导读:本文包含了报告基因方法论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:细菌外膜囊泡,外膜蛋白,荧光素酶
报告基因方法论文文献综述
刘畅,李楚楚,李智洋[1]（2019）在《基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立》一文中研究指出目的建立一种基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法。方法利用细菌外膜囊泡表面携带高丰度细菌外膜蛋白A(OmpA)的特点,构建OmpA-NanoLuc荧光素酶融合蛋白,根据荧光素酶活性评估样品中的细菌外膜囊泡数量。结果成功构建OmpA-NanoLuc融合蛋白表达载体,受试菌株在表达该融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有稳定的荧光素酶活性。可通过检测荧光素酶活性的方式对细菌外膜囊泡进行半定量检测。结论建立了一种基于荧光素酶标记的细菌外膜囊泡半定量检测方法,可用于评估特定菌株的细胞外膜囊泡分泌水平。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2019年10期）
刘春雨,王馨,于传飞,徐刚领,王兰[2]（2019）在《基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用》一文中研究指出目的:利用转基因细胞法建立抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay system)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,同时对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗ADCC效应的评价。结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始工作质量浓度为4 000 ng·mL~(-1),1∶4倍的稀释倍数,效靶比为15∶1,诱导时间为20 h。该方法具有良好的专属性;3次独立检测的板间、日间最大诱导倍数(fold of induction,FI)及半数有效浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的RSD均小于10%; 4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)%、(71.18±1.55)%、(133.17±9.91)%以及(166.55±15.73)%;对应的回收率分别为(92.53±4.01)%、(94.91±2.07)%、(106.54±7.93)%、(111.04±10.48),RSD均小于10%,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应评价。结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2019年01期）
李建华,王步森,吴诗坡,王玉东,赵拯浩[3]（2018）在《利用报告基因的人7型腺病毒中和抗体检测方法的建立》一文中研究指出目的:构建表达萤光素酶报告基因的重组人7型腺病毒(HAdV7)Ad7-dE1-dE3-Luc(Ad7-Luc)病毒,用于检测人群中HAdV7的中和抗体水平。方法:利用同源重组方法构建E1区和E3区部分缺失,并在E1区嵌入萤光素酶基因表达框的pAd7-Luc重组质粒,转染HEK-293细胞,包装出能够表达萤火虫萤光素酶的Ad7载体重组病毒(Ad7-Luc);选取HAdV7阳性血清样本对新建立的报告基因检测方法的准确性和稳定性进行验证;最后,利用该方法对北京地区60份血清样本进行HAdV7中和抗体检测。结果:获得能够表达萤火虫萤光素酶的Ad7-Luc重组病毒,病毒滴度可达4.85×10~8IFU/mL,Ad7-Luc检测法与传统细胞病变效应(CPE)法具有很好的一致性(R~2=0.8612,P<0.0001),批内和批间差异分别在10%和20%以内。北京地区60例血清样本的检测结果显示,HAdV7血清阳性率约为60%(36/60),明显低于HAdV5血清阳性率75%(45/60),75%的HAdV7阳性血清中和抗体滴度集中于低滴度水平(12～200)。结论:与传统的细胞病变方法相比,HAdV7中和抗体报告基因检测方法更快速、灵敏、准确,适用于人群中HAdV7血清流行病学调查及其疫苗的中和抗体研究。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年06期）
李萌,于传飞,王兰[4]（2018）在《基于报告基因的抗IFNR1单抗生物学活性测定方法的建立》一文中研究指出目的:建立抗Ⅰ型干扰素受体亚基1单抗(抗IFNR1单抗)的生物学活性检测方法。方法:利用HEK293-ISRE-Luc细胞系,通过荧光素酶检测系统(ONE-Glo?Luciferase Assay System),进行抗IFNR1单抗生物学活性检测,并对该方法进行精密度、准确度、专属性的验证。结果:抗IFNR1单抗在该方法中均存在量效关系,利用四参数方程拟合成4S型曲线,50%、75%、100%、125%及150%的加标样品相对效价(n=3)分别为(49.58±2.90)%(RSD=5.8%)、(76.27±5.12)%(RSD=6.7%)、(99.84±4.21)%(RSD=4.2%)、(123.08±2.58)%(RSD=2.1%)、(158.69±4.72)%(RSD=3.0%),RSD均小于10%;加样回收率分别为(99.16±5.81)%、(101.69±6.82)%、(99.84±4.21)%、(98.47±2.06)%和(105.80±3.14)%,RSD均小于10%;专属性良好。结论:建立的抗IFNR1单抗生物学活性检测方法,可作为抗IFNR1单抗生物学活性的常规检测方法。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2018年10期）
王绿音[5]（2018）在《基于报告基因的促卵泡激素(FSH)体外生物学活性测定方法研究和建立》一文中研究指出生物学活性是促卵泡激素(FSH)产品质控中的重要指标,国内外目前没有成熟的体外活性测定方法可以替代各国药典收录的体内活性测定法——大鼠卵巢增重法。本研究利用转入促卵泡激素(FSH)受体及荧光素酶报告基因的转基因细胞,通过准确性、精密度、耐用性、线性与范围、专属性等各个参数的全面方法学研究,建立了准确、灵敏、快速、重复性好的FSH体外活性检测方法。本研究为基于细胞的重组人促卵泡激素体外生物活性替代方法的应用推广打下了基础,同时为其他激素类药物活性测定替代方法及相关生物学活性测定标准物质研究提供参考。(本文来源于《第六届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编》期刊2018-07-22）
程智洁[6]（2018）在《基于MOA的报告基因生物活性检测方法在加速单药和联合免疫治疗中的进展和应用（英文）》一文中研究指出Immune checkpoint receptors play critical roles in maintaining immune homeostasis and are critically associated with autoimmune disease,cancer and persistent viral infections.Antibodies targeting immune checkpoints have emerged as promising approach to enhance anti-tumor immune responses.A significant challenge in the development of biologics that target immune checkpoints is access to quantitative and reproducible potency bioassays when traditional methods rely on primary cells and lengthy and tedious measurement of cytokine production.Here,I will present the latest advancement on novel reporter gene potency bioassay development and demonstrate how they can be used for a broad range of applications including QC lot release during drug development for single and combination immunotherapy.In the case studies,I will present data on immune checkpoint bioassays for monoclonal antibody targeting single receptor(PD-1,CTLA-4,LAG-3,4-1 BB,ICOS),and several combination bioassays designed for bispecific antibodies targeting PD-1 and a second immune checkpoint receptor.(本文来源于《第六届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编》期刊2018-07-22）
范德玲,吉贵祥,杨先海,汪贞,王蕾[7]（2017）在《基于CV-1细胞雌激素受体报告基因试验方法建立及双酚A类似物雌激素效应的检测》一文中研究指出以荧光素酶为报告基因,通过雌激素反应元件调控的带有荧光素酶报告基因质粒pERE-TATA-Luc和雌激素受体表达质粒rERa/pCI,采用瞬时共转染方法,将Luc报告基因质粒和受体表达质粒共转染至非洲猴肾CV-1细胞,以雌二醇作为阳性对照物,其浓度为10~(-10)mol·L~(-1)时显着诱导荧光素酶的表达,浓度为10~(-9)mol·L~(-1)时达最大值,半数效应浓度EC50值为6.1×10~(-11)mol·L~(-1)。通过雌二醇、己烯雌酚和木黄酮检测系统的灵敏性、有效性和稳定性验证,建立实验室稳定、灵敏的雌激素受体报告基因细胞系。基于非洲猴肾CV-1细胞受体报告基因试验,研究双酚A类似物拟雌激素干扰活性,雌激素活性大小顺序为BPAF>BPF>BPB>BPA>BPZ>BPAP>BPS>BPP。结果表明,CV-1细胞受体报告基因试验是一种筛选雌激素活性内分泌干扰物的快速、有效的方法。(本文来源于《生态与农村环境学报》期刊2017年10期）
杨雅岚[8]（2017）在《报告基因法测定PD-1/PD-L1以及IL-6/IL-6R抗体生物学活性方法的建立》一文中研究指出本课题是在报告基因技术的基础上,通过构建稳定表达特定分子的细胞,建立了抗PD-1/PD-L1抗体和抗IL-6/IL-6R抗体的生物学活性方法。1、通过构建稳定表达PD-L1分子和抗CD3单链抗体分子的CHO细胞和稳定表达PD-1分子和NFAT驱动的报告基因的Jurkat细胞建立了抗PD-1/PD-L1抗体生物学活性方法,在细胞水平模拟了抗PD-1/PD-L1抗体的作用机理,本方法专属性、准确性和精密性良好,操作简单,耗时较短,已完成对7家企业的技术培训,完善了此类抗体的质控标准,为抗PD-1/PD-L1抗体的研发提供了帮助。2、构建了表达荧光素酶报告基因的IL-6生长依赖性DS-1-SIE细胞,通过报告基因是否表达来验证抗IL-6/IL-6R抗体的阻断效果。初步建立了抗IL-6/IL-6R抗体的生物学活性方法,本方法经过优化,呈现出较好的剂量反应曲线。本方法耗时短,且方法简便,可以解决传统方法实验周期长、步骤繁琐等问题。(本文来源于《第五届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编》期刊2017-07-18）
丛梅[9]（2017）在《用于Fc gamma受体依赖性免疫激活抗体筛选的报告基因生物活性检测方法的开发（英文）》一文中研究指出(本文来源于《第五届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编》期刊2017-07-18）
杨雅岚[10]（2017）在《PD-1/PD-L1以及IL-6/IL-6R靶点单抗基于报告基因的生物学活性方法建立》一文中研究指出转基因技术的快速发展为构建稳定表达某种特定蛋白的细胞株提供了技术支撑,报告基因法就是应用这一原理,将报告基因转入细胞中,利用报告基因的表达指示细胞信号通路对特定分子的反应。生物学活性评价是针对抗体类药物等大分子生物制品有效成分、含量以及药物效价的测定,是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。将报告基因法应用于抗体类药物生物学活性方法,具有操作简单、时间周期短、变异小等优点,并且可以克服免疫检查点抑制剂没有敏感性细胞株等弊端。PD-1/PD-L1抗体是目前肿瘤免疫治疗领域最为火爆的免疫检查点抑制剂,已经批准上市的有Pembrolizumab、Nivolumab、Atezolizumab、Avelumab和Durvalumab,用于晚期黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、霍奇金淋巴瘤等多种癌症的治疗,但是由于没有敏感细胞株,PD-1/PD-L1抗体还没有基于细胞的生物学活性方法,因此我们选择用报告基因的方法来建立抗PD-1/PD-L1抗体生物学活性方法。首先构建稳定表达PD-L1分子和抗CD3单链抗体的CHO-PD-L1-CD3L细胞和稳定表达PD-1分子和NFAT报告基因的Jurkat-PD-1-NFAT细胞,然后建立和优化抗PD-1/PD-L1抗体生物学活性方法并进行方法学验证,包括专属性、准确性、精密性和细胞稳定性。将本方法适用于不同序列以及不同类型的抗PD-1/PD-L1抗体均有较好的剂量反应曲线,证明本方法可是作为平台方法评价抗PD-1/PD-L1抗体的生物学活性。单克隆抗体药物另一个重要的适应症是自身免疫病。托珠单抗(商品名:雅美罗)特异性靶向IL-6R,阻断IL-6和IL-6R信号转导通路,可以有效地缓解类风湿性关节炎。但是托珠单抗目前放行的生物学活性方法实验周期长、操作复杂,因此我们构建稳定转染报告基因的IL-6依赖型细胞DS-1,通过报告基因的表达评价托珠单抗的阻断效果。经过对IL-6作用时间、起始浓度以及托珠作用浓度和稀释倍数的优化,可以得到较好的剂量反应曲线。通过本课题的研究,建立了两种测定抗体类药物生物学活性的方法,完善了抗PD-1/PD-L1抗体的质控方法和相应标准,优化了抗IL-6/IL-6R单抗的生物学活性方法,大大促进了报告基因在药物质量控制中应用,为今后更多靶点药物生物学活性方法的建立提供了技术支撑。(本文来源于《中国食品药品检定研究院》期刊2017-06-01）
报告基因方法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:利用转基因细胞法建立抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay system)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,同时对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗ADCC效应的评价。结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始工作质量浓度为4 000 ng·mL~(-1),1∶4倍的稀释倍数,效靶比为15∶1,诱导时间为20 h。该方法具有良好的专属性;3次独立检测的板间、日间最大诱导倍数(fold of induction,FI)及半数有效浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC50)的RSD均小于10%; 4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)%、(71.18±1.55)%、(133.17±9.91)%以及(166.55±15.73)%;对应的回收率分别为(92.53±4.01)%、(94.91±2.07)%、(106.54±7.93)%、(111.04±10.48),RSD均小于10%,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应评价。结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
报告基因方法论文参考文献
[1].刘畅,李楚楚,李智洋.基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立[J].临床检验杂志.2019
[2].刘春雨,王馨,于传飞,徐刚领,王兰.基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用[J].药物分析杂志.2019
[3].李建华,王步森,吴诗坡,王玉东,赵拯浩.利用报告基因的人7型腺病毒中和抗体检测方法的建立[J].生物技术通讯.2018
[4].李萌,于传飞,王兰.基于报告基因的抗IFNR1单抗生物学活性测定方法的建立[J].药物分析杂志.2018
[5].王绿音.基于报告基因的促卵泡激素(FSH)体外生物学活性测定方法研究和建立[C].第六届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编.2018
[6].程智洁.基于MOA的报告基因生物活性检测方法在加速单药和联合免疫治疗中的进展和应用（英文）[C].第六届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编.2018
[7].范德玲,吉贵祥,杨先海,汪贞,王蕾.基于CV-1细胞雌激素受体报告基因试验方法建立及双酚A类似物雌激素效应的检测[J].生态与农村环境学报.2017
[8].杨雅岚.报告基因法测定PD-1/PD-L1以及IL-6/IL-6R抗体生物学活性方法的建立[C].第五届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编.2017
[9].丛梅.用于Fcgamma受体依赖性免疫激活抗体筛选的报告基因生物活性检测方法的开发（英文）[C].第五届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编.2017
[10].杨雅岚.PD-1/PD-L1以及IL-6/IL-6R靶点单抗基于报告基因的生物学活性方法建立[D].中国食品药品检定研究院.2017