猪圆环病毒2型ORF3蛋白的原核表达及抗体检测ELISA方法的建立

论文摘要

通过外源表达PCV2 ORF3蛋白,为ORF3蛋白的抗体制备和检测提供基础材料。根据PCV2的ORF3基因序列设计特异性引物,克隆ORF3全基因,构建重组原核表达质粒,转入大肠埃希菌进行表达,将纯化的蛋白包被ELISA板,建立ORF3抗体检测ELISA方法。结果表明,获得了重组pGEX-6p-1-ORF3原核表达质粒,最佳表达条件为37℃,225 r/min,IPTG 1.0 mmol/L诱导5 h;建立的ELISA检测方法可以检测PCV2阳性血清,与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清无交叉反应。本试验为ORF3抗体制备提供了基础材料,也为PCV2抗体检测提供了可选择方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1毒株、菌株、抗体与主要试剂
•   1.2引物设计与基因克隆
•   1.3重组质粒pGEX-6p-ORF3的构建
•   1.4重组质粒的诱导表达和蛋白纯化
•   1.5 猪圆环病毒2型抗体检测间接ELISA方法的建立
•     1.5.1 ORF3蛋白包被浓度与血清稀释度的确定
•     1.5.2封闭液的选择
•     1.5.3血清最佳反应时间的确定
•     1.5.4显色时间的确定
•     1.5.5间接ELISA阴阳性临界值的确定
•     1.5.6特异性试验
•     1.5.7临床血清样品检测
• 2 结果
•   2.1 猪圆环病毒2型ORF3蛋白的原核表达与纯化
•     2.1.1目的基因的扩增
•     2.1.2重组质粒的鉴定与表达
•     2.1.3 GST-ORF3重组蛋白纯化的鉴定
•   2.2 猪圆环病毒2型抗体间接ELISA方法的建立与应用
•     2.2.1抗原最佳包被浓度和血清稀释度的确定
•     2.2.2封闭液的选择
•     2.2.3血清最佳反应时间的确定
•     2.2.4显色时间的确定
•     2.2.5间接ELISA阴阳性临界值的确定
•     2.2.6特异性试验结果
•     2.2.7临床血清样品检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李鑫鑫,张广芳,吕其壮,张彦明,郭抗抗

关键词: 猪圆环病毒型,蛋白,原核表达,间接,抗体检测

来源: 中国兽医杂志 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西北农林科技大学动物医学院

基金: 国家自然科学基金(31672580)

分类号: S852.651

页码: 13-17

总页数: 5

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