论文摘要
目的:胞吐（exocytosis）是囊泡运输的一种形式,往往限制于质膜的特定区域。包裹分泌物的囊泡从供体膜上脱落,穿过细胞质到达受体膜附近,被束缚并融合到受体膜,运输的分泌物释放到细胞外基质,而囊泡的膜融入质膜,使质膜得以补充。鞘脂LCB作为一种信号分子,同时也是质膜的组成成分,并且鞘脂的合成运输途径和分泌囊泡运输途径有重合。并且有文献报道,鞘脂LCB可以抑制一种定位于细胞膜上的人工蛋白（Fus-Mid-GFP）的聚集。通过以上一系列的研究结果,我们推测鞘脂LCB有可能影响细胞的胞吐作用。本课题中通过观察细胞中exocyst的亚细胞定位变化、Bgl2分泌测定、Invertase分泌测定以及薄片电镜技术等一系列实验方法对鞘脂LCB对胞吐作用的调控进行了系统的研究。研究方法:1、将带有绿色荧光蛋白GFP的exocyst质粒——SEC3-GFP、SEC5-GFP、SEC8-GFP和EXO70-GFP分别转入野生型和温度敏感性突变体中,在限制温度（39℃）条件下处理后,置于荧光显微镜下观察细胞中exocyst的亚细胞定位变化情况。2、通过Bgl2分泌测定实验和Invertase分泌测定实验等经典的胞吐作用研究方法对野生型和突变体在限制温度（39℃）条件下野生型和温度敏感性突变体中胞吐作用水平的变化。3、利用薄片电镜技术对野生型和lcb1-100温度敏感性突变体细胞中的亚显微结构,分析鞘脂LCB对胞吐的调控作用发生的阶段。结果:基因水平上,向鞘脂LCB的翻译起始基因LCB1的温度敏感性突变体（lcb1-100）及其下游各个激酶的温度敏感性突变体（pkh1tspkh2Δ,pkc1ts,ypk1tsypk2Δ,sch9Δ）中转入带有绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein,GFP）的exocyst质粒,利用荧光显微镜技术分别观察25℃和限制温度（39℃）条件下细胞中exocyst的亚细胞定位,并通过Bgl2分泌测定实验和Invertase分泌测定实验等经典的胞吐作用研究方法证实鞘脂LCB的表达在胞吐作用中起到了重要的调控作用。分子水平上,通过Myriocin——鞘脂LCB的特异性抑制剂的作用,证实了鞘脂LCB在基因和分子水平上都存在对于酵母胞吐作用的调控。同时还利用薄片电镜清晰地展示出鞘脂LCB对分泌囊泡运输途径进行调控的时期。另外,通过研究鞘脂LCB下游激酶对胞吐作用的调控,推测出鞘脂LCB可能通过其它通路实现对酵母胞吐的调控,也可能直接调节胞吐作用。结论:1、鞘脂LCB能够影响酵母细胞中exocyst的亚细胞定位。2、鞘脂LCB参与调控细胞的胞吐作用。3、鞘脂LCB对胞吐作用的调控发生在分泌囊泡从内质网上分离至细胞质中的阶段。4、鞘脂LCB可能不通过Pkh1/2及其下游激酶调控胞吐作用,或可能直接调控细胞的胞吐作用。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 张天睿
导师: 刘莹
关键词: 鞘脂,胞吐,胞吐复合物
来源: 中国医科大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 中国医科大学
基金: 国家科学基金(NO.31570819)
分类号: Q25
DOI: 10.27652/d.cnki.gzyku.2019.001441
总页数: 48
文件大小: 5982K
下载量: 20
相关论文文献
- [1].胞吐作用在Ascaris线虫精子细胞激活过程中调控细胞极性建立及细胞运动的功能研究[J]. 生物物理学报 2009(S1)
- [2].钙调蛋白及其结合蛋白对神经递质释放的调控作用[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2013(04)
- [3].人类新基因SEC15L3 cDNA的鉴定[J]. 复旦学报(自然科学版) 2008(03)
- [4].整合素αvβ6对结肠癌细胞中整合素αvβ5内吞胞吐循环的影响[J]. 中国病理生理杂志 2012(12)
- [5].对胞吞和胞吐有关知识的再讨论[J]. 中学生物教学 2014(10)
- [6].三氧化二砷诱导小鼠肝癌细胞H_(22)外泌exosome及相关机制研究[J]. 第三军医大学学报 2009(03)