（1浙江大学医学院附属儿童医院浙江杭州310003）
（2浙江省立同德医院浙江杭州310012）
（3浙江中医药大学浙江杭州310053）
（4惠氏制药有限公司江苏苏州215128）
【摘要】目的：建立正相高效液相色谱法测定明党参中天门冬酰胺含量的方法。方法：色谱柱为VenusilHILIC（5μm，250×4.6mm）；流动相为V（乙腈）：V（0.5%磷酸二氢钾水溶液）=78：22；检测波长为203nm；流速为1.0mL/min；柱温为25℃。结果：平均回收率为99.32%，RSD为3.16%。该方法的标准曲线为Y=9698261X+51964，相关系数γ为0.9997。结论：该方法简单，准确性、重复性好，适用于明党参药材的质量分析。
【关键词】明党参；天门冬酰胺；正相高效液相色谱法
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）30-0370-02
明党参为伞形科Umbelliferae芹亚科ApioideaeDrude美味芹族SmyrnieaeKoch植物明党参的干燥根。典籍记载明党参具有滋补强壮、润肺化痰、平肝解毒、安中和胃等功效。现代化学研究表明，明党参主要含有多糖、挥发油、磷脂类、脂肪酸、氨基酸等多种化学成分[1]。天门冬酰胺作为止咳平喘的主要有效成分[2]，可以在一定程度上作为质量评价标准。因此，我们建立了新的明党参天门冬酰胺含量分析方法，并首次测定浙北地区的明党参中天门冬酰胺含量，为浙江省内明党参药材的质量评价提供依据。
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器：VarianProstar高效液相色谱仪（230三元泵，410自动进样器，330二极管阵列检测器）；VenusilHILIC色谱柱（5μm，250×4.6mm）；微孔滤膜0.45μm；隔膜真空棒（津腾）；Sartorius-BS210s电子天平(德国赛多利斯)；脂肪测定仪SZF-06A(上海新嘉电子有限公司)；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；超声波清洗器KQ3200DB(昆山市超声仪器有限公司)。
1.1.2药材：药材（见表1），打粉，过筛备用。
表1明党参药材样品表
1.1.3试剂：天门冬酰胺对照品（中国生物制品检定所），乙腈（色谱纯，默克公司），水为重蒸水，其它试剂为分析纯。
1.2方法
1.2.1对照品溶液的制备：精密称取对照品L-天门冬酞胺11.8mg，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得浓度为1.18mg/ml的对照品溶液。
1.2.2实验方法优化：精密称取本品粉末1.0g，分别加水，30%乙醇，50%乙醇，70%乙醇各50ml，回流提取30min；另取2份平行样，置回流瓶中，加水50ml，分别回流提取15min，30min，45min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液10ml，置水浴锅上挥干溶剂，定容在10ml容量瓶中，进样10μL，结果表明水提30min天门冬酰胺的含量最高。
1.2.3供试品溶液制备：精密称取药材粉末1.0g，置回流瓶中，加水50ml，回流提取30min后，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，滤过，取续滤液备用。
1.2.4色谱条件：色谱柱：VenusilHILIC色谱柱（5μm，250×4.6mm）；流动相：V（乙腈）：V（水）=78：22；检测波长：203nm；流速：1.0mL/min；柱温：室温25℃；进样量：10μL。对照品溶液和供试品溶液分别进样10μL，记录色谱图，天门冬酰胺的保留时间为18.3min（如图1）。
1.2.5线性关系考察：精密量取天门冬酰胺标准品（1.18mg/ml）适量，分别稀释为0.0708，0.118，0.236，0.472，0.708，0.944，1.18mg/ml，以纯水为空白对照，分别进样10μL。采用外标法，以峰面积为纵坐标(Y)，以质量浓度为横坐标（X)，建立标准曲线。结果表明天门冬酰胺在0.0708～1.18mg/ml浓度范围内，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，回归方程方程Y=9698261X+51964，相关系数γ为0.9997。
1.2.6精密度试验：取对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，分别测定峰面积，结果天门冬酰胺的RSD=1.07%。
1.2.7重现性试验：随机取同一批明党参药材6份各1.0g，精密称定，按上述方法制备供试品溶液，按1.2.4项下色谱条件测定各样品的峰面积，结果表明明党参中天门冬酰胺的平均含量为1.37%。
1.2.8加样回收率试验：称取已测定量的药材粉6份，每份1g，精密称定后分别加入一定浓度的对照品溶液，按1.2.3方法制备供试品溶液，并按上述确定的色谱条件测定峰面积。实验结果表明天门冬酰胺的平均回收率为99.32%,其RSD=3.16%。
1.2.9样品测定：取9批明党参样品粉末适量，每3份，精密称定，按1.2.3下方法制备供试品溶液，进样10μL，记录峰面积，代入线性方程计算各自含量。
2.结果与讨论
2.1结果
2.1.1本实验建立了明党参中天门冬酰胺的含量测定方法，该方法简单，准确性、重复性好，可以有效测定明党参药材中的天门冬酰胺含量。
2.1.2明党参天门冬酰胺含量与文献记载相符，主要集中在0.5%～2%之间，野生品间含量波动较大，其中龙井产天门冬酰胺含量高达2.13%，玉皇山产天门冬酰胺含量低至0.21%。
2.2讨论
2.2.1杭州产龙井和玉皇山的天门冬酰胺含量相差10倍，地理位置相距不远的两个样品，有效成分含量为何如此悬殊，有待进一步研究。
【参考文献】
[1]任东春,钱士辉,杨念云等.明党参化学成分研究[J].中药材,2008,31(1):47-49.
[2]胡小鹰,陈建伟等.明党参水提液及结晶Ⅵ的镇咳祛痰平喘作用[N].南京中医药大学学报,1995,11(6):28.