重组蔗糖异构酶在短短芽孢杆菌中的表达及发酵优化

论文摘要

对重组菌株Brevibacillus choshinensis/pNCMO2-SI摇瓶发酵产蔗糖异构酶进行研究,进一步探讨了3 L发酵罐不同发酵条件对菌体生长及产酶的影响。结果表明,摇瓶发酵后胞外酶活为50 U/mL,最优3 L发酵罐培养条件为:初始碳源为葡萄糖质量浓度10 g/L,初始氮源为多聚蛋白胨、牛肉浸膏质量浓度各15 g/L,发酵温度30℃,溶氧30%,在此条件下得到的最高酶活为275 U/mL。为了探索启动子对蔗糖异构酶表达的影响,分别选取来源于枯草芽孢杆菌的启动子Papr-E,Pnpr-E,Pamy以及来源于巨大芽孢杆菌的启动子Pxyl进行研究。结果表明,使用启动子Papr-E的表达量最高。进一步优化摇瓶发酵条件,重组菌株BCpNapr-SI摇瓶发酵的胞外上清酶活为137 U/mL,在此条件下进行3 L发酵罐发酵,最终发酵上清胞外酶活为485.5 U/mL,是未优化启动子的1.76倍。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株和质粒
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 主要仪器
•     1.1.4 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 摇瓶培养
•     1.2.2 重组菌在3 L发酵罐的发酵培养
•     1.2.3 带有不同启动子重组质粒的构建
•     1.2.4 重组质粒转化短短芽孢杆菌
•     1.2.5 重组菌的摇瓶发酵优化
•     1.2.6 细胞干重的测定
•     1.2.7 蛋白质质量分数的测定
•     1.2.8 发酵罐内残糖的测定
•     1.2.9 发酵液中蔗糖异构酶SDS-PAGE电泳
•     1.2.10蔗糖异构酶酶活的测定
• 2 结果与讨论
•   2.1 重组菌Brevibacillus choshinensis/pNCMO2-SI产蔗糖异构酶的研究
•     2.1.1 重组蔗糖异构酶的摇瓶发酵
•     2.1.2 重组蔗糖异构酶的发酵罐条件优化
•   2.2 不同启动子重组菌株的构建、表达与发酵优化
•     2.2.1 不同启动子的筛选
•     2.2.2 重组菌株摇瓶培养条件优化
•   2.3 重组菌BCpNapr-SI 3 L发酵罐分析
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邹亮,吴敬,陈晟

关键词: 蔗糖异构酶,短短芽孢杆菌,启动子,发酵优化

来源: 食品与生物技术学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江南大学生物工程学院,江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室

基金: 国家杰出青年基金项目(31425020),国家自然科学基金项目(31571776),中央高校基本科研业务费专项资金项目(JUSRP51706A),江苏省重点研发计划(社会发展)项目(BE2015751)

分类号: TQ920.1

页码: 22-28

总页数: 7

文件大小: 579K

下载量: 131