性形式存在;重组IFN-γrel蛋白分子量为31 kD左右,以包涵体形式存在。且两者均在1.0 mmol·L~(-1) IPTG诱导6 h时表达量最高。经镍柱纯化和Western blot检测,成功获得高纯度的IFN-γ和IFN-γrel重组蛋白。建立了日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因的原核表达系统,为进一步研究日本鳗鲡干扰素系统的功能及调控机制奠定了基础。(本文来源于《海洋渔业》期刊2019年05期）
陈月桃,陈谋通,吴清平,张菊梅,程健恒[9]（2019）在《单核细胞增生李斯特菌ladR基因在两种原核表达载体中的克隆表达及纯化分析》一文中研究指出利用特异性引物扩增ladR基因序列,分别构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)ladR基因的两种原核表达载体,即含有6个His标签的pET-28a-ladR表达载体和含有GST标签的pGEX-4T-ladR表达载体。通过诱导时间、温度和浓度优化两种表达载体的蛋白表达条件,比较分析两种表达载体的LadR蛋白可溶性表达水平,利用Western-Blot进行LadR蛋白表达验证。本研究成功构建了pET-28a-ladR和pGEX-4T-ladR表达载体,在大肠杆菌BL21中分别表达出His-LadR和GST-LadR融合蛋白。通过凝血酶切除GST标签,纯化后得到LadR蛋白。在最佳表达条件IPTG为0.5 mmol/L,22℃诱导过夜下,pGEX-4T-ladR表达载体中LadR的表达量比pET-28a-ladR(IPTG为1.0 mmol/L,22℃诱导过夜)中His-LadR蛋白的表达量高4.48倍。本研究结果表明,GST标签有利于ladR基因的可溶性表达,为后续的LadR蛋白的功能分析和转录调控机理研究奠定了良好基础。(本文来源于《现代食品科技》期刊2019年10期）
曾凤娇,杨琳,刘建国,田源,陈靖[10]（2019）在《牙龈卟啉单胞菌血凝集素黏附结构域ha2基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化》一文中研究指出目的在原核表达质粒pET21a-ha2成功构建的基础上,诱导目的基因在大肠杆菌中表达,进行表达产物的纯化及鉴定。方法原核表达质粒pET21a-ha2经PCR鉴定后,转入大肠杆菌Rosetta感受态细胞诱导筛选,经SDS-PAGE电泳检测,IPTG诱导表达。通过包涵体的变复性、Millipore超滤系统的滤浓缩、Ni-TA层析分离纯化HA2蛋白。结果原核表达质粒pET21a-ha2转化大肠杆菌经IPTG诱导后,成功表达HA2蛋白,大小约15 kD,与预计目的蛋白大小相同。HA2纯化蛋白浓度为0.449 mg/mL,经测序与NCBI蛋白数据库比对无突变。结论 pET21a-ha2可在大肠杆菌中成功表达,并成功得到纯化的HA2蛋白。(本文来源于《遵义医学院学报》期刊2019年04期）
基因表达与纯化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的蓝氏贾第鞭毛虫(简称为贾第虫)甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因(GlMSR),进行原核表达获得其重组蛋白。方法依据GenBank中GlMSR序列设计引物,以贾第虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码序列,将所得片段连接至质粒pET28a以构建原核表达载体pET28a-GlMSR,将pET28a-GlMSR导入大肠杆菌E.coli JM109并挑取阳性克隆进行基因测序和鉴定。用化学方法将经测序验证的重组质粒pET28a-GlMSR转化至E.coli BL21(DE3)。经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside, IPTG)诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白表达结果。收集沉淀中的重组表达产物,镍柱亲和层析纯化带组氨酸标签的重组蛋白,并通过免疫印迹鉴定纯化结果。结果电泳结果显示在约624 bp处出现目的 DNA条带,表明成功得到GlMSR编码序列;PCR鉴定、酶切鉴定以及基因测序结果表明成功构建重组表达载体pET28a-GlMSR,经IPTG诱导后在沉淀中获得目的蛋白,目的蛋白分子量(Mr)约为25 000,与预期分子量(Mr)22 800基本相符。经Western blot分析显示该重组蛋白含有His6标签。结论本研究克隆、表达了蓝氏贾第虫GlMSR基因,并纯化获得重组蛋白,为进一步探索该酶的功能奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因表达与纯化论文参考文献
[1].陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰.山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化[J].安徽农业大学学报.2019
[2].吴文杰,郑国侠,高倩,杜曙光,王云华.蓝氏贾第鞭毛虫甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因的克隆、表达与纯化[J].中国热带医学.2019
[3].杨付来,王月华,赵真真,张兰,张燕宁.甜菜夜蛾SeGrx1基因的克隆原核表达纯化及酶动力学研究[C].中国植物保护学会2019年学术年会论文集.2019
[4].袁媛,陈志,罗卫星,蔡惠芬.RERG基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备[J].黑龙江医药科学.2019
[5].郭一星,杨银龙,马玥,岳盈盈,宋楠楠.鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白的基因密码子优化及异源表达纯化[J].中国病原生物学杂志.2019
[6].刘成倩,李红,高骏,姚惠娟,易建中.羧肽酶A抑制剂Latexin基因的原核表达与纯化[J].上海农业学报.2019
[7].赵加玲,武舒佳,王红,李芊璘,孙金帅.结核分枝杆菌H37Rv新基因Rv2742克隆表达及纯化[J].生物工程学报.2019
[8].李想,黄文树,黄贝,徐继松,翟少伟.日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究[J].海洋渔业.2019
[9].陈月桃,陈谋通,吴清平,张菊梅,程健恒.单核细胞增生李斯特菌ladR基因在两种原核表达载体中的克隆表达及纯化分析[J].现代食品科技.2019
[10].曾凤娇,杨琳,刘建国,田源,陈靖.牙龈卟啉单胞菌血凝集素黏附结构域ha2基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化[J].遵义医学院学报.2019
论文知识图
