梧州市中医医院药剂科543000
【摘要】：目的采用反相高效液相色谱法对三黄膏内的有效成分黄芩苷的含量进行测量分析。方法使用DinamonsilC18色谱柱，将甲醇、水和磷酸溶液（50:50:0.3）作为流动相，流动速度是1.0mL/min，检测波长是280nm。结果线性范围是：0.0833~0.9151μg·mL-1（r=0.9999）。平均回收率达98.0%，RSD是1.5%（n=5）。结论该方法具有简单、准确和重现性良好的优点，因此可以被运用在制作剂量控制中。
【关键词】：黄芩苷；三黄膏；高效液相色谱法
梧州市中医院药剂科监制的中成药三黄膏内主要的三味重要为黄芩、黄柏和大黄。该药物的功效主要是清热、凉血和消肿痛，可以有效治疗软组织损伤、血瘀、生热等疾病，有着很好的散风清热和消肿止痛以及消炎祛瘀的作用【1】。在国家监督其含量标准内，只针对了大黄和黄柏内的盐酸小檗碱进行了检测和定量分析。为实现对制药质量的全面控制，对检验标准实行升级，此次实现增加了对三黄膏内主要成分黄芩中的黄芩苷的含量测量，依据我国药典2010年的黄芩苷含量测定方法的色谱条件，使用反相高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatographyHPLC法）测定黄芩苷。此次实验结果显示，这一方法十分的简便、快速、准确。
仪器以及试验药物
Agilent1100series高效液相色谱仪、METTER-AE240电子分析天平、SB3200超声波清洗黄芩苷对照品（由我国药品生物制品检定所提供，作为测量含量的试品，编号：110715-200514）；甲醇是色谱纯；水的作用是将离子双蒸馏水进行去除，其他的试剂都是分析纯。三黄膏（梧州市药剂科委托生产，批号：20100401）。
方法和结果
2.1色谱条件色谱柱：DinamonsilC18色谱柱（250mm*4.6mm，5um）；流动相：甲醇、水、磷酸溶液（50:50:0.3），流动速度是1.0mL/min；检测波长是280nm；柱的温度为25℃。
2.2制备溶液
取适量的样本约1g，精密称定，加入2g的聚山梨酯80充分混匀，加入70%的乙醇4oml，经过半小时的超声处理后，加热回流3小时，放冷，过滤，滤液置1OOmL量瓶中，用少量7o%乙醇分次洗涤容器和残渣\洗液滤入同一量瓶中，加7o%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10mL量杯中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
制备阴性对照溶液，取出了黄芩之外的依据处方量配置的样品，依据样品溶液制备法制备阴性对照溶液。
测定方法：分别取对照溶液、阴性对照溶液和样品溶液注入色谱仪内，对色谱图进行记录，详情见下图1。黄芩苷保留18min左右。阴性对照色谱图在黄芩苷峰位置不存在干扰峰，也就是本实验条件下黄芩苷峰和其他组分之间是完全分离的，测定不受干扰。理论塔板数将黄芩苷峰计算得出6136。
2.3绘制标准曲线精密称量上述内容中对照品的配置方法，配制出溶液1,3,5,7,9,11nl注入到色谱仪内。将色谱峰的面积当做纵坐标，进样量（ug）当做横坐标实行线性回归，方程式Y=281.857X+0.8571r=0.9999线性范围是0.0834~0.9173μg·mL-1.
2.4精密度试验
依据对照溶液配置方法配置对照品溶液，重复样6次以后，每一次进样25ul测出峰面积平均值是1409，RSD是0.3%
2.5重复性试验取同批号样品5分依据下面的方法制备，依法测定。结果黄芩苷的含量RSD是0.8%显示该方法有着良好的重复性。
2.6稳定性实验取同批号的样品在0,14,12,24,48,72h分别进样10ul，依据对应的方法进行测定。结果7次对黄芩苷峰的面积RSD测定最终的结果是1.0%，显示了样品溶液在3天内都十分的稳定
2.7回收率实验精密称取60C干燥4h黄芩苷对照品32.15mg，放置在100mL的容量瓶内，采用甲醇溶液稀释到相应刻度且摇匀，获得对照品溶液。精密称得1g的抑制含量样品5分，分别精密加入以上对照品5,10,15,20,25mL，随后按照样品测定项目下方法配制成供试溶液进样，并且测定，对回收率进行计算，得到表1中的结果。
3、讨论
通过HPLC法来对黄芩苷的含量进行测定，我国药典内一部内存在多种流动相【2】；其中甲醇、水和磷酸溶液（50:50:0.3）最佳，峰形十分清晰且漂亮，有着良好的分离度【3】。采用甲醇以及70%的乙醇同法来对样品进行处理，70%乙醇溶液提取完全，三批不同药物内的黄芩苷含量虽然都不符合现有药品质量标准，但是不同批号药物的黄芩苷含量差异较大。对此笔者认为增加三黄膏内黄芩苷含量的测定十分必要。
并且，此次研究中测定三黄膏的有效成分含量测定分析，结果得到线性范围是：0.0833~0.9151μg·mL-1（r=0.9999）。平均回收率达98.0%，RSD是1.5%（n=5）。该方法具有简单、准确和重现性良好的优点，因此可以被运用在制作剂量控制中。
【参考文献】：
[1]龙珊珊,李上,肖艳,肖海英.三黄膏中有效成分的含量测定[J].长沙医学院学报,2010,02:24-26.
[2]王远见,李清,赵娟娟,陈晓辉,毕开顺.HPLC法同时测定一清颗粒中黄芩苷等8种有效成分的含量[J].沈阳药科大学学报,2011,10:807-811.
[3]蔡艳芳,刘肖林.中药黄芩中有效成分的含量测定及其相应指纹图谱的初步分析[J].临床合理用药杂志,2016,28:90-91.