论文摘要
目的:探讨携带埃博拉病毒膜蛋白（Ebola Virus Glycoprotein,EboGp）的HIV-1病毒样颗粒（Virus like particle,VLP）的免疫原性。方法:1.包装VLP:（1）用质粒HIVgp120、EbovGp、EbovGpAM、Δ8.2和Gluc通过PEI转染法获取所需 VLP:HIVgp-VLP、EbovGp-VLP、EbovGpΔM-VLP、HIVgp/EboGp-VLP和HIVgp/EboGpAM-VLP;（2）检测所得VLP包装是否成功:蛋白印迹法（Western Blot,WB）定性检测VLP中相关蛋白:HIVgp120蛋白、HIV P24蛋白、EboGp蛋白和EboGpΔM蛋白是否正确表达;酶联免疫法（Enzyme-link Immunosorbent Assay,ELISA）定量检测VLP中的HIV P24量。2.细胞实验:100ng/100μlPBS的VLP:HIVgp-VLP、EbovGp-VLP、EbovGpΔM-VLP、HIVgp/EboGp-VLP和HIVgp/EboGpAM-VLP分别感染C8166细胞、THP1细胞、单核细胞来源的巨噬细胞（Monocyte Derived Macrophages,MDMs）和单核细胞来源的树突状细胞（Monocyte Derived Dendritic cells,MDDCs）,感染3天后检测4种细胞上清液的荧光素酶反应值（Gaussia Luciferase Assay,Glue）,以此比较不同VLP靶向进入目的细胞的量。3.动物实验:（1）HIVgp（M）组动物实验:9只6周龄雌性健康Balb/c小鼠,随机分成3组:PBS组（对照组）、HIVgp（M）组和HIVgp（M）/EboGp组,每组3只。分别于第0天、第14天和第49天在各组小鼠的颈背部皮下注射相应的VLP 100ng/100μl PBS,第56天采取小鼠腿部隐静脉血200μl,ELISA检测血清中的抗-HIVgp120抗体、抗-HIV P24抗体量;（2）HIVgp（T）组动物实验:12只6周鼠龄健康雌性Balb/c小鼠,随机分成4组:PBS（对照组）、HIVgp（T）-VLP组、HIVgp（T）/EboGp-VLP组和HIVgp（T）/EboGp ΔM-VLP组,每组3只。分别于第0天、第14天和第49天在各组小鼠的颈背部皮下注射相应的VLP 100ng/100μl PBS,第56天采取小鼠腿部隐静脉血200μl,ELISA检测血清中的抗-HIVgp120抗体、抗-HIV P24抗体量。结果:1.转染获得的VLP:HIVgp-VLP、EbovGp-VLP、EbovGpAM-VLP、HIVgp/EboGp-VLP和HIVgp/EboGpΔM-VLP。WB可见HIVgp 120蛋白（120KD）,HIV P24蛋白（24KD）,EboGp蛋白（75KD）和EboGpAM（40KD）蛋白。2.细胞实验:（1）EboGp-VLP、HIVgp-VLP和HIVgp/EboGp-VLP分别感染C8166细胞后,HIVgp（T）-VLP组Gluc值高于其它各组（P<0.05）;感染MDMs和MDDCs细胞后,EboGp-VLP组和HIVgp（M）/EboGp-VLP组Glue值高于HIVgp（M）-VLP组（P<0.05）;（2）HIVgp-VLP、EboGp-VLP、HIVgp/EboGp-VLP、EboGpΔM-VLP 和HIVgp/EboGpΔM-VLP 分别感染 THP1 细胞、MDMs 和 MDDCs,HIVgp/EboGpΔM-VLP组上清液Gluc值高于其它各组（P<0.05）。3.动物实验:（1）HIVgp（M）组动物实验:HIVgp（M）/EboGp-VLP免疫的雌性Balb/c小鼠血清抗-HIVgp120抗体、抗-HIV P24抗体量均明显高于其它各组（P<0.01）;（2）HIVgp（T）组动物实验:HIVgp（T）/EboGp-VLP免疫的雌性Balb/c小鼠血清抗-HIVgp120抗体、抗-HIV P24抗体量均明显高于其它各组（P<0.01）;HIVgp（M）/EboGp-VLP与HIVgp（T）/EboGp-VLP相比,两组小鼠产生抗体量的差别无统计学意义（P>0.05）。结论:1.EbovGp和EbovGpΔM均可促进VLP靶向进入C8166细胞、THP1细胞、MDMs和MDDCs细胞,且EbovGpAM的促进能力强于EbovGp;2.HIVgp（M）/EboGp-VLP通过靶向巨噬细胞、HIVgp（T）/EboGp-VLP通过靶向T细胞均可在雌性Balb/c小鼠体内诱导更高的抗-HIV抗体量。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 王丽君
导师: 敖竹君,陈伟
关键词: 免疫原性,埃博拉病毒膜蛋白,单核细胞来源的巨噬细胞,单核细胞来源的树突状细胞,抗抗体
来源: 遵义医科大学
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 遵义医科大学
基金: 中国国家自然科学基金(A-189),加拿大健康调查协会基金(No:NNSFC81460466,RPA-132176)
分类号: R392
总页数: 50
文件大小: 1963K
下载量: 71
相关论文文献
标签：免疫原性论文; 埃博拉病毒膜蛋白论文; 单核细胞来源的巨噬细胞论文; 单核细胞来源的树突状细胞论文; 抗抗体论文;