鸭源鸡杆菌gtxA/flfA基因双缺失株的构建及其生物学特性分析

论文摘要

为了解RTX样毒素Gtx A及F-17菌毛的flfA基因在鸭源鸡杆菌中的功能,本研究利用自然转化法对鸭源鸡杆菌RZΔgtxA进一步缺失flfA基因构建RZΔgtxAΔflfA菌株,通过分析其生长特性、生物被膜形成能力、黏附能力及对细胞毒性的变化,探究其与鸭源鸡杆菌致病性可能的关系。结果显示,RZΔgtxAΔflfA能稳定遗传flfA基因的缺失;单双基因突变株溶血活性均消失,但二者菌落形态及生长速率并未出现显著改变;二者生物被膜形成能力均明显下降（p<0.001）,但RZΔgtxAΔflfA相比RZΔgtxA生物被膜形成能力稍有增强但差异不显著;二者对鸡原代输卵管上皮细胞的黏附能力及毒性均减弱（p<0.05）,且RZΔgtxAΔflfA对细胞的黏附能力减弱更明显（p<0.01）。以上结果表明,GtxA毒素和F-17菌毛在鸭源鸡杆菌黏附及对鸡原代输卵管上皮细胞的毒力中起重要作用,且呈现明显的协同关系。本研究为鸭源鸡杆菌致病机理的探究奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株与质粒
•   1.2主要试剂和培养基
•   1.3 引物的设计与合成
•   1.4 同源重组质粒pUC18-S-K-X的构建与鉴定
•   1.5 缺失株RZΔgtxAΔflf A的构建及筛选
•   1.6 缺失株RZΔgtxAΔflf A的we s te rn blot鉴定
•   1.7 缺失株RZΔgtxAΔflf A的遗传稳定性检测
•   1.8 缺失株RZΔgtxAΔflf A生长特性试验
•   1.9 缺失株RZΔgtxAΔflf A生物被膜形成能力测定
•   1.1 0 缺失株RZΔgtxAΔflf A黏附能力测定
•   1.1 1 缺失株RZΔgtxAΔflf A的细胞毒性试验
• 2 结果
•   2.1 重组质粒pUC18-S-K-X的构建与鉴定
•   2.2 缺失株RZΔgtxAΔflf A的P CR鉴定结果
•   2.3 缺失株RZΔgtxAΔflf A的we s te rn blot鉴定结果
•   2.4 缺失株RZΔgtxAΔflf A的遗传稳定性检测结果
•   2.5 缺失株RZΔgtxAΔflf A生长特性的检测结果
•   2.6 缺失株RZΔgtxAΔflf A生物被膜形成能力测定结果
•   2.7 缺失株RZΔgtxAΔflf A黏附能力测定结果
•   2.8 缺失株RZΔgtxAΔflf A的细胞毒性测定结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘盼盼,王继洋,杨霞,刘红英,李永涛,常洪涛,王新卫,夏银河,陈陆,赵军,王川庆

关键词: 鸭源鸡杆菌,菌毛

来源: 中国预防兽医学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学禽病研究所

基金: 国家自然科学基金项目(31302090),河南省自然科学基金(162300410153),河南省科技攻关(172102110046)

分类号: S852.61

页码: 1099-1105

总页数: 7

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