激活功能域论文_秦越

导读:本文包含了激活功能域论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:功能,因子,病毒,反式,胃肠炎,转录,传染性。

激活功能域论文文献综述

秦越^[1]（2017）在《激活NF-κB信号通路的TGEV蛋白筛选及功能域确定》一文中研究指出猪传染性胃肠炎(Swine transmissible gastroenteritis,TGE)病原为猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV),临床上以发热、呕吐、严重腹泻、脱水和2周龄以内仔猪高死亡率为特征。目前,该病在多个国家均有报道,已成为大型养猪场仔猪腹泻性死亡的主要原因之一,极大地限制了我国养猪业的发展。已有研究表明,TGEV感染可导致小肠上皮严重病变,空肠回肠绒毛严重萎缩,同时可以促进肠系膜淋巴结细胞和树突状细胞产生IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-α等大量的炎症因子。由此可见,TGEV感染机体后诱导宿主产生的炎症反应可能与其致病机制密切相关。NF-κB(Nuclear factor-kappa B)是一类在促炎症基因表达过程中起到关键作用的核蛋白因子,具有多重转录调节作用,在病毒诱导的炎症反应中发挥着关键作用。有研究表明TGEV感染能激活NF-κB信号通路,但TGEV诱导炎症反应的分子机制尚未确定。因此,本研究以确定TGEV感染细胞对NF-κB信号通路的调控作用为切入点,筛选TGEV激活NF-κB信号通路的关键蛋白,并进一步确定其激活NF-κB信号通路的关键功能域,以期为阐明TGEV诱导机体产生炎症反应的信号转导机制奠定基础。本实验利用双荧光素酶报告系统检测TGEV感染猪睾丸细胞(Swine testicle,ST)对NF-κB信号通路的影响,结果表明,接种TGEV滴度的升高和TGEV感染时间的增加均可导致双荧光素酶活性比值的显着升高,而紫外灭活的TGEV同对照组相比没有明显的变化;间接免疫荧光实验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)结果表明,TGEV感染可以促进p65发生核转移。以上研究结果表明TGEV可以显着激活NF-κB信号通路并且其激活作用与TGEV的滴度和复制密切相关。为了进一步确定激活NF-κB信号通路的TGEV的关键蛋白,本研究通过RT-PCR的方法扩增了TH-98株TGEV的Nsp1、Nsp2、Nsp3、Nsp4、Nsp5、Nsp6、Nsp7、Nsp8、Nsp9、Nsp10、Nsp11+Nsp12、Nsp13、Nsp14、Nsp15、Nsp16、S基因、ORF3a、ORF3b、E基因、M基因、N基因、ORF7各基因片段并构建各段基因的真核表达载体,Western Blot和IFA实验的结果表明TGEV各蛋白均在细胞中成功表达。利用荧光素酶报告系统检测TGEV各个蛋白对NF-κB信号通路有影响,结果表明Nsp1、Nsp2、Nsp3、Nsp6、Nsp14、ORF7均可激活NF-κB信号通路,其中,Nsp2的激活作用最为显着。利用Western Blot和IFA检测Nsp2对NF-κB信号通路经典途径中的关键因子IκBα、p65的影响,结果表明Nsp2可促进IκBα的降解及p65的磷酸化、核转移,由此可见,Nsp2可通过经典途径激活NF-κB信号通路。为确定TGEV Nsp2激活NF-κB信号通路的关键序列,本研究通过构建包含TGEV Nsp2各个关键功能域的基因片段的真核表达载体,利用荧光素酶报告系统确定Nsp2 1-120位氨基酸是激活NF-κB信号通路的关键序列。综上所述,本研究证实了TGEV感染可以显着激活NF-κB信号通路,并且其激活作用与TGEV的滴度和复制密切相关;TGEV Nsp2激活NF-κB信号通路的关键蛋白,其可通过诱导IκBα的降解、p65的磷酸化和核转移来激活NF-κB信号通路;其中,1-120位氨基酸是Nsp2激活NF-κB信号通路的关键序列。本研究成果为阐明TGEV感染引起的炎症反应的机制及TGEV的致病机理奠定基础。进一步全面深入地研究NF-κB信号通路在TGEV致病过程中的作用,将为靶向药物的研发提供线索。(本文来源于《东北农业大学》期刊2017-06-01）

杨晨宇,张易,杨秀芬^[2]（2016）在《蛋白激发子BcGS1激活番茄免疫的功能及功能域鉴定》一文中研究指出灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)能够引起多种作物的灰霉病,利用灰葡萄孢菌产生的激发子诱导植物抗性是减轻该病害发生发展的有效途径之一。病原菌分泌的细胞壁降解酶具有致病因子和激发植物免疫的双重功能。蛋白激发子BcGS1是从灰葡萄孢菌BC-4-1-1中分离的、具有诱导细胞坏死反应的分泌糖蛋白。功能研究表明:BcGS1是一种细胞壁降解酶,葡聚糖1,4-α-糖苷酶,该蛋白由672个氨基酸组成,含有Glyco_-hydro_15(简称GH15)和CBM20_glucoamylase(碳水化合物结合域)两个结构域,理论分子量为70.487kDa。BcGS1能诱导番茄和烟草叶片产生类似HR的细胞坏死反应,并引起H_2O_2的积累;BcGS1处理后能提高番茄和烟草系统叶片对假单胞杆菌和烟草花叶病毒的抗性。荧光定量PCR检测到防御相关基因PR-1a,TPK1b和Prosystemin的转录水平也大幅度提高。为了进一步鉴定蛋白BcGS1的抗病机制,首先明确了蛋白激发子BcGS1的糖苷酶活性,用3-5二硝基水杨酸定糖法,以可溶性淀粉、羧甲基纤维素、微晶纤维素和海带多糖为底物,测定了不同pH(5-8)下BcGS1水解多糖底物产生还原性糖的含量,结果表明:BcGS1只能水解淀粉,不能水解纤维素和海带多糖,推测灰葡萄孢菌侵染寄主初期分泌BcGS1,并通过降解细胞壁产生的寡糖激发寄主的免疫防御反应。采用农杆菌介导的瞬时表达技术,分别在烟草细胞中表达了BcGS1全长,GH15和CBM20结构域蛋白,荧光共聚焦显微镜观察到强烈荧光,说明叁个蛋白均能在烟草细胞中融合表达;瞬时表达BcGS1的叶片有明显坏死斑,GH15有轻微坏死斑,CBM20没有明显坏死斑。为了进一步鉴定BcGS1的功能结构域,原核表达了BcGS1的两个结构域蛋白,结果表明两个结构域蛋白渗入叶片均不能引起明显的细胞坏死反应,说明BcGS1的激发子活性需要两个结构域的共同参与。(本文来源于《中国植物病理学会2016年学术年会论文集》期刊2016-08-05）

邝炜^[3]（2013）在《小麦白粉病菌转录因子激活功能域的研究》一文中研究指出小麦白粉病是一种在世界范围内广泛流行的真菌性病害,由专性寄生真菌——禾白粉菌Blumeria graminis f.sp.tritici引起。小麦白粉病是我国小麦的主要病害之一,每年在小麦产区造成严重损失。转录因子是基因表达调控的关键因子,调节着与真菌形态建成和侵染过程相关基因的时空特异性表达,前起始复合物的组装和转录起始主要由转录因子的激活功能域负责。因此对小麦白粉病菌转录因子激活功能域的进行研究,能够更深入地分析小麦白粉病菌在生长发育和致病过程中的转录调控机制,为寻找新的白粉病菌杀菌剂的作用靶标和设计新的白粉病菌防控策略提供理论依据。而在传统生物学实验中结合生物信息学方法可以提高实验效率。本文的主题工作包括：1.提出一种小麦白粉病菌转录因子激活功能域的筛选方法。该方法的基本原理是：将小麦白粉病菌cDNA文库与GAL4的BD结构域连接,转入酵母菌,通过检测报告基因的表型来筛选激活功能域片段。经实验证明,该方法可用于小麦白粉病菌转录因子激活功能域的筛选,且具有操作简单、灵敏度高等优点。对这些序列进行生物信息学分析后发现,小麦白粉病菌转录因子激活功能域序列同源性较低,且大部分属于富含酸性氨基酸的激活功能域结构类型。在实验中多次筛选到含甲壳素脱乙酰酶(CDA)结构域的片段,CDA可能在白粉病菌成功入侵植物和细胞增殖的过程中起重要作用,其作用机理有待进一步研究。2.构建小麦白粉病菌转录因子激活功能域的预测模型。该预测模型的特征提取方法采用分组重量编码,分类算法采用加权K近邻算法。通过加权K近邻算法与传统K近邻算法的比对实验发现,加权K算法的整体预测准确率均比传统K近邻算法要高,证明分组重量编码和加权K近邻算法的组合更适用于小麦白粉病菌转录因子激活功能域的预测,并且有较好的预测结果。本文还将经实验验证的小麦白粉病菌转录因子激活功能域序列数据与已知的转录因子激活功能域数据组成的训练集,对加权K模型进行训练,然后用独立测试集进行评估。结果表明预测模型的准确率随着训练集中小麦白粉病菌转录因子激活功能域数据的增加而逐步提高。(本文来源于《华中农业大学》期刊2013-06-01）

荣丽玮,王世珍,刘淑红,陈启民,耿运琪^[4]（2000）在《牛免疫缺陷病毒反式激活因子功能域的研究》一文中研究指出Transactivator (Tat) of bovine immunodeficiency virus (BIV) is a virus encoded regulatory protein, which activates gene expression directed by BIV long terminal repeat (LTR), and plays an important role in BIV replicative cycle. With methods of fusion protein expression and deletion mutation, a set of BIV Tat deletion mutants was constructed, and co transfected into FBL cells with BIV LTR. Using luciferase gene as a reporter, the function of BIV Tat mutants was detected and it showed that: 17/96 aa region of BIV Tat peptide contains full activity; auxiliary amino acids exist in N terminal 17/34 aa region; Cys rich region and basic region are essential to BIV Tat activity. Computer prediction of BIV Tat secondary structure was showed, and mechanism how it functions was analyzed.(本文来源于《中国病毒学》期刊2000年01期）

激活功能域论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)能够引起多种作物的灰霉病,利用灰葡萄孢菌产生的激发子诱导植物抗性是减轻该病害发生发展的有效途径之一。病原菌分泌的细胞壁降解酶具有致病因子和激发植物免疫的双重功能。蛋白激发子BcGS1是从灰葡萄孢菌BC-4-1-1中分离的、具有诱导细胞坏死反应的分泌糖蛋白。功能研究表明:BcGS1是一种细胞壁降解酶,葡聚糖1,4-α-糖苷酶,该蛋白由672个氨基酸组成,含有Glyco_-hydro_15(简称GH15)和CBM20_glucoamylase(碳水化合物结合域)两个结构域,理论分子量为70.487kDa。BcGS1能诱导番茄和烟草叶片产生类似HR的细胞坏死反应,并引起H_2O_2的积累;BcGS1处理后能提高番茄和烟草系统叶片对假单胞杆菌和烟草花叶病毒的抗性。荧光定量PCR检测到防御相关基因PR-1a,TPK1b和Prosystemin的转录水平也大幅度提高。为了进一步鉴定蛋白BcGS1的抗病机制,首先明确了蛋白激发子BcGS1的糖苷酶活性,用3-5二硝基水杨酸定糖法,以可溶性淀粉、羧甲基纤维素、微晶纤维素和海带多糖为底物,测定了不同pH(5-8)下BcGS1水解多糖底物产生还原性糖的含量,结果表明:BcGS1只能水解淀粉,不能水解纤维素和海带多糖,推测灰葡萄孢菌侵染寄主初期分泌BcGS1,并通过降解细胞壁产生的寡糖激发寄主的免疫防御反应。采用农杆菌介导的瞬时表达技术,分别在烟草细胞中表达了BcGS1全长,GH15和CBM20结构域蛋白,荧光共聚焦显微镜观察到强烈荧光,说明叁个蛋白均能在烟草细胞中融合表达;瞬时表达BcGS1的叶片有明显坏死斑,GH15有轻微坏死斑,CBM20没有明显坏死斑。为了进一步鉴定BcGS1的功能结构域,原核表达了BcGS1的两个结构域蛋白,结果表明两个结构域蛋白渗入叶片均不能引起明显的细胞坏死反应,说明BcGS1的激发子活性需要两个结构域的共同参与。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

激活功能域论文参考文献

[1].秦越.激活NF-κB信号通路的TGEV蛋白筛选及功能域确定[D].东北农业大学.2017

[2].杨晨宇,张易,杨秀芬.蛋白激发子BcGS1激活番茄免疫的功能及功能域鉴定[C].中国植物病理学会2016年学术年会论文集.2016

[3].邝炜.小麦白粉病菌转录因子激活功能域的研究[D].华中农业大学.2013

[4].荣丽玮,王世珍,刘淑红,陈启民,耿运琪.牛免疫缺陷病毒反式激活因子功能域的研究[J].中国病毒学.2000

论文知识图

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