2016-2017年上海地区野鸟携带H6亚型禽流感病毒遗传进化分析及分子特征

论文摘要

H6亚型AIVs属于LPAIVs。1965年首次从马萨诸塞州的火鸡体内分离到,目前已经在全球范围内流行,且宿主范围也较为广泛,包括各种水禽,家禽以及哺乳动物等。除了为高致病性禽流感病毒如H5N6等提供内部基因片段之外,多项研究报道也已证明H6亚型AIVs能够突破物种局限性感染人类,进而威胁人类健康,因此,近年来人们对H6亚型AIVs的关注度逐渐上升。野鸟作为AIVs的自然宿主,在AIVs的传播和进化过程中发挥着不可替代的作用,而上海又是东亚-澳大利亚候鸟迁徙路线上野鸟的一个重要停留地和越冬地,所以鉴于H6亚型AIVs在我国的广泛流行以及H6亚型AIVs不断参与高致病性禽流感病毒的重组而对人类健康所构成的危险性,我们想通过本次研究来了解上海地区野鸟携带H6亚型AIVs的情况。我们于2016-2017年间在上海的九段沙自然保护区和浦东南汇东滩共采集1514份喉肛拭子样品,从中分离到30株H6亚型AIVs,然后选择8个毒株做了进一步的检测和分析,结果发现有四种H6亚型（H6N1、H6N2、H6N5、H6N8）的禽流感病毒盛行。同源性分析结果表明所分离到的8株H6亚型AIVs和东亚-澳大利亚候鸟迁徙路线上的野鸟和家鸭中传播的禽流感病毒的基因片段有很高的同源性,且依据基因片段的来源情况,我们将分离到的8个毒株分为7个重组基因型,这也进一步强调了野鸟在禽流感病毒的传播、进化及新基因型出现过程中扮演着十分重要的角色。细胞实验结果显示8个H6亚型毒株均能在MDCK、A549及MLE-12中增殖,而受体结合实验进一步验证了所分离到的毒株优先结合禽源受体,还未具备在人群中的传播能力,但不排除其在进化过程中与高致病性禽流感病毒发生重组,所以还要持续监测中国华东地区野鸟携带的H6亚型AIVs,从而更好地了解其传播和演变情况。

论文目录

• 内容摘要
• abstract
• 第一章 绪论
•   1.1 禽流感病毒分子生物学特征
•   1.2 禽流感病毒受体结合特性
•   1.3 禽流感病毒功能蛋白
•     1.3.1 HA蛋白
•     1.3.2 NA蛋白
•     1.3.3 内部基因蛋白
•   1.4 禽流感病毒宿主种类
•     1.4.1 水禽
•     1.4.2 家禽
•     1.4.3 哺乳动物
•   1.5 野鸟在禽流感病毒传播和进化中的作用
•   1.6 H6 亚型AIVs
•     1.6.1 H6 亚型AIVs在野鸟中的流行状况
•     1.6.2 H6 亚型AIVs在中国家禽中的流行状况
•     1.6.3 H6 亚型AIVs在人和哺乳动物中的流行状况
•     1.6.4 H6 亚型AIVs系统进化情况
•   1.7 本课题的研究目的和意义
•   1.8 技术路线
• 第二章 材料与方法
•   2.1 实验材料
•     2.1.1 实验用品
•     2.1.2 实验试剂
•     2.1.3 仪器设备
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 样品采集
•     2.2.2 禽流感病毒RNA的提取
•     2.2.3 Q-PCR法检测阳性样本
•     2.2.4 病毒亚型鉴定
•     2.2.5 H6 亚型 AIVs 鸡胚增殖实验
•     2.2.6 红细胞凝集实验
•     2.2.7 H6 亚型AIVs全基因序列扩增
•   2.3 H6 亚型AIVs对细胞活性影响的研究
•     2.3.1 细胞培养
•     2.3.2 半数感染量测定
•     2.3.3 细胞攻毒
•     2.3.4 MTT实验检测细胞活性
•   2.4 H6亚型AIVs受体结合实验
•   2.5 序列分析和系统进化树构建软件
• 第三章 结果
•   3.1 样品采集与分离
•   3.2 病毒全基因组序列测定
•   3.3 核苷酸序列同源性比较
•   3.4 序列分析和进化分析
•     3.4.1 HA基因
•     3.4.2 NA基因
•     3.4.3 PB2 基因
•     3.4.4 PB1 基因
•     3.4.5 PA基因
•     3.4.6 NP基因
•     3.4.7 M基因
•     3.4.8 NS基因
•   3.5 H6 亚型AIVs基因型分类
•   3.6 H6 亚型AIVs的分子生物学特征
•   3.7 H6 亚型AIVs在哺乳动物细胞上的增殖特性
•   3.8 H6 亚型AIVs的受体结合特性
• 第四章 讨论
•   4.1 病毒的分离
•   4.2 同源性和进化分析
•   4.3 分子特征
•   4.4 在哺乳动物细胞上的增殖
•   4.5 受体结合特性
• 第五章 结论与展望
•   5.1 结论
•   5.2 展望
• 参考文献
• 附录-硕士期间参与课题与科研成果
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李晓芳

导师: 何桂梅

关键词: 亚型,进化分析,基因型,野鸟,上海

来源: 华东师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 华东师范大学

分类号: S852.65

总页数: 85

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