布鲁氏杆菌S2弱毒疫苗S2JY1基因的原核表达

论文摘要

为了获得高效表达且抗原性好的布鲁氏杆菌S2弱毒疫苗特异性基因重组抗原,研究从S2疫苗全基因组中筛选出特有基因S2JY1,并从S2疫苗株基因组DNA中扩增出S2JY1基因片段,用生物信息学方法对S2JY1基因编码的蛋白进行了理化性质、二级结构、信号肽等分析;对扩增的S2JY1基因进行了克隆测序;构建了原核表达载体pET-30a-S2JY1并转化到大肠杆菌BL21（DE3）细胞中,诱导表达后进行Western-blot免疫印迹试验。结果表明:S2JY1基因编码145个氨基酸,理论PI值为5.55,不稳定系数为25.51;跨膜结构和信号肽分析显示该蛋白为无跨膜区且无信号肽的外膜蛋白;亲疏水性分析表明该蛋白为亲水性蛋白。构建的S2JY1基因原核表达载体可在大肠杆菌中重组表达;S2JY1基因重组蛋白能够与布鲁氏杆菌S2疫苗免疫的羊血清发生特异性结合反应,不与自然感染羊血清反应。说明S2JY1基因原核表达载体具有较好的抗原性和特异性,可用于布鲁氏杆菌病鉴别诊断研究。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 试剂
•   1.2 菌株和质粒
• 2 方法
•   2.1 引物设计以及目的基因的扩增
•   2.2 目的基因的克隆测序
•   2.3 S2JY1基因编码产物生物信息学分析
•   2.4 表达载体pET-30a-S2JY1的构建
•   2.5 重组表达菌诱导表达及Western-blot检测
• 3 结果与分析
•   3.1 目的基因PCR扩增
•   3.2 目的基因的克隆测序
•   3.3 S2JY1基因编码产物的生物信息学分析
•     3.3.1 理化性质分析
•     3.3.2 蛋白跨膜区和信号肽预测
•     3.3.3 蛋白二级结构预测
•     3.3.4 蛋白亲疏水性分析
•   3.4 重组表达载体pET-30a-S2JY1的鉴定
•   3.5 重组表达菌诱导表达及Western-blot 检测
• 4 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 白丽艳,冯陈晨,呼和巴特尔,王文龙

关键词: 布鲁氏杆菌,弱毒疫苗,基因,生物信息学,原核表达

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年15期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

基金: 内蒙古自治区科技计划项目(20120244,20140174,201502071)

分类号: S852.4

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.04.0010

页码: 128-131+185

总页数: 5

文件大小: 306K

下载量: 81