泡菜中植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶的克隆表达

论文摘要

目的:对植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因（nirS）进行克隆及表达,检测重组酶表达情况及其酶活力。方法:以分离自传统泡菜植物乳杆菌的基因组DNA为模版进行PCR扩增nirS;重组构建TA克隆质粒pMD 19-T-nirS,并转化到大肠杆菌DH5a中保存;通过双酶切消化将nirS基因连接到pET-32a（+）上,获得重组表达质粒pET-32a（+）-nirS,并将其转入大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达;重组酶经纯化后进行SDS-PAGE电泳检测其表达情况;重组酶经复性后检测其酶活力。结果:扩增得到nirS基因并成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达,所得重组酶以包涵体形式存在,酶活力为2131.5U/mg。结论:采用基因工程技术获得亚硝酸盐还原酶具有一定的应用前景。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 nirS基因的克隆
•     1.2.2 表达质粒pET-32a（+）-nirS的构建
•     1.2.3 重组质粒在大肠杆菌中的表达
•     1.2.4 重组酶的复性
•     1.2.5 重组酶的酶活测定
• 2 结果
•   2.1 nirS基因的扩增
•   2.2 T克隆载体的鉴定
•   2.3 重组质粒pET-32a（+）-nirS的鉴定
•   2.4 重组酶的SDS-PAGE电泳检测及酶活测定
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴长力,陈颖琪,陈桂柳,林梦哲,张宏梅

关键词: 亚硝酸盐还原酶,基因表达,包涵体,植物乳杆菌

来源: 中国调味品 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 广东工业大学生物工程系

基金: 广东省科技基金(2016A010105021)

分类号: TS201.3;TS255.54

页码: 9-12

总页数: 4

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