导读:本文包含了萝卜抗真菌蛋白定点突变论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:突变,萝卜,蛋白,密码,抗真菌,大肠杆菌,稀有。
萝卜抗真菌蛋白定点突变论文文献综述
刘柱,胡新文,朱建清,杨志荣[1]（2002）在《萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs AFP2 基因序列 ,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 ,人工合成引物 ,利用PCR重迭延伸法 ,使编码序列区的部分核苷酸突变 ,采用嵌套PCR ,迅速克隆到目的基因片段Rs AFPm ,连接到 pGEM Teasy载体上 ,转化大肠杆菌XL1菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 2 40bp ,有一个阅读框 ,编码 2 9个氨基酸的信号肽和 5 1个氨基酸的抗真菌蛋白 ,与突变前的Rs AFP2 基因相比 ,在编码区第 3号氨基酸Lys相差一个碱基 (TTG→TTA) ,第 5号氨基酸Gln相差一个碱基 (CAG→CAA) ,第 6号稀有密码Arg相差两个碱基 (CAG→CGA) ,但二者编码产生相同。重新合成引物 ,将切除信号肽的Rs AFP2 基因和Rs AFPm基因分别克隆到pET 2 1b(+ )质粒载体上 ,导入大肠杆菌BL2 1菌株。Tricine SDS PAGE电泳显示工程菌中存在 6KD左右的目的蛋白带 ;软件分析显示 ,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前 pETAFPo表达产物的2倍 ;抑菌结果表明 ,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于 pETAFP2 表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs AFPm基因与Rs AFP2 基因相比 ,已有效的提高表达量。(本文来源于《西南农业学报》期刊2002年03期）
刘柱[2]（2001）在《萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及在E.coli中的表达》一文中研究指出萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2是从萝卜（Raphanus sativus）种子中分离到的一种6KD富含半胱氨酸的抗真菌蛋白（RaPhnus sativus-antifingal protein）。其cDNA全长有243bp，共编码80个氨基酸。它的N端的29个氨基酸为信号肽，余下的51个氨基酸为成熟肽。 本研究根据Rs-AFP_2基因的序列，结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性，人工合成了7条引物。利用PCR重迭延伸技术，把萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因的编码序列第9号氨基酸Arg密码AGG改为细菌偏爱密码CGA，同时对编码序列起始区的部分核苷酸进行突变，又采用嵌套PCR，迅速地克隆到目的基因。将之插入pGEM-5Zf/EcoRV-T easy克隆载体，得到重组质粒pGEM-T_m。用其转化宿主菌XL1，筛选阳性菌落。通过重组质粒的PCR鉴定、双酶切及全序列测定，其结果表明已完成了对该基因的改造。 为了除去cDNA上29个氨基酸信号肽编码区，重新合成了2条上游PCR引物，5'端具有NdeⅠ识别位点，并分别与原Rs-AFP_2基因和突变后Rs-AFPm基因的序列互补，与上游引物匹配的是原PCR反应的下游引物（5'端具XhoⅠ位点）。以含Rs-AFP_2和Rs-AFPm基因的克隆载体为模板，扩增Rs-AFP_2和Rs-AFPm成熟肽的编码序列。PCR产物经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后，插入pET-2lb，构建成不带信号肽的非融合表达载体pETAFPo和pETAFPm。 将表达载体分别导入E.coli BL21，经IPTG诱导，Rs-AFP_2和Rs-AFPm基因均得到表达。表达产物经低分子量蛋白质电泳系统检测，在6KD左右位置上出现了一条空白载体受体菌缺乏的表达蛋白带。该表达蛋白以包含体的形式存在于细胞中。 体外抑菌实验表明，Rs-AFPm表达产物的抑菌活性明显高于Rs-AFP_2表达产物的抑菌活性。这说明突变后的基因有效地提高了表达效率。(本文来源于《华南热带农业大学》期刊2001-05-01）
萝卜抗真菌蛋白定点突变论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2是从萝卜（Raphanus sativus）种子中分离到的一种6KD富含半胱氨酸的抗真菌蛋白（RaPhnus sativus-antifingal protein）。其cDNA全长有243bp，共编码80个氨基酸。它的N端的29个氨基酸为信号肽，余下的51个氨基酸为成熟肽。 本研究根据Rs-AFP_2基因的序列，结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性，人工合成了7条引物。利用PCR重迭延伸技术，把萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因的编码序列第9号氨基酸Arg密码AGG改为细菌偏爱密码CGA，同时对编码序列起始区的部分核苷酸进行突变，又采用嵌套PCR，迅速地克隆到目的基因。将之插入pGEM-5Zf/EcoRV-T easy克隆载体，得到重组质粒pGEM-T_m。用其转化宿主菌XL1，筛选阳性菌落。通过重组质粒的PCR鉴定、双酶切及全序列测定，其结果表明已完成了对该基因的改造。 为了除去cDNA上29个氨基酸信号肽编码区，重新合成了2条上游PCR引物，5'端具有NdeⅠ识别位点，并分别与原Rs-AFP_2基因和突变后Rs-AFPm基因的序列互补，与上游引物匹配的是原PCR反应的下游引物（5'端具XhoⅠ位点）。以含Rs-AFP_2和Rs-AFPm基因的克隆载体为模板，扩增Rs-AFP_2和Rs-AFPm成熟肽的编码序列。PCR产物经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后，插入pET-2lb，构建成不带信号肽的非融合表达载体pETAFPo和pETAFPm。 将表达载体分别导入E.coli BL21，经IPTG诱导，Rs-AFP_2和Rs-AFPm基因均得到表达。表达产物经低分子量蛋白质电泳系统检测，在6KD左右位置上出现了一条空白载体受体菌缺乏的表达蛋白带。该表达蛋白以包含体的形式存在于细胞中。 体外抑菌实验表明，Rs-AFPm表达产物的抑菌活性明显高于Rs-AFP_2表达产物的抑菌活性。这说明突变后的基因有效地提高了表达效率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
萝卜抗真菌蛋白定点突变论文参考文献
[1].刘柱,胡新文,朱建清,杨志荣.萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达[J].西南农业学报.2002
[2].刘柱.萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及在E.coli中的表达[D].华南热带农业大学.2001