张桂英(河南省军区郑州第一干休所450000)
作者简介：张桂英(1972.3-)，女，河南省许昌市鄢陵县人，干部，主治医生，重庆第三军医大学，从事内科工作，研究方向：老年病学与保健。
【摘要】目的：检测淋巴毒素α(lymphotoxinα，LT-α)C804A位点单核苷酸多态性与河南汉族人群脑梗塞的关系。方法：PCR扩增、产物纯化后直接测序对30例脑梗塞患者和20例健康对照者进行基因型分析。结果：LT-α-C804A位点检测出C/C、C/A、A/A三种基因型。病例组中C/C、C/A、A/A基因频率分别为16.7%、36.6%、46.7%；对照组中分别为20%、55%、25%，两组比较有统计学意义（P=0.003）。病例组与对照组中C、A等位基因频率分别为35%、65%和47.5%、52.5%，两组比较有统计学意义(P=0.006)。结论：LT-α-C804A基因单核苷酸多态性与河南汉族人群脑梗塞发生有相关性，LT-α-C804A位点C→A的基因突变可能是脑梗塞患者的一个危险因子。
【关键词】脑梗塞；单核苷酸多态性；淋巴毒素α
【中图分类号】R743.3【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2011）08-0829-02
脑梗塞是一种常见的脑血管疾病，主要由于脑部血液循环障碍导致缺血、缺氧而引起脑组织软化坏死的一种疾病，它的发病率、致残率、病死率均很高，严重危害人类的健康[1]。长期以来人们认识到脑梗塞的发生与引起动脉粥样硬化的因素如高血压、糖尿病、高血脂等危险因素相关，但这并不能解释所有病人发病。因此，必须寻找新的危险因素，以期对高危人群进行早预防、早诊断、早治疗。研究发现LT-α可以调节炎症免疫反应，增加冠心病和心肌梗死的发病危险，但LT-α-C804A位点单核苷酸多态性与河南汉族人群脑梗塞的关系目前尚未见报道。
1研究对象和方法
1.1研究对象:在河南地区汉族人中，选取脑梗塞病人30例，年龄、性别匹配的对照组20例。
1.2研究方法
1.2.1基因组DNA的提取:每一研究对象于清晨空腹采集外周静脉血3mL,提取血液基因组DNA。
1.2.2PCR扩增:PCR反应体系为25uL，其中2×TaqPCRMasterMix12.0uL，模板DNA1.0uL，上游引物(5’-GTTGGCCTCACACCTTCA-3’)和下游引物（5’-TGGATGCTTGGGTTCCTG-3’)各0.5uL加双蒸水补至25μL，以上试剂为TIANGEN公司提供。PCR扩增条件为：94℃预变性5min，94℃变性50s,55.5℃褪火50s,72℃延伸45s,35个循环后，72℃再延伸5min,4℃保存。取5uLPCR扩增产物与1uLbuffer混匀，3.0%的琼脂糖凝胶电泳、EB染色，若在紫外灯下出现678bp一条清晰条带，且无特异性杂带为阳性目的片段。
1.2.3目的片段的纯化、回收及直接测序:PCR产物回收试剂盒(TIANGEN公司)进行目的片段的纯化回收。回收产物DNA测序仪直接测序(北京博尚生物技术有限公司)。
1.3统计学分析:用检验分析病例组与对照组是否有差异；两基因间各基因型和等位基因的相对风险度采用比值比（oddsratios,OR）和95%可信区间（CI）比较。所有检验为双侧概率检验,以P<0.05为有统计学意义。
2结果
2.12组基因型及等位基因分布情况:河南汉族人群中30例脑梗塞患者和20例健康对照者LT-α-C804A位点测序成功,检测出C/C、C/A、A/A三种基因型，病例组及对照组中C/C、C/A、A/A基因频率分别为16.7%、36.6%、46.7%和20%、55%、25%；C、A等位基因频率分别为35%、65%和47.5%、525%。两组C、A等位基因型频率比较有统计学意义(P=0006)。A等位基因与疾病关联强度OR=0.876,95%CI(08691-1.6630)。LT-α-C804A基因多态性与河南省汉族人群脑梗塞的易患性可能具有一定相关性，LT-α-C804A位点C→A的基因突变可能是脑梗塞患者的一个危险因子（见表1）。
3讨论
脑梗塞是一种常见的脑血管疾病，主要由于脑部缺血、缺氧引起脑组织坏死软化的一种疾病。动脉粥样硬化是其主要发病原因，人们一直认为动脉粥样硬化的发生与糖尿病、高血压、血脂异常等危险因素相关，而越来越多的研究发现炎症和免疫反应在动脉粥样硬化形成中起关键作用[2]。炎症细胞及炎症细胞因子在动脉粥样硬化早期病变过程中起重要作用，炎症效应分子会导致病变的进展，引发冠脉综合症和缺血性脑血管病[3]。淋巴毒素α(LT-α)，又称肿瘤坏死因子β，是在1967年研究迟发性过敏反应时发现的一种促炎细胞因子，它由活化的T淋巴细胞产生的一种因子，可以调节炎症免疫反应、影响细胞凋亡和分化。LTA被认为是已知最强的致炎因子和促动脉粥样硬化因子之一，能与白细胞、上皮细胞表面受体结合进而促进一系列炎性因子释放[4]。目前国内外在LT-α基因多态性与疾病是否有关这一问题上众说纷纭，其中研究比较多的是冠心病与肿瘤。LiuY等研究发现LT-α-C804A单核苷酸多态性与冠心病的发生相关，CC基因型是冠状动脉疾病的一种保护性因素。TrompetS等研究发现LT-α-C804A多态性与男性脑中风有相关性。然而HagiwaraN等研究却表明LT-α-C804A多态性与日本的缺血性脑中风无相关性。而LT-α-C804A单核苷酸多态性与河南汉族人群脑梗塞的关系目前尚未见报道。本研究发现LT-α-C804A基因多态性与河南省汉族人群脑梗塞的易患性可能具有一定相关性，LT-α-C804A位点C→A的基因突变可能是脑梗塞患者的一个危险因子。
参考文献
[1]PanA,SunQ,OkerekeOI,etal.Depressionandriskofstrokemorbidityandmortality:ameta-analysisandsystematicreview.JAMA.2011Sep21;306(11):1241-9
[2]BreuerL,HuttnerHB,D?rflerA,etal.Wakeupstroke:Overviewondiagnosticandtherapeuticoptionsforischemicstrokeonawakening.FortschrNeurolPsychiatr.2010Feb;78(2):101-6
[3]Cuenca-LópezMD,BreaD,SeguraT,etal.Inflammationasatherapeuticagentincerebralinfarction:cellularinflammatoryresponseandinflammatorymediators.RevNeurol.2010Mar16;50(6):349-59
[4]SunaS,SakataY,SatoH,etal.Up-regulationofcelladhesionmoleculegenesinhumanendothelialcellsstimulatedbylymphotoxinalpha:DNAmicroarrayanalysis.JAtherosclerThromb.2008Jun;15(3):160-5