导读:本文包含了生殖细胞共培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:生殖细胞,细胞,精子,体外,大鼠,发生,干细胞。
生殖细胞共培养论文文献综述
谢丽春,杨汉华,赖秀蓝,陈晓东,陈业增[1]（2016）在《人脐带间充质干细胞与sertoli细胞共培养下向男性生殖细胞分化的研究》一文中研究指出目的探讨用睾丸支持细胞(SCs)模拟的睾丸微环境,通过共培养技术诱导人脐带间充质干细胞(HUMSCs)向男性生殖细胞分化的可能性,为男性不育治疗寻求一种新的途径。方法采用差异贴壁法分离、培养、扩增出HUMSCs,从新生昆明小鼠的睾丸中分离培养出SCs,制备SCs饲养层,将HUMSC:s加入SCs饲养层中共培养,显微镜观察诱导前及诱导后第7 d、14 d细胞的形态学变化;RT-PCR、细胞免疫荧光检测男性生殖细胞相关标记DAZL、VASA及Stella的表达。结果 HUMSCs在共培养体系中逐渐失去细小成纤维样的形状,形成类似精原细胞样的圆形细胞菌落,诱导7 d、14 d后,RT-PCR、细胞免疫荧光均可以检测到男性生殖细胞特异性标记VASA、DAZL及Stella的表达。结论在睾丸SCs模拟的睾丸微环境,HUMSCs不仅发生形态学的变化,而且能表达生殖细胞的特异生物学特性,表明在特定的微环境中,细胞与细胞间的相互接触是微环境中控制HUMSCs向男性生殖细胞方向分化的必不可少的因素。SCs与HUMSCs的直接接触诱导其向男性生殖细胞分化的诱导研究,为迫切需要的男性不育治疗提供了一个新的实验参考系统。(本文来源于《中国小儿血液与肿瘤杂志》期刊2016年06期）
李莹,陈颖,桂博,孟祥,孙祖越[2]（2016）在《雷公藤甲素作用于共培养体系中雄性动物生殖细胞毒性研究》一文中研究指出目的:将分离、富集的精原细胞接种于制备好的支持细胞饲养层上进行培养,研究睾丸支持细胞对睾丸生精细胞体外培养的影响,同时检测雷公藤甲素对体外单独培养睾丸支持细胞、生精细胞以及两者体外共培养的毒性。方法:(1)取鼠龄16~22d的雄性ICR小鼠睾丸,采用胶原酶、透明质酸酶、胰蛋白酶和DNA酶消化分离支持细胞,经低渗处理及多次差异贴壁法进行纯化,倒置相差显微镜和苏木精-伊红(HE)染色观察细胞生长和形态,通过Fas-L免疫细胞染色法鉴定支持细胞。(2)另取鼠龄7~8天的雄性ICR小鼠睾丸,相同方法消化制备小鼠睾丸生殖细胞悬液,用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞,差异贴壁法进一步纯化,采用碱性磷酸酶染色和c-kit免疫细胞染色法鉴定精原细胞。(3)以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,观察SSCs的生长情况。(4)采用cck-8法检测不同剂量组雷公藤甲素对支持细胞、精原细胞以及两者体外共培养的毒性,计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果:在体外成功培养出小鼠睾丸支持细胞、精原细胞,并且观察到在以支持细胞为饲养层的共培养体系中精原细胞增殖生长良好。经cck-8试剂盒检测,雷公藤甲素对两种细胞及其共培养细胞都有细胞毒性,均呈剂量递增。细胞半数抑制浓度(IC_(50))分别为4.22×10~5ng/ml、9.96×10~3ng/ml、4.85×10~4ng/m。。结论:采用组合酶消化法、Percoll不连续密度梯度离心法和差异贴壁法,可达到分离、培养、纯化小鼠支持细胞和精原细胞的目的。建立了支持细胞和精原细胞体外单独培养和共培养体系。经丝裂霉素处理制备的支持细胞饲养层,能有效促进精原细胞的生长。雷公藤甲素对小鼠支持细胞、精原细胞及两者共培养体系有细胞毒性,提示其具有一定的生殖毒性。(本文来源于《中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次（2016年）学术交流大会论文集》期刊2016-05-13）
刘林洪[3]（2012）在《大鼠睾丸组织支持细胞/生殖细胞长期共培养的精子发生分析及猪精原干细胞的体外初步研究》一文中研究指出虽然对精子发生过程的研究取得了很多进展,但是体内体外研究模型的缺乏导致依然有众多问题未得到解决。哺乳动物的精子发生是通过复杂的增殖分化过程最终产生精子。睾丸发育、成熟与精子发生的研究受限于模式动物,对大型家畜和人的研究很少。睾丸体外生殖模型的发展为体外研究睾丸的精子发生分子机制和睾丸毒理学提供实验工具。但是,很多已建立的模型都无法真正模拟体内的复杂的生化分子及功能性相互作用,从而导致其研究价值有限。精子发生过程发生在生精上皮,包含叁个过程。第一.精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)通过有丝分裂增殖更新保持着SSCs数目恒定以及进一步分化为下游SSCs。下游SSCs继续更新发育为B型SSCs。第二.B型SSCs形成前细线型初级精母细胞。形成DNA联会复合体后,前细线型初级精母细胞进一步完成减数分裂形成2个次级精母细胞,最后形成圆形精子细胞。第叁.圆形精子细胞完成变态过程,成为长形精子。综上,精子发生的基础是SSCs。SSCs因为在睾丸中的数目很少且很难分离纯化导致研究SSCs的增殖更新分化很困难。虽然在体内通过形态学可以鉴定和定位SSCs,然而这个方法不能用于鉴定体外分离纯化的SSCs。因此,建立一个完善的体夕SSCs培养鉴定体系对于研究SSCs的增殖更新十分关键。1.大鼠睾丸曲细精管组织支持细胞/生殖细胞长期共培养与精子发生分析本实验已经建立了大鼠睾丸曲细精管组织支持细胞//殖细胞长期共培养体系。采用大鼠睾丸组织块培养法,将15日龄的大鼠睾丸组织,用含10%标准胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养液进行培养。体系中的支持细胞和生殖细胞均由曲细精管组织块迁移到培养皿上,在不添加任何生长因子的情况下维持体外精子发生至圆形精子细胞超过2.5个月。在培养1-2周时,可观察到从曲细精管中游离出的支持细胞贴壁生长；生殖细胞在支持细胞附近贴壁生长。从共培养两周开始,体系中能一直观察到各级精母细胞和精子细胞,说明体系中存在有精原干细胞不断地进行减数分裂分化为精母细胞和精子细胞。2.大鼠睾丸曲细精管组织支持细胞/生殖细胞长期共培养中各类细胞的鉴定本实验建立了一个体外支持细胞/生殖细胞共培养体系。RT-PCR分析显示共培养细胞稳定表达cdhl1、scp3、tnp2,免疫荧光染色结果显示CDH1、PLZF、SCP3以及SOX9阳性细胞存在。这些结果例证了体系中同时存在精原干细胞、精母细胞、精子细胞和支持细胞。这一结果进一步弥补了形态学观察上的不足,表明了组织块和共生的支持细胞为生殖细胞的增殖和分化提供了营养因子和调节因子。实验中建立的体外共培养体系可用于雄性生殖分子机制研究和环境毒理学研究。3.猪精原干细胞的分离纯化及长期培养本实验以10周斯格猪为研究对象,利用两步酶消化法分离得到睾丸曲细精管细胞悬液,根据精原干细胞与体细胞及各级分化生精细胞的贴壁能力及对细胞外基质粘附力的不同,将猪精原干细胞进行差异贴壁纯化。统计表明：每2g猪睾丸大约可以得至SSCs数目为2×105个,且得到的SSCs具有很高的活力和增殖能力,是一种高效的猪SSCs分离纯化方法。实验还建立了猪SSCs体外长期培养系统,该系统以丝裂霉素处理的STO细胞为滋养层,使用了添加(DNF、bFGF、GFRα1及B-27的无血清培养液。在该培养体系中,猪SSCs连续培养超过6个月,传代超过20代,培养中均能保持葡萄串状的SSCs细胞克隆形态不变。而且可在体外任意培养时期进行冷冻保存,解冻后可迅速恢复生长。此外,本实验运用睾丸冰冻切片免疫荧光染色对斯格猪睾丸内SSCs的形态及定位进行了检测,并证实用于体外分离培养的猪精原干细胞鉴定的标记基因DBA、PGP9.5、OCT4和PLZF是可靠的猪SSCs的标记基因。通过这些标记基因对长期培养的猪SSCs进行蛋白水平的鉴定。经细胞免疫荧光分析,体外分离培养的猪SSCs同时表达DBA、PGP9.5、OCT4和PLZF这几个体内SSCs表达的标记基因蛋白质产物。为下一步猪SSCs的研究奠定基础。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2012-06-01）
刘林洪,史小芳,罗奋华,于泊洋,张岩[4]（2012）在《大鼠睾丸曲细精管组织支持细胞/生殖细胞长期共培养与精子发生分析》一文中研究指出睾丸体外生殖模型的发展为体外研究睾丸的精子发生分子机制和睾丸毒理学提供了实验工具。很多报道的模型都无法真正地模拟体内复杂的生化分子及功能性相互作用从而导致研究价值有限。该实验拟建立一个体外长期维持睾丸生殖细胞存在,并能持续产生精子细胞的支持细胞/生殖细胞共培养体系。体系中的支持细胞和生殖细胞均由曲细精管组织块迁移到培养皿上,在不添加任何生长因子的情况下维持体外精子发生至圆形精子细胞超过2个月。RT-PCR分析显示,共培养细胞稳定表达cdh1、scp3、tnp2;免疫荧光染色结果显示,CDH1、PLZF、SCP3以及SOX9阳性细胞存在。这些结果例证了体系中同时存在精原干细胞、精母细胞、精子细胞和支持细胞。简单高效的支持细胞/生殖细胞体外共培养体系可用于雄性生殖的分子机制和毒理学研究。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2012年05期）
白音巴图[5]（2009）在《绵羊雄性生殖细胞体外共培养体系的初步建立及对各级生殖细胞的鉴定》一文中研究指出哺乳动物精子发生的研究已成为当今生殖生物学领域中的一个热点,并取得了很大的进展。但目前关于精原干细胞自我更新及分化的分子机制及有关信号通路、生精细胞减数分裂后的精子成熟机制等仍需深入研究,而且精子细胞分化为成熟精子的体外试验至今也未见报道。生殖细胞体外培养技术的发展则为这些问题的解决提供了可能。研究者可直接对所培养的各级生精细胞进行观察、处理及分析,进而在体外研究精子发生过程的相关机制及其中起作用的因子和基因等。因而建立稳定有效的生殖细胞培养系统是非常必要的。本研究初步建立了绵羊雄性生殖细胞体外共培养系统,同时为从分子水平对共培养系统中各级生殖细胞的存活进行检测,首次成功克隆了绵羊各级生殖细胞的特异标记基因,如E型钙粘连蛋白基因(E-cadherin gene,cdh1)、联会复合体蛋白3基因(synaptonemal complex protein-3 gene,scp3)、过渡蛋白1基因(Transition protein-1 gene,tnp1)和过渡蛋白2基因(Transition protein-2 gene,tnp2),并利用得到的cDNA序列进行引物设计,用于转录表达分析来鉴定绵羊生殖细胞共培养系统中的各级生殖细胞。另外构建了精原干细胞的特异表达基因cdh1部分编码序列的原核表达载体,制备了CDH1抗原表位蛋白,以期制备多克隆抗体,为今后精原干细胞的研究提供细胞表面标记,从而为将来绵羊精原干细胞的相关研究奠定基础。1、绵羊cdh1、scp3、tnp1和tnp2基因的克隆本研究成功克隆了绵羊cdh1、scp3、tnp1和tnp2基因,分别获得了2799bp、855bp、246bp和340bp的cDNA序列,其中cdh1、scp3和tnp1分别获得了2652bp、708bp和168bp的全部编码区序列,tnp2基因得到了340bp的部分编码区序列。序列分析表明,在进化水平上cdh1、scp3和tnp1高度保守,而tnp2也具有较高的保守性。2、绵羊雄性生殖细胞体外共培养体系的初步建立及鉴定本研究首次建立了绵羊雄性生殖细胞体外共培养体系。采用绵羊睾丸组织块培养法,将4月龄的绵羊睾丸组织,在无菌条件下,用含10%灭活的标准胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养液进行培养。在培养1～2周后,可观察到从曲细精管中游离出的支持细胞贴壁生长;生殖细胞或贴壁生长,或在贴壁细胞表面运动。从共生细胞培养两周开始,能一直观察到精母细胞和精子细胞,说明共生培养过程中精原干细胞不断地分化为精母细胞和精子细胞。此培养系统不需外加生长因子,在含10%FBS培养液中,精原干细胞、精母细胞、圆形精子细胞和支持细胞可长期共生达10周以上。特异标记基因的转录表达分析结果显示在体外培养长达10周后,仍能检测到cdh1、scp3、tnp2、wt1和gapdh的转录表达,表明了此培养系统的生殖细胞在支持细胞的滋养下可在体外环境下持续地进行精子发生的过程。这一结果进一步弥补了形态学观察上的不足,表明了组织块和共生的支持细胞为生殖细胞的增殖和分化提供了营养因子和调节因子。3、绵羊cdh1基因原核表达载体的构建及CDH1多肽抗原的制备为了鉴定绵羊生殖细胞中的精原干细胞,本研究在原核表达系统中表达和纯化制备了CDH1抗原表位蛋白。采用PCR方法扩增得到cdh1目的片段,经双酶切回收目的片段后,将其与原核表达载体pET-44a(+)连接,转入E.coliBL21(DE3)中诱导表达,通过Ni-NTA树脂亲和层析柱进行蛋白的分离纯化,Western blot鉴定纯化蛋白。结果表明本研究成功构建了重组表达载体pET-44a(+)-CDH1,且目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达,最高表达量约为细菌总蛋白的22%,并成功的获得了纯化的目的蛋白。这为将来制备抗体,开展绵羊精原干细胞的相关研究打下基础。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2009-06-01）
张岩,罗奋华,吴应积[6]（2007）在《大鼠曲细精管生殖细胞体外共培养和精子发生过程的观察》一文中研究指出目的建立体外长期共培养体系和观察方法,为精子发生过程的研究提供细胞模型。方法采用大鼠曲细精管生殖细胞及支持细胞共培养的方法,对睾丸生精细胞作显微镜观察。结果共培养的支持细胞和生精细胞在体外存活超过6个月。在共培养期间,观察到精母细胞、圆形精子细胞和长形精子细胞。结论在不添加任何细胞因子和生长因子的情况下,大鼠曲细精管生殖细胞长期增生分化,不断产生精子细胞。这一结果暗示组织块和共生的支持细胞可为生殖细胞的增生和分化提供必需的细胞因子。该方法为体外研究精子发生过程提供了实验依据。(本文来源于《中国男科学杂志》期刊2007年12期）
张岩,罗奋华,吴应积[7]（2007）在《大鼠曲细精管生殖细胞共培养和精子发生过程的观察》一文中研究指出哺乳动物精子发生过程是生殖细胞在曲细精管内发育的复杂过程,该过程包括 A 型精原干细胞的自我更新,A 型精原干细胞经减数分裂产生圆形精子(经过 B 型精原干细胞和精母细胞), 和减数分裂后的精子形成过程。该精子发生过程不仅被促性腺激素(FSH 或 LH)所调节,同时也被精原细胞和支持细胞之间的相互作用所影响。为了开展生精细胞与睾丸支持细胞之间相互作用的研究,我们进行了大鼠睾丸生殖细胞的原代共培养。原代生殖细胞和支持细胞由8天龄大鼠睾丸曲细精管组织块产生.在我们设立的培养系统中,生精细胞和支持细胞在不外加生长因子的条件下共生达六个月以上.这意味着精原干细胞在这段培养时间里维持着不断的更新和分化,组织块和共生的支持细胞为生殖细胞的增生和分化提供了营养因子和调节因子. 在共培养期间,可观察到从曲细精管中游出的支持细胞贴壁生长,生殖细胞或贴壁生长,或在贴壁细胞表面运动.精原干细胞因为其数量较少很难观察到.精母细胞较易看到,有的贴壁生长(较暗),有的游离在贴壁细胞表面(较亮),其形态特点是边缘有突起,突起物可收缩运动而带动细胞运动.圆形精子细胞数量最多,最易观察到.游离的精子细胞在不停的转动,可发生位移,能看到波动和跳动,其形态特点是有鞭毛,鞭毛可作波形摆动.也可观察到长形精子细胞,其细胞拉长, 细胞核位于一侧,另一侧变得较细较长,呈鞭毛状。在我们的培养系统中还观察到了同源群现象. 大鼠曲细精管生殖细胞的长期培养技术将有助于研究精子发生机制,为体外研究生精细胞与支持细胞的相互作用建立了细胞模型。(本文来源于《第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编》期刊2007-04-01）
解美娜,张才乔[8]（2004）在《利用生殖细胞与体细胞共培养模型研究内分泌干扰物的生殖毒性》一文中研究指出本实验研究了内分泌干扰物多氯联苯(PCB,Aroclor 254)和己烯雌酚(DES)对离体培养的鸡胚性腺生殖细胞发育的影响。取ED18的鸡胚睾丸和卵巢,用胶原酶分离细胞,培养于涂以胶原的培养板中,密度为5×10~4/孔,培养液采用无血清的McCoy’s培养液,其中添加了胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠(ITS),同时用PCB及DES处理。细胞在39℃、含5%CO_2、水蒸气饱和的培养箱(本文来源于《动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第叁次学术研讨会论文摘要汇编》期刊2004-08-01）
袁雄,黄幸纾[9]（1995）在《大鼠生殖细胞共培养方法及醋酸铅对其的影响》一文中研究指出大鼠生殖细胞共培养方法及醋酸铅对其的影响袁雄，黄幸纾（浙江医科大学卫生毒理学教研室杭州３１０００６）取２８天大小的ＳＤ大鼠，体重在６０─６８ｇ之间，将大鼠颈椎脱臼处死、取出睾丸放入平皿中，剔除被膜以及大的血管，分离出曲细精管。将曲细精管剪碎，使组织不...(本文来源于《癌变.畸变.突变》期刊1995年04期）
生殖细胞共培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:将分离、富集的精原细胞接种于制备好的支持细胞饲养层上进行培养,研究睾丸支持细胞对睾丸生精细胞体外培养的影响,同时检测雷公藤甲素对体外单独培养睾丸支持细胞、生精细胞以及两者体外共培养的毒性。方法:(1)取鼠龄16~22d的雄性ICR小鼠睾丸,采用胶原酶、透明质酸酶、胰蛋白酶和DNA酶消化分离支持细胞,经低渗处理及多次差异贴壁法进行纯化,倒置相差显微镜和苏木精-伊红(HE)染色观察细胞生长和形态,通过Fas-L免疫细胞染色法鉴定支持细胞。(2)另取鼠龄7~8天的雄性ICR小鼠睾丸,相同方法消化制备小鼠睾丸生殖细胞悬液,用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞,差异贴壁法进一步纯化,采用碱性磷酸酶染色和c-kit免疫细胞染色法鉴定精原细胞。(3)以经丝裂霉素C处理的Sertoli细胞作饲养层,观察SSCs的生长情况。(4)采用cck-8法检测不同剂量组雷公藤甲素对支持细胞、精原细胞以及两者体外共培养的毒性,计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果:在体外成功培养出小鼠睾丸支持细胞、精原细胞,并且观察到在以支持细胞为饲养层的共培养体系中精原细胞增殖生长良好。经cck-8试剂盒检测,雷公藤甲素对两种细胞及其共培养细胞都有细胞毒性,均呈剂量递增。细胞半数抑制浓度(IC_(50))分别为4.22×10~5ng/ml、9.96×10~3ng/ml、4.85×10~4ng/m。。结论:采用组合酶消化法、Percoll不连续密度梯度离心法和差异贴壁法,可达到分离、培养、纯化小鼠支持细胞和精原细胞的目的。建立了支持细胞和精原细胞体外单独培养和共培养体系。经丝裂霉素处理制备的支持细胞饲养层,能有效促进精原细胞的生长。雷公藤甲素对小鼠支持细胞、精原细胞及两者共培养体系有细胞毒性,提示其具有一定的生殖毒性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
生殖细胞共培养论文参考文献
[1].谢丽春,杨汉华,赖秀蓝,陈晓东,陈业增.人脐带间充质干细胞与sertoli细胞共培养下向男性生殖细胞分化的研究[J].中国小儿血液与肿瘤杂志.2016
[2].李莹,陈颖,桂博,孟祥,孙祖越.雷公藤甲素作用于共培养体系中雄性动物生殖细胞毒性研究[C].中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次（2016年）学术交流大会论文集.2016
[3].刘林洪.大鼠睾丸组织支持细胞/生殖细胞长期共培养的精子发生分析及猪精原干细胞的体外初步研究[D].内蒙古大学.2012
[4].刘林洪,史小芳,罗奋华,于泊洋,张岩.大鼠睾丸曲细精管组织支持细胞/生殖细胞长期共培养与精子发生分析[J].中国细胞生物学学报.2012
[5].白音巴图.绵羊雄性生殖细胞体外共培养体系的初步建立及对各级生殖细胞的鉴定[D].内蒙古大学.2009
[6].张岩,罗奋华,吴应积.大鼠曲细精管生殖细胞体外共培养和精子发生过程的观察[J].中国男科学杂志.2007
[7].张岩,罗奋华,吴应积.大鼠曲细精管生殖细胞共培养和精子发生过程的观察[C].第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编.2007
[8].解美娜,张才乔.利用生殖细胞与体细胞共培养模型研究内分泌干扰物的生殖毒性[C].动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第叁次学术研讨会论文摘要汇编.2004
[9].袁雄,黄幸纾.大鼠生殖细胞共培养方法及醋酸铅对其的影响[J].癌变.畸变.突变.1995
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