导读:本文包含了启动子克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:顺式,基因,大豆,拟南芥,元件,维管束,转染。
启动子克隆论文文献综述
孙全喜,李春娟,闫彩霞,赵小波,王娟[1]（2019）在《花生种子特异启动子AHSSP1的克隆及功能分析》一文中研究指出[研究背景]花生是世界重要的油料作物,其种子中蛋白质含量为24%～36%;含油量高达38%～60%,是重要的食用蛋白源和食用植物油源。随着生物技术的发展,利用基因工程对花生种子品质进行遗传改良的研究越来越多。种子特异启动子是种子品质改良的重要分子工具,它可驱动外源基因在种子中特异表达。目前,可供选择使用的花生种子特异启动子尚少;[材料与方法]本研究利用PCR技术在花生基因组中克隆了种子贮藏蛋白基因PSC32的启动子,将其命名为AHSSP1,利用半定量RT-PCR检测了PSC32基因表达模式,借助NewPLACE在线分析了AHSSP1序列中存在的顺式作用元件,并构建了AHSSP1驱动GUS报告基因的表达载体,经农杆菌转化获得转基因拟南芥,经GUS组织化学染色鉴定了该启动子的功能;[结果与分析] PSC32基因957-bp长的启动子AHSSP1序列具备种子特异表达启动子特有的3个RY REPEAT元件。半定量RT-PCR分析发现,PSC32基因在花生成熟种子中表达,而在饱果成熟期根、茎、叶片、花、入土前的果针、成熟种子的果壳中不表达。GUS组织化学染色发现,转基因拟南芥成熟种子以及萌发种子的子叶、下胚轴和胚根均能够被染上蓝色;长出真叶后,子叶和下胚轴仍能被染色,而根和真叶不显示蓝色;成年期转基因拟南芥的叶片也不显示蓝色。而野生型拟南芥整个生长时期均不能被染蓝色;[结论]以上现象均说明AHSSP1是一个种子特异启动子。本研究丰富了花生种子特异启动子的资源,对花生种子品质改良或以花生种子作为"生物反应器"的研究具有重要的应用价值。(本文来源于《科技创新与绿色生产——2019年山东省作物学会学术年会论文集》期刊2019-11-29）
金玲,张浩,王松明,李强,丁先龙[2]（2019）在《大豆GmAMS基因及其启动子的克隆和表达分析》一文中研究指出bHLH(basic Helix-Loop-Helix)转录因子在植物雄配子发育中具有重要的调控作用。为探究bHLH转录因子在大豆花发育中的作用,以大豆细胞质雄性不育系NJCMS5A的花芽cDNA和叶片DNA为模板,通过RT-PCR克隆得到具有典型bHLH结构域的GmAMS基因及其启动子区域,并进行生物信息学分析和时空表达分析。生物信息学分析结果显示GmAMS基因的编码区序列全长为1 716 bp,编码571个氨基酸。亚细胞定位预测GmAMS位于细胞核中。荧光定量分析结果显示,相对于保持系NJCMS5B,在不育系NJCMS5A的花芽中GmAMS基因的表达水平显着下调。组织化学染色结果表明GmAMS启动子驱动的GUS蛋白主要集中在转基因拟南芥的幼小花药中表达。研究结果为进一步探究GmAMS在大豆花发育中的生物学功能和调控机制奠定了基础。(本文来源于《大豆科学》期刊2019年06期）
秦琳琳,张曦,姜骋,李莉[3]（2019）在《白桦BpZFP4基因启动子克隆和逆境响应元件功能分析》一文中研究指出前期研究发现白桦锌指蛋白Bp ZFP4基因响应多种非生物逆境胁迫。为了深入研究其调控机制,本研究利用染色体步移技术克隆了该基因上游1 360 bp的启动子区域,序列分析结果表明该区域含有多个逆境响应顺式作用元件、激素响应元件、光响应以及病原菌和损伤响应元件等。在此基础上,构建了Bp ZFP4启动子5'-端一系列缺失片段融合GUS报告基因的表达载体。通过对系列缺失突变体在正常条件以及渗透胁迫、盐胁迫和脱落酸(ABA)处理条件下的GUS基因表达分析,鉴定得到Bp ZFP4启动子对干旱、盐和ABA应答响应的主要调节区域及可能的顺式作用元件。本研究结果为进一步探究Bp ZFP4基因应答非生物胁迫和信号分子刺激的调控机理提供了重要的理论依据。(本文来源于《植物研究》期刊2019年06期）
姜子焱,姚正培,王波,任燕萍,马丽[4]（2019）在《梭梭HaNAC42启动子的克隆及分析》一文中研究指出根据实验室前期梭梭干旱和高温胁迫转录组测序数据,对响应干旱和高温的NAC基因进行筛选,分析发现HaNAC42在未胁迫和胁迫后的表达量都显着高于其他NAC基因,且该基因属于XND1亚组,可能参与木质部的分化。在克隆了HaNAC42基因后,本研究以梭梭基因组DNA为材料,采用染色体步移法克隆得到HaNAC42上游一段长度为1 200 bp的启动子序列。运用Plant CARE启动子在线预测工具分析表明,HaNAC42启动子序列不仅具有CAAT-box、TATA-box基本的顺式作用元件还有一些参与非生物胁迫和植物激素应答相关的顺式作用元件,其TATA-box数量达到40个。将HaNAC42启动子替代pCAMBIA3301载体中的CaMV35S启动子,农杆菌介导注射法转化烟草叶片,染色分析发现HaNAC42启动子能够驱动GUS基因表达。本研究为进一步分析HaNAC42启动子元件的功能和基因表达调控机制提供了理论指导。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年10期）
黄宇,黄书婷,张夕梅,刘堰[5]（2019）在《稀有鮈鲫HSP70基因启动子的克隆及功能分析》一文中研究指出热休克蛋白70(HSP70)作为一种分子伴侣,在环境毒理学中受到广泛研究。前期研究表明稀有鮈鲫HSP70基因(GrHSP70)表达量与五氯酚(pentachlorophenol,PCP)处理的浓度和时间在肝脏中呈现剂量/时间-依赖效应。为探究启动子在热休克蛋白70表达调控中的作用,根据已知的GrHSP70 c DNA序列,采用染色体步移技术克隆了GrHSP70的5'侧翼区的核苷酸序列。生物信息学分析从预测的转录起始位点(C)起的5'侧翼区域共1 487bp,潜在的转录因子结合位点包括雌激素响应元件(ERE)、Sp1结合位点(Sp1)、糖皮质激素响应元件(GRE)、TATA结合蛋白(TBP)、CCAAT/增强子蛋白结合位点(C/EBP)、Oct-1结合位点(Oct-1)、GATA转录因子结合位点(GATA-1)等。实验构建了含有启动子缺失片段的萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)和海肾萤光素酶(renilla luciferase)报告基因表达载体,瞬时转染HeLa细胞后,利用双荧光活性检测确定获得的GrHSP70启动子具有启动活性,其核心启动位点位于转录起始点上游-1 487～-1 093bp。同时,用不同浓度PCP暴露成功转染了重组质粒(pGL-HSP70 promoter-Luc+)的HeLa细胞,培养24h后检测双荧光活性,与对照相比,随PCP浓度的增加,荧光活性均显着增加。说明在稀有鮈鲫肝脏中PCP会通过激活GrHSP70启动子来诱导GrHSP70表达,但PCP在稀有鮈鲫体内通过何种机制来调节HSP70的合成,仍然需要进一步研究。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年10期）
董向向,王矢乔,关宇涵,张志宏,李贺[6]（2019）在《草莓ARF4基因启动子的克隆及转录活性分析》一文中研究指出草莓果实成熟的早晚,直接影响果农的收益。课题组前期研究发现,草莓ARF4基因能够调控草莓开花时间。启动子是基因转录的开关,其转录活性影响着基因表达的强弱。克隆ARF4基因启动子并分析其转录活性,对进一步明确ARF4基因的功能具有重要意义。根据草莓基因组信息设计特异引物,克隆草莓ARF4基因启动子。使用Plant CARE在线软件,预测其序列上的顺式作用元件。将ARF4启动子进行分段缺失克隆,利用农杆菌介导的果实注射法及GUS组织染色,确定GUS基因表达的强弱。通过农杆菌介导的叶盘转化法,获得转proARF4::GUS基因草莓植株,利用GUS组织染色法分析启动子的组织表达特异性。对转基因草莓植株进行非生物胁迫处理,通过qRT-PCR方法确定影响ARF4基因启动子转录活性的因素。结果表明:在ARF4基因启动子序列上,除了存在基本的核心元件外,还包含一些光响应、胁迫响应、厌氧诱导及激素响应等作用元件。GUS组织染色结果显示,随着启动子序列长度逐渐变短,GUS基因表达变弱。在转proARF4::GUS基因草莓植株叶柄、嫩叶及新茎中GUS表达水平较高,且在嫩叶中表达量最高。在非生物胁迫处理下,IAA和GA可使GUS基因表达显着提高。这些结果提供了影响ARF4基因表达的相关因素,为调控草莓开花时间奠定了基础。(本文来源于《沈阳农业大学学报》期刊2019年05期）
陈立,张晓东,王心怡,韦清源,李虎[7]（2019）在《水稻OsTFL2基因启动子的克隆及功能验证》一文中研究指出【目的】克隆水稻TFL2(OsTFL2)启动子序列,并分析其结构和功能,为深入研究OsTFL2基因对水稻开花和花发育的调控机理提供理论参考。【方法】采用同源克隆方法克隆OsTFL2基因启动子序列,利用PLACE和PlantCARE分析其结构和功能,并将其连接至携带β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因的pCAMBIA1301载体以构建pCAMBIA1301-Promoter植物表达载体,通过农杆菌介导转化水稻品种农垦58愈伤组织,通过对转基因植株进行GUS组织化学染色以分析该基因启动子的表达特性和调控功能。【结果】克隆获得的OsTFL2基因起始密码子上游启动子序列1.8 kb,该序列除含有真核生物典型启动子元件TATA-box和CAAT-box外,还含有花粉特异识别的顺式作用元件Pollen1lelat52(AGAAA)、开花基因转录相关的多功能转录因子CACTFTPPCA1(PACT,Y=C/T)、CCAAT box1(CCAAT)、DOFCORE(AAAG)和GATA box(GATA)、分生组织特异性元件CCGTCC-box及多个光诱导元件或光诱导相关元件如G-box、Box I、CATT-motif、GATA-motif和GT1-motif等,推测OsTFL2基因通过上述作用元件参与调控水稻花发育及开花。通过PCR检测共筛选获得16株阳性转基因植株,对其进行GUS组织化学染色,结果发现水稻的外颖、花、花药、柱头和子房中均可检测到明显的GUS色斑,而在叶片、茎尖和根尖无明显的GUS色斑,说明OsTFL2启动子能驱动GUS基因在水稻外颖、花药和子房中表达。【结论】OsTFL2基因启动子具有启动活性和组织表达特异性,可在一定程度上影响OsTFL2基因表达,对水稻花生长发育和开花发挥重要调控作用。(本文来源于《南方农业学报》期刊2019年10期）
晁毛妮,胡海燕,王润豪,陈煜,付丽娜[8]（2020）在《陆地棉钾转运体基因GhHAK5启动子的克隆与功能分析》一文中研究指出KUP/HAK/KT钾转运体基因的转录调控是植物响应低钾胁迫的一项重要机制。克隆和分析棉花钾转运体基因的启动子,不仅有助于了解其表达模式及调控机制,对于改良棉花的钾吸收特性也具有重要意义。陆地棉钾转运体基因GhHAK5是一个在根中特异性高表达的基因,其表达受低钾胁迫诱导,目前关于该基因启动子的功能还不清楚。本研究以陆地棉品种百棉1号为材料,通过PCR方法对GhHAK5上游2000bp启动子片段(pGhHAK5)进行克隆,并通过转化拟南芥、GUS组织定位和低钾诱导表达特性分析来研究其功能。结果表明, pGhHAK5除具有TATA-box和CAAT-box等基本顺式作用元件外,还含有多个响应于光、逆境胁迫、植物激素和生物钟等的顺式作用元件。pGhHAK5与雷蒙德氏棉pGrHAK5在重要调控元件的数量和位置分布上具有较高的一致性,均具有5个参与根特异性表达调控的元件(ATAAAAT)和1个参与低钾条件下转录调控的ARF转录因子结合位点(TGTCNN)。GUS组织化学染色结果显示,转基因拟南芥幼苗的叶脉和胚轴维管束组织染色较深,根系染色较浅;成熟期转基因拟南芥植株的根、叶脉和花萼维管束组织染色较深,茎和荚皮染色较浅,表明pGhHAK5驱动的GUS主要在拟南芥成熟的根和地上部维管束组织中表达。进一步低钾诱导表达特性分析表明, PGhHAK5驱动的GUS在拟南芥幼苗幼嫩根中的表达很弱,且其表达不受低钾胁迫诱导而增强,表明PGhHAK5可能是一个主要在成熟根中具有功能的低钾诱导型启动子。转录组分析和荧光定量PCR结果表明, GhHAK5主要在成熟的根中表达,且其表达受发育时期的影响,该结果与pGhHAK5驱动的GUS在拟南芥根中的表达结果一致。本研究结果有助于深入了解GhHAK5表达调控的分子机制,并为棉花钾吸收效率的提高及钾高效棉花品种的培育提供理论依据。(本文来源于《作物学报》期刊2020年01期）
邵宇鹏,杨明明,包格格,孙英楠,杨强[9]（2019）在《大豆GmWRI1a基因启动子克隆及其功能分析》一文中研究指出为了探究大豆种子油脂合成与储存基因GmWRI1a的调节,分析其启动子功能,从大豆品种东农50基因组中扩增获得GmWRI1a基因转录起始位点上游1669bp的启动子序列,转化拟南芥。GUS染色确定了启动子的有效性,继而根据顺式作用元件的分布,分别扩增得到4个启动子5'端缺失片段1138bp,1087bp,690bp和437bp。4个启动子缺失片段分别转化拟南芥后,通过GUS组织染色结果发现,这些启动子片段能够驱动下游GUS基因表达。GUS酶活表明,启动子存在乙烯、茉莉酸、赤霉素3种激素响应元件,其中乙烯、茉莉酸和赤霉素的响应元件分别分布在-1138～-1087bp、-1087～-690bp和-690～-437bp。(本文来源于《中国油料作物学报》期刊2019年04期）
周平,范雨昕,姚红,彭嘉宇,曾黎辉[10]（2019）在《中国水仙LAR基因启动子的克隆及功能初步分析》一文中研究指出为了解NtLAR基因的表达调控机制,该研究以中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)‘金盏银台’ DNA为模版,采用染色体步移法克隆了NtLAR基因起始密码子ATG上游启动子片段序列,测序结果显示,该克隆片段共995 bp(GenBank登录号:MH371155)。通过PlantCare数据库对获得的启动子序列顺式作用元件预测发现,NtLAR启动子序列中包含有大量顺式作用元件,如光反应元件ACE、G-box、GATA-motif、GT1-motif,激素响应元件CGTCA-motif、ABRE、TGACG-motif、TGA-element,胁迫响应元件和MYB结合位点MBS等。成功构建了植物表达载体pBI121-pNtLAR∷GUS和pGreenII 0800-pNtLAR-Luc。pBI121-pNtLAR∷GUS在烟草叶片的瞬时表达结果显示,克隆的启动子片段具有活性;pBI121-pNtLAR∷GUS在水仙不同组织器官的瞬时表达实验发现,NtLAR基因的表达具有组织特异型,其在鳞茎盘的表达量较高,在花瓣和副冠中的表达量较低;将pBI121-pNtLAR∷GUS分别和中国水仙R2R3-MYB转录因子NtMYB2、NtMYB5混合注射烟草叶片,GUS染色结果显示NtMYB2和NtMYB5并不能抑制NtLAR启动子的活性,定量PCR结果与GUS染色结果一致。采用pGreenII 0800-pNtLAR-Luc载体进行双荧光素酶实验进一步验证了GUS染色实验和定量PCR结果。(本文来源于《西北植物学报》期刊2019年08期）
启动子克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
bHLH(basic Helix-Loop-Helix)转录因子在植物雄配子发育中具有重要的调控作用。为探究bHLH转录因子在大豆花发育中的作用,以大豆细胞质雄性不育系NJCMS5A的花芽cDNA和叶片DNA为模板,通过RT-PCR克隆得到具有典型bHLH结构域的GmAMS基因及其启动子区域,并进行生物信息学分析和时空表达分析。生物信息学分析结果显示GmAMS基因的编码区序列全长为1 716 bp,编码571个氨基酸。亚细胞定位预测GmAMS位于细胞核中。荧光定量分析结果显示,相对于保持系NJCMS5B,在不育系NJCMS5A的花芽中GmAMS基因的表达水平显着下调。组织化学染色结果表明GmAMS启动子驱动的GUS蛋白主要集中在转基因拟南芥的幼小花药中表达。研究结果为进一步探究GmAMS在大豆花发育中的生物学功能和调控机制奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
启动子克隆论文参考文献
[1].孙全喜,李春娟,闫彩霞,赵小波,王娟.花生种子特异启动子AHSSP1的克隆及功能分析[C].科技创新与绿色生产——2019年山东省作物学会学术年会论文集.2019
[2].金玲,张浩,王松明,李强,丁先龙.大豆GmAMS基因及其启动子的克隆和表达分析[J].大豆科学.2019
[3].秦琳琳,张曦,姜骋,李莉.白桦BpZFP4基因启动子克隆和逆境响应元件功能分析[J].植物研究.2019
[4].姜子焱,姚正培,王波,任燕萍,马丽.梭梭HaNAC42启动子的克隆及分析[J].基因组学与应用生物学.2019
[5].黄宇,黄书婷,张夕梅,刘堰.稀有鮈鲫HSP70基因启动子的克隆及功能分析[J].中国生物工程杂志.2019
[6].董向向,王矢乔,关宇涵,张志宏,李贺.草莓ARF4基因启动子的克隆及转录活性分析[J].沈阳农业大学学报.2019
[7].陈立,张晓东,王心怡,韦清源,李虎.水稻OsTFL2基因启动子的克隆及功能验证[J].南方农业学报.2019
[8].晁毛妮,胡海燕,王润豪,陈煜,付丽娜.陆地棉钾转运体基因GhHAK5启动子的克隆与功能分析[J].作物学报.2020
[9].邵宇鹏,杨明明,包格格,孙英楠,杨强.大豆GmWRI1a基因启动子克隆及其功能分析[J].中国油料作物学报.2019
[10].周平,范雨昕,姚红,彭嘉宇,曾黎辉.中国水仙LAR基因启动子的克隆及功能初步分析[J].西北植物学报.2019
论文知识图
