导读:本文包含了种子特异性表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:特异性,种子,转基因,基因,油菜,载体,甘蓝。
种子特异性表达论文文献综述
赵艳,唐涌洲,史玉倩[1]（2019）在《水稻种子特异性谷蛋白GluB1启动子在水稻愈伤组织中驱动外源基因表达》一文中研究指出【目的】水稻谷蛋白启动子GluB1(GluB1promoter,pGluB1)常用于外源基因在种子中特异性高效表达的研究,也是研究种子储藏蛋白基因表达调控机制的模型。前人研究表明,pGluB1只在水稻胚乳中表达,而在根、茎、叶片、叶鞘、颖壳等组织中均无表达活性。研究的目的是为了克服种子特异表达启动子筛选周期长的缺点。【方法】将由pGluB1驱动的霍乱毒素B亚单位和重组胰岛素原组成的融合基因(a fusion gene of the cholera toxin B subunit and human proinsulin, CTBIN)表达载体pCAMBIA1302-pGluB1sig-CTBIN-NOS经农杆菌介导法转化水稻成熟胚愈伤组织。通过RT-PCR和蛋白质印迹杂交试验检测融合基因CTBIN在水稻愈伤组织中的转录和翻译表达。【结果】获得的7个转基因愈伤克隆中,有6个克隆的融合基因CTBIN在转录水平上表达。选取其中4个克隆进一步进行蛋白质印迹杂交试验检测证实融合基因CTBIN均在翻译水平上表达,而且从分子量大小推断融合蛋白包含的谷蛋白GluB1的N-端信号肽序列(24个氨基酸残基)在所测的愈伤组织细胞中均被成功切除。【结论】水稻种子特异性启动子pGluB1在愈伤组织中具有驱动外源基因表达活性,种子蛋白体亚细胞定位信号肽序列可在愈伤组织细胞中被切除。这为在愈伤组织细胞中快速检测种子特异表达启动子活性和探索愈伤组织中蛋白质的亚细胞分拣机制奠定了基础。(本文来源于《中国水稻科学》期刊2019年01期）
靳云凯,刘春林[2]（2018）在《胚特异性表达T-6b降低拟南芥种子中碳水化合物含量》一文中研究指出T-6b为农杆菌T-DNA上的一个起致瘤作用的基因,在营养组织中过量表达后能导致突起和肿瘤的形成;在胚乳中的过表达能提高胚成熟种子的生物量与含油量。本文用油菜中胚特异性表达Napin基因的启动子启动拟南芥T-6b基因的表达。结果显示,当T-6b在胚表达以后,种子褶皱,生物量下降,种子中多种碳水化合物含量降低。这一结果与T-6b在胚乳中表达的表型结果有所差别。(本文来源于《植物生理学报》期刊2018年07期）
白瑞英[3]（2016）在《紫苏FAD3/FAD7基因种子特异性表达载体的构建及遗传转化研究》一文中研究指出α-亚麻酸(ALA)是一种人体必需的ω-3系列多不饱和脂肪酸,在体内可以代谢为DHA和EPA,具有增强智力、保护视力、预防心脑血管疾病、调节血压、血脂等功能。目前,ALA主要来源于深海鱼油,但我国食用油以植物油为主,如菜籽油、豆油、葵花油等,但它们ALA含量都较低,因此,在正常饮食情况下,我国国民每日摄入的ALA往往达不到人体所需。为改善国人ALA摄入不足的现状,开发富含ALA的植物资源具有重要的意义。菜籽油是我国主要的食用油之一,如果能提高油菜籽中ALA含量,则可以提高菜籽油的营养价值,并可以成为一个高含量的植物ALA来源。植物ALA主要存在于植物种子油脂中,由ω-3脂肪酸脱氢酶(FAD3、FAD7、FAD8)催化亚油酸转化而来,ω-3 FAD基因是ALA合成途径中的一个关键限速酶基因,通过调节该基因的过量表达,可以提高植物中ALA含量。紫苏是目前发现的ALA含量最高的油料作物,本研究利用PCR技术,克隆了紫苏高表达的FAD3、FAD7基因,并构建种子特异性表达载体pC2301M1NPB-EFAD3,pC2301M1NPB-EFAD7,通过农杆菌介导法进行了美国烟草和中双11号油菜的遗传转化研究。主要取得了如下研究结果:1、克隆获得的紫苏FAD3基因片段全长1240bp,FAD7基因片段全长长1370bp,通过NCBI在线比对,与已发表的紫苏FAD3/FAD7基因同源性均高达99%以上,可以用来构建表达载体。2、成功构建了pC2301M1NPB-EFAD3、pC2301M1NPB-EFAD7种子特异性表达载体;该表达载体具有种子特异性启动子nap A启动子和nptⅡ筛选标记。3、以烟草叶片为外植体,通过农杆菌介导法对烟草进行了遗传转化研究。通过Kan抗性初步筛选出批量抗性植株,对抗性植株进行分子鉴定,结果表明:有24株能扩增出NAP+FAD3基因片段,26株能扩增出NAP+FAD7基因片段,说明紫苏FAD3、FAD7基因已成功地整合到烟草的染色体中。qRT-PCR分析结果表明,紫苏FAD3基因在转基因烟草种子中的表达不稳定,有升高也有降低。种子脂肪酸成分分析显示,有一株FAD3转基因烟草的ALA含量升高,ALA含量约为FAD3转基因阴性烟草的2.4倍,同时亚油酸含量升高,油酸含量降低;但其FAD3基因表达量并没有升高而是降低。其他FAD3转基因烟草的ALA含量与转基因阴性烟草几乎没有变化,但它们基因表达量却明显升高。检测的FAD7转基因烟草阳性植株与阴性植株的ALA含量没有差异。4、以4天龄的油菜子叶为外植体,通过农杆菌介导法对油菜进行了遗传转化研究。通过Kan抗性筛选和分子鉴定,获得1株含有紫苏FAD3基因的转基因油菜,编号为8,说明紫苏FAD3基因已成功整合到油菜的染色体中。RT-PCR分析结果发现,紫苏FAD3基因只在8号油菜的种子中表达,而在叶片中不表达,说明构建的种子特异性表达载体成功地将紫苏的FAD3基因表达限制在了种子内。qRT-PCR分析显示,紫苏FAD3基因在8号转基因油菜中表达量明显高于5号转基因阴性油菜,说明紫苏FAD3基因在8号油菜中正常表达。(本文来源于《重庆师范大学》期刊2016-04-01）
张超,付叁雄,陈松,李大雄,戚存扣[4]（2014）在《甘蓝型油菜种子中G3PDH基因特异性表达的ihpRNA载体构建》一文中研究指出为验证甘蓝型油菜甘油-3-磷酸脱氢酶基因(G3PDH)的功能,采用PCR的方法克隆BnG3PDH557bp的干扰靶序列,将其正向片段插入到中间载体pHurricane的NotI酶切位点、反向重复序列插入到XhoI酶切位点,构建ihpRNA载体反向重复框,BamHI、EcoRI酶切下反向重复框后组装到由种子特异性表达的napin启动子驱动的pCAMBIAl390植物表达载体上。结果表明:PCR扩增产物、限制性内切酶酶切产物与预期片段长度相符。其中,1.7kb的片段包括正向干扰靶片段和部分AtFad2内含子序列,2.3kb大小的片段是干扰反向重复框。种子特异性表达的BnG3PDHihpRNA载体成功构建。(本文来源于《贵州农业科学》期刊2014年09期）
施春霖,刘聪,肖旦望,邬克彬,陈社员[5]（2014）在《甘蓝型油菜WRI1基因cDNA克隆与种子特异性表达载体的构建》一文中研究指出WRI1基因所编码的转录因子参与糖酵解和脂肪酸合成,在种子油的积累过程中起着关键作用。在种子中超表达WRI1基因,对提高油菜种子含油量具有重要意义。本研究利用RT-PCR技术,从甘蓝型油菜湘油15号cDNA中分离克隆了5个WRI1基因全长cDNA序列,选取2种存在明显差异(碱基缺失)的cDNA序列构建植物种子特异性表达载体。为后续转基因研究这种差异是否会造成WRI1基因在提高含油量作用上的差异作准备。通过双酶切和连接反应,分别将WRI1基因和napin启动子基因插入到pBI121载体的GUSA基因和CaMV35启动子基因位置。酶切及PCR检测结果显示,napin启动子和WRI1已插入相应位置,完成2种载体种子特异性表达WRI1基因重组载体pBI121+napin+WRI1的构建,命名为pBI121NW2、pBI121NW4。(本文来源于《西北农业学报》期刊2014年01期）
靳云凯[6]（2012）在《种子特异性表达6b基因对糖类及油脂代谢的影响》一文中研究指出6b基因位于农杆菌T-DNA片段上,属于rolB基因家族。在植物体内,6b基因能影响激素水平、糖的含量和其它次生代谢产物的积累,以及改变与其相关基因的表达水平等。正常情况下,为了防止体内蔗糖的过度积累,植物本身会产生一种反向调节机制,但Helfer等研究证明,6b基因能够打破蔗糖运输与积累的限制条件,提高蔗糖代谢酶的活性,使得蔗糖在植物体内含量大幅度提高。在十字花科种子发育的过程中,蔗糖作为主要的碳源,通过糖酵解和柠檬酸循环生成乙酰辅酶A,乙酰辅酶A是脂肪酸合成的基底物质。所以本研究重点就是在提高蔗糖含量的前提下希望能够通过植物体内本身的糖脂转换途径来提高种子中油脂含量,达到改良种质的目的。本实验利用分子生物学和基因工程等一些方法,对6b基因进行了系统研究,获得了如下结果：1.利用气象色谱技术对脂肪酸含量进行测定,测定结果显示转6b基因烟草中脂肪酸含量提高了3倍左右。2.对转基因烟草中糖含量进行测定后发现,可溶性糖含量明显升高了24%,淀粉含量降低了10%。3.成功构建了在种子不同时期表达的组织特异性表达载体,分别得到了油菜和拟南芥转基因植株。4.采用RT-PCR技术分别对两种不同启动子的启动部位进行研究发现,Napin启动子主要在受精后1d左右有最高表达量,往后依次降低,6d后表达消失。而胚乳特异性表达Gt1启动子主要在果荚形成的早期(6d左右)有最高的表达量,在花期也有微弱的表达,但在果荚发育10d后表达现象消失。5.对转6b基因拟南芥种子进行千粒重和形态大小观察发现,转基因种子千粒重比野生型重了0.01g,颗粒大小也有所增加,说明6b基因在拟南芥中能够增加同化物的含量。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2012-06-13）
周晓婴,申爱娟,张洁夫,浦惠明,龙卫华[7]（2012）在《RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的种子特异性分析》一文中研究指出为研究RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的效果及其器官特异性,实时荧光定量PCR法分析比较了转基因油菜W-4与非转基因对照Westar开花后第7天、第14天、第21天、第28天的种子以及越冬期油菜根、茎、叶器官中的fad2基因的相对表达量。结果显示:对照Westsr种子中fad2基因的相对表达量随开花后的天数呈逐渐增加的趋势,但W-4种子中fad2基因的相对表达量在开花后第21天、第28天较对照Westar显着下降,降幅达到60%。说明转基因油菜W-4在种子发育过程中表达的fad2基因的dsRNA干扰了fad2基因表达。W-4与Westar在越冬期根、茎、叶器官中fad2基因的相对表达量基本一致,无显着性差异。脂肪酸组成分析结果显示:W-4种子中油酸平均含量达到81.5%较Westar增加了近15%,而多不饱和脂肪酸平均含量为5.25%,较Westar下降了近70%;但根、茎、叶中的脂肪酸含量二者无显着差异;结果表明转基因油菜中RNAi干扰fad2基因表达具有种子特异性,不干扰其它器官的fad2基因表达。研究还发现转基因油菜fad2基因表达下降的时期与napin基因表达时期同步,均始于开花后21d左右,表明目标基因的表达受napin启动子的准确控制。(本文来源于《分子植物育种》期刊2012年03期）
琦明玉,陆才瑞,邹长松,王巧莲,宋国立[8]（2011）在《棉花种子特异性启动子的克隆及表达载体构建》一文中研究指出种子特异性表达启动子是植物种子基因工程改良的重要工具。Lea(Late embryogenesis abundant)蛋白是胚胎发育后期种子中大量积累的一系列蛋白质,因此,其调控序列可能提供一个很好来源的种子特异性表达启动子。为研究植物Lea蛋白基因启动子在种子中的特异性表达,本研究通过PCR扩增,从亚洲棉(Gossypi-um arboreum L.)石系亚1号中克隆了Lea蛋白基因家族中D113基因上游1262 bp的调控序列和D34基因上游1445 bp的调控序列。DNA序列分析结果表明,克隆到的两个片段与已报道的Lea蛋白基因同一家族该基因的对应序列的相似性分别达到97.43%和94.27%。分别用限制性内切酶HindⅢ和xbaI双酶切重组质粒pGEMT-D和改造后的表达载体pBI121-T,分别回收pGEMT-D重组质粒中的小片段和pBI121-T植物表达载体中的大片段,经连接、转化和鉴定,获得由D113基因启动子和D34基因启动子驱动报告基因GUS的新型植物表达载体pBI121-D113、pBI121-D34,为外源基因在棉花种子中的定位表达研究奠定基础。(本文来源于《棉花学报》期刊2011年05期）
琦明玉[9]（2011）在《棉花种子特异性表达启动子的克隆及功能分析》一文中研究指出随着现代生物技术的不断发展,种子已经不再只是农作物的繁殖器官,还作为如医药、化工等其他产业的生物载体。所以通过生物技术手段定向改良植物种子,已经成为现代植物基因工程上的重要课题。而种子特异性表达启动子则是进行植物种子基因工程改良的重要工具。在目前生产试验上采用的启动子大多数为组成型启动子,可启动外源基因在受体植物中非特异性的持续、稳定的表达,但不能从时间和空间上对外源基因的表达进行有效的调控,这可能会造成植物在能源利用上的浪费,甚至会对转基因植物造成伤害。因此种子特异性启动子的发育时期与组织部位特异性使其显示出显着的优势。因此,研究种子特异性启动子的调控机理具有重要的理论和现实意义。Lea (Late embryogenesis abundant)蛋白是胚胎发育后期在种子中大量积累的一系列蛋白质,因此,其调控序列可能提供一个很好的种子特异性表达启动子来源。本研究从亚洲棉(Gossypium arboreum L.)石系亚1号中克隆Lea蛋白的D113和D34基因的种子特异表达启动子,对它们的种子特异性元件进行分析,并对其功能做进一步验证,以期为研究种子特异性启动子提供试验依据和理论基础。本研究通过PCR扩增,从石系亚1号中克隆了Lea蛋白基因家族中D113基因上游1262 bp的调控序列和D34基因上游1445 bp的调控序列。DNA序列分析结果表明,克隆到的两个片段与已报道的Lea蛋白基因同一家族该基因的对应序列相似性分别达到97.43%和94.27%。生物信息学分析表明,两种启动子的核苷酸序列除了含有基本启动子元件外都还含有其它种子特异表达性表达元件,例如ABA应答元件、G-box、E-box和A/T富集区等。但这两种启动子的顺式作用元件的数量和序列分布都不同。此外,在D113启动子序列中还发现含有种子特异性的RY基序。进一步分析认为,启动子元件之间的协作关系,可以增强启动子的种子特异性。采用接头法,成功构建了由D113启动子和D34启动子驱动报告基因GUS的新型植物表达载体pBI121-D113、pBI121-D34。采用农杆菌介导发转化拟南芥,对T_0代种子进行筛选,获得部分转基因拟南芥植株。组织化学染色发现,两种启动子的种子都染上蓝色,而在叶、根、茎等部位都没有染上蓝色,说明两种启动子都是种子特异性表达的,在正常情况下不会引起功能基因在其他组织部位的特异表达。本试验中使用的拟南芥遗传转化体系转化效率较高。对卡那霉素和Agar A进行浓度梯度设置,寻找拟南芥转基因的筛选和植株生长的最适浓度。结果表明对拟南芥种子进行筛选时,卡那霉素的最适终浓度是50mg/L,Agar A的最适终浓度为58g/L。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2011-06-01）
彭苗苗,于霁雯,翟红红,黄双领,李兴丽[10]（2010）在《棉花PEPC基因种子特异性ihpRNA表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是控制植物体中蛋白质和脂肪酸含量比例的关键酶。本研究从棉花中克隆得到PEPC基因,长度为433bp,并将该基因的正反义片段分别和种子特异性启动子napin启动子(1123bp)、α球蛋白B基因启动子(1149bp)连接,插入到植物表达载体pCADS1341中。经酶切和PCR鉴定,成功的构建了PEPC基因的种子特异性ihpRNA表达载体pCADSNPSPA和pCADSBPSPA,为后期高含油量棉花材料的选育打下了基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2010年02期）
种子特异性表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
T-6b为农杆菌T-DNA上的一个起致瘤作用的基因,在营养组织中过量表达后能导致突起和肿瘤的形成;在胚乳中的过表达能提高胚成熟种子的生物量与含油量。本文用油菜中胚特异性表达Napin基因的启动子启动拟南芥T-6b基因的表达。结果显示,当T-6b在胚表达以后,种子褶皱,生物量下降,种子中多种碳水化合物含量降低。这一结果与T-6b在胚乳中表达的表型结果有所差别。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
种子特异性表达论文参考文献
[1].赵艳,唐涌洲,史玉倩.水稻种子特异性谷蛋白GluB1启动子在水稻愈伤组织中驱动外源基因表达[J].中国水稻科学.2019
[2].靳云凯,刘春林.胚特异性表达T-6b降低拟南芥种子中碳水化合物含量[J].植物生理学报.2018
[3].白瑞英.紫苏FAD3/FAD7基因种子特异性表达载体的构建及遗传转化研究[D].重庆师范大学.2016
[4].张超,付叁雄,陈松,李大雄,戚存扣.甘蓝型油菜种子中G3PDH基因特异性表达的ihpRNA载体构建[J].贵州农业科学.2014
[5].施春霖,刘聪,肖旦望,邬克彬,陈社员.甘蓝型油菜WRI1基因cDNA克隆与种子特异性表达载体的构建[J].西北农业学报.2014
[6].靳云凯.种子特异性表达6b基因对糖类及油脂代谢的影响[D].湖南农业大学.2012
[7].周晓婴,申爱娟,张洁夫,浦惠明,龙卫华.RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的种子特异性分析[J].分子植物育种.2012
[8].琦明玉,陆才瑞,邹长松,王巧莲,宋国立.棉花种子特异性启动子的克隆及表达载体构建[J].棉花学报.2011
[9].琦明玉.棉花种子特异性表达启动子的克隆及功能分析[D].中国农业科学院.2011
[10].彭苗苗,于霁雯,翟红红,黄双领,李兴丽.棉花PEPC基因种子特异性ihpRNA表达载体的构建及鉴定[J].基因组学与应用生物学.2010
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