甘、青、宁地区奶牛乳房炎葡萄球菌分子特性研究

论文摘要

奶牛乳房炎一直都被公认为世界性难题,它不仅使牛的产奶量下降,还影响着牛奶的品质,严重的危害着奶牛的健康,而且还会给公共安全带来隐患,严重威胁着人类的健康。本研究对西北地区养殖场中的乳房炎奶样进行了细菌的分离,然后对分离株菌株进行13种药物的耐药表型及31种相关耐药基因的检测、毒力基因的携带率以及生物膜形成能力的测定,并采用多位点序列分型、葡萄球菌A分型、脉冲场凝胶电泳分型和葡萄球菌盒式染色体mec分型等方法对分离的葡萄球菌进行克隆关系分析,以确定葡萄球菌在西北地区奶牛养殖场的耐药状况及优势克隆。进行了578份奶牛乳房炎样品的分离鉴定。共分离出215株葡萄球菌,其中65株金黄色葡萄球菌,39株溶血葡萄球菌,38株模仿葡萄球菌,28株松鼠葡萄球菌,20株腐生葡萄球菌,产色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和马胃葡萄球菌分别为10株、9株和6株。测定了临床常用的13种药物分别对215株葡萄球菌分离株MIC值。结果显示几乎所有的葡萄球菌对红霉素、林可霉素和卡那霉素的耐药率都超过了50%,溶血葡萄球菌对红霉素和林可霉素的耐药率甚至超过了90%,产色葡萄球菌更甚,对红霉素和林可霉素的耐药率达到了100%,其中金黄色葡萄球菌、模仿葡萄球菌、松鼠葡萄球菌和腐生葡萄球菌对除了万古霉素和利耐唑胺敏感外,对其余11种抗生素都有耐药的情况出现。进行了葡萄球菌对13种抗生素相关的31个耐药基因检测。结果表明,耐药基因型与耐药表型结果总体一致,大多数耐药菌株至少携带2种耐药基因,在65株金黄色葡萄球菌中,ermC携带率为81.5%;aacA-aphD为76.9%;gyrA和lnuA均携带率为73.8%;aadD和cfr携带率都为63.1%;tetM和tetK分别为58.5%和46.1%,vga和rpoB的检出率分别为7.7%和1.5%;mecA为27.6%,未检测到万古霉素和利耐唑胺类药物相关的耐药基因。150株CNS葡萄球菌中,erm（B）、vga、blaZ、mecA、tet（M）、tet（L）、tet（K）、cfr、fexA、aacA-aphD、aadD、glrA、glrB和ropB基因携带率分别为52.0%、14.7%、50.0%、30.0%、8.7%、28.7%、8.0%、45.3%、14.7%、66.7%、16.7%、27.3%、28.0%和2.7%。完成了所分离葡萄球菌生物膜形成能力及相关毒力基因检测。有124株（51.6%）葡萄球菌具有生物膜形成能力,其中金黄色葡萄球菌47株（72.3%）、溶血葡萄球菌23株（59.0%,）、模仿葡萄球菌18株（47.3%）、松鼠葡萄球菌19株（50.0%）、腐生葡萄球菌5株（25%）、产色葡萄球菌4株（40.0%）和表皮葡萄球菌8株（88.9%）。另91株（42.3%）葡萄球菌没有生物膜形成能力。在具有生物膜形成能力的葡萄球菌中,毒力基因sea、luks和lukf在三种不同生物膜强度的葡萄球菌中出现的频率相似;毒力基因hla（93.8%）和clfA（62.5%）在弱生物膜形成能力的葡萄球中出现的频率最高;毒力基因clfB（74.4%）在中等生物膜形成能力的葡萄球菌中出现的频率最高;毒力基因seb（60.6%）、tsst（72.7%）、coa（72.7%）、fnbA（100.0%）、fnbB（97.0%）、icaA（100.0%）和icaB（100.0%）在强生物膜形成能力的葡萄球中出现的频率最高。采用不同方法进行了所分离菌株的基因分型。谱型ST15-A1-t803的金黄色葡萄球菌分离株是该地区的主要流行类型,属于CC1,其中SCCmec IV是该区域MRSA株的主要流行菌株,有5株。MRCNS主要以SCCmec Ⅱ型为优势菌株,有15株,其次是SCCmec Ⅲ型。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 英文缩略表
• 第一章 引言
•   1.1 葡萄球菌的生物学特征及致病性
•     1.1.1 葡萄球菌的生物学特征
•     1.1.2 葡萄球菌的致病性
•   1.2 葡萄球菌耐药机制及研究现状
•     1.2.1 β-内酰胺类抗生素耐药
•     1.2.2 四环素类抗生素耐药
•     1.2.3 氯霉素类抗生素耐药
•     1.2.4 氨基糖苷类抗生素耐药
•     1.2.5 大环内酯类、林可霉素类、链阳菌素类（MLSB）抗生素耐药
•     1.2.6 截短侧耳素类抗生素耐药
•   1.3 葡萄球菌基因分型研究进展
•     1.3.1 多位点序列分型（MLST）
•     1.3.2 金黄色葡萄球菌表面蛋白A基因多态性分型（spa）
•     1.3.3 脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）
•     1.3.4 SCCmec基因分型
• 第二章 奶牛源葡萄球菌的分离与鉴定
•   2.1 材料
•     2.1.1 菌株来源与采集
•     2.1.2 实验仪器与试剂
•     2.1.3 培养基与试剂配制
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 细菌的分离
•     2.2.2 细菌基因组的提取
•     2.2.3 细菌的鉴定
•   2.3 实验结果
•   2.4 讨论
• 第三章 牛源葡萄球菌药物敏感性实验和耐药基因检测
•   3.1 材料
•     3.1.1 菌株来源
•     3.1.2 实验仪器与试剂
•     3.1.3 培养基、试剂和抗生素的配制
•   3.2 方法
•     3.2.1 菌液的稀释
•     3.2.2 最小抑菌浓度（MIC）检测
•     3.2.3 耐药基因的扩增
•   3.3 结果
•     3.3.1 葡萄球菌药敏试验结果
•     3.3.2 葡萄球菌的药物敏感性试验结果比较
•     3.3.3 葡萄球菌耐药基因的检测
•     3.3.4 MRSA与 MRCNS耐药率和携带耐药基因的比较
•   3.4 讨论
• 第四章 葡萄球菌生物膜的形成与相关毒力基因检测
•   4.1 材料
•     4.1.1 菌株来源
•     4.1.2 实验仪器与试剂
•     4.1.3 培养基、试剂的配制
•   4.2 实验方法
•     4.2.1 葡萄球菌生物膜定性检测
•     4.2.2 葡萄球菌生物膜定量检测
•     4.2.3 生物膜相关毒力基因检测
•   4.3 结果
•     4.3.1 葡萄球菌生物膜定性检测结果
•     4.3.2 葡萄球菌生物膜定量检测结果
•     4.3.3 生物膜相关毒力基因检测结果
•     4.3.4 生物膜的形成与毒力基因之间的关系
•     4.3.5 葡萄球菌生物膜的形成与细菌耐药性之间的关系
•   4.4 讨论
• 第五章 葡萄球菌的分子分型研究
•   5.1 材料
•     5.1.1 菌株来源
•     5.1.2 实验仪器与试剂
•     5.1.3 培养基、试剂的配制
•   5.2 方法
•     5.2.1 PFGE分型
•     5.2.2 SCCmec分型
•     5.2.3 MLST分型
•     5.2.4 spa分型
•   5.3 结果
•     5.3.1 PFGE分型结果
•     5.3.2 SCCmec分型分型结果
•     5.3.3 金黄色葡萄球菌MLST分型结果
•     5.3.4 金黄色葡萄球菌spa分型结果
•   5.4 讨论
• 第六章 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 徐结

导师: 蒲万霞

关键词: 葡萄球菌,耐药性,耐药基因,毒力基因,分子分型

来源: 中国农业科学院

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院

分类号: S852.61

总页数: 85

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