导读:本文包含了树突靶向论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:树突,细胞,靶向,疫苗,内皮,膀胱癌,抗体。
树突靶向论文文献综述
宣晓梅,林琳,石丽平,董伟兰,张国强[1]（2019）在《miR-145靶向TLR4对尖锐湿疣患者外周血单核细胞来源树突状细胞分泌IL-18和IL-10的影响》一文中研究指出目的探讨miR-145靶向TLR4对尖锐湿疣(CA)患者外周血单核细胞来源树突状细胞分泌IL-18和IL-10的影响。方法收集40例CA患者作为CA组,40例健康人作为对照组(Con),采用ELISA法检测两组外周血中IL-18和IL-10的表达水平。流式细胞仪检测树突状细胞表型CD1a、CD83和CD80的表达率以鉴定树突状细胞的体外诱导结果,Western blot检测树突状细胞中TLR4蛋白表达,RT-PCR检测树突状细胞中miR-145和TLR4 mRNA的表达。转染miR-145 mimics和si-TLR4至CA患者外周血树突状细胞后,ELISA法检测上调miR-145和敲低TLR4表达对树突状细胞分泌IL-18和IL-10的影响。采用TargetScan生物学软件预测,双荧光素酶报告基因实验验证miR-145和TLR4的靶向关系。转染pcDNA 3.1-TLR4载体后,观察上调TLR4表达对miR-145调控树突状细胞分泌IL-18和IL-10的影响。结果树突状细胞诱导培养7 d后,细胞表面成熟表型CD1a、CD83和CD80表达率显着升高,树突状细胞的体外诱导成功。与Con组相比,CA组外周血中IL-18、IL-10水平和树突状细胞中TLR4蛋白、mRNA的表达均显着升高,而miR-145的表达显着降低(P<0.05)。上调miR-145表达或敲低TLR4使树突状细胞分泌IL-18和IL-10含量降低。双荧光素酶报告基因实验证实TLR4是miR-145的靶基因。上调TLR4表达能够明显逆转miR-145对树突状细胞分泌IL-18和IL-10的抑制作用。结论 miR-145可通过靶向TLR4抑制CA患者外周血树突状细胞分泌IL-18和IL-10。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2019年09期）
姜延龙,刘晶,高兴,张赞,刘洋[2]（2018）在《表达CD11c单链抗体的树突状细胞靶向型乳酸菌构建及初步应用研究》一文中研究指出引言树突状细胞(DCs)属于抗原递呈细胞,其表面存在受体分子CD11c,靶向到树突状细胞上CD11c的病毒抗原能诱导特异性T细胞反应。本研究旨在通过使用具有树突状细胞靶向作用的单链抗体aCD11c,构建一株树突状细胞靶向型乳酸菌,该株乳酸菌不仅在体外能增加对BMDCs的(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十叁次全国学术研讨会论文集》期刊2018-11-16）
潘炜,蔡鹤龄,吴运[3]（2018）在《X-盒结合蛋白1和热休克蛋白靶向的树突状细胞疫苗对肾癌肿瘤免疫治疗作用的比较研究》一文中研究指出目的:应用树突状细胞(DC)与X-盒结合蛋白1(XBP1)共培养制备XBP1-DC疫苗,通过与热休克蛋白70(HSP70)-DC疫苗对GRC2细胞的免疫杀伤作用进行比较,初步探讨应用XBP1蛋白与DC共培养制备融合瘤疫苗的可行性。方法:从肾癌患者的外周血中分离出外周血单核细胞(PBMC),经体外培养诱导为DC。以HSP70和XBP1与DC共培养制备HSP70-DC和XBP1-DC融合瘤疫苗。用HSP70-DC和XBP1-DC疫苗分别刺激患者外周血分离的T淋巴细胞,采用ELISA法检测所产生的CTL反应。以经HSP70-DC和XBP1-DC刺激形成的CTL作为效应细胞,以正常细胞、GRC2为靶细胞,测不同效靶比(10:1、20:1)下,效应细胞杀伤靶细胞的能力。结果:PBMC经细胞因子诱导后,CD1a、CD86、CD83、HLA-DR表达水平均显着高于诱导前表达水平(P<0.05)。与DC组比较,XBP1-DC疫苗致敏后,CTL细胞均释放INF-γ显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),而与HSP70-DC疫苗致敏的CTL细胞比较,XBP1-DC释放的INF-γ差异无统计学意义(P>0.05)。随着效靶比的升高,各组CTL细胞对GRC2细胞和RCC细胞的杀伤率均相应提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在不同效靶比时,HSP-DC和XBP1-DC免疫的CTL对GRC2和GCC的杀伤作用差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:XBP1与DC共培养后,能增强DC的抗原呈递能力,增强T淋巴细胞分泌细胞因子的能力,从而特异性杀伤肾癌GRC2细胞系,且杀伤作用与HSP70-DC融合瘤疫苗一致,在抗肿瘤杀伤作用中具有一定的可行性。(本文来源于《临床泌尿外科杂志》期刊2018年06期）
张雅春[4]（2018）在《表达靶向树突状细胞小肽的重组狂犬疫苗的研究》一文中研究指出狂犬病是一种古老的人畜共患传染病,每年在世界各地造成超过59,000人死亡。其致病病原体狂犬病病毒(Rabies Virus,RABV)编码五种结构蛋白:核蛋白(N),磷蛋白(P),基质蛋白(M),糖蛋白(G)和病毒RNA聚合酶(L)。RABV进入机体后,沿外周神经系统迅速移动,最终到达中枢神经系统(Central nervous system,CNS)。一旦出现临床症状,狂犬病的死亡率接近100%。虽然狂犬病死亡率高,但是人类和动物可以通过接种疫苗来预防狂犬病,疫苗能够激活免疫系统,产生抗体以中和病毒。自1885年以来,疫苗接种已成为保护人类免于狂犬病危害的最有效途径。全球每年有数百万人接种狂犬疫苗,约有25万人因接种疫苗得到保护。我们之前的研究表明,树突状细胞(Dendritic cell,DC)的激活可以增强RABV的免疫原性。当重组RABV过表达与DC成熟相关的细胞因子或趋化因子时能够达到增强DC活化的目的。然而,这些细胞因子或趋化因子的过度表达可能会产生副作用。因此,需要进一步研究通过仅增加r RABV与DC的结合来增强RABV免疫原性。在本研究中,构建了融合表达DC靶向小肽(DCBp)或阴性对照肽(DCCp)的重组狂犬病病毒(Recombinant rabies virus,r RABV),并成功拯救获得重组病毒r LBNSE-DCBp和r LBNSE-DCCp。BSR和NA细胞上的多步生长曲线显示,DCBp或DCCp插入G蛋白后不影响病毒在体外复制,且Western印迹检测显示DCBp或DCCp的插入也不影响G蛋白表达。此外,颅内(i.c.)接种途径感染r RABV的后小鼠体重变化显示DCBp或DCCp的表达并不影响病毒致病性。关于免疫原性,r LBNSE-DCBp在体内和体外都促进了DC成熟。实验结果显示r LBNSE-DCBp免疫的小鼠与r LBNSE或r LBNSE-DCCp免疫小鼠相比,可在腹股沟淋巴结中检测到更多的滤泡性辅助T细胞(T follicular helper cells,Tfh cells)和生发中心B细胞(Germinal center B cells,GC B cells)细胞。此外,在r LBNSE-DCBp免疫的小鼠中,中和抗体的滴度也显着高于r LBNSE或r LBNSE-DCCp免疫的小鼠,所以,LBNSE-DCBp免疫的小鼠在攻毒实验中表现出更高的存活率。此外,灭活的r LBNSE-DCBp仍能产生高水平的中和抗体,对小鼠的免疫保护率也高于r LBNSE或r LBNSE-DCCp。总之,r LBNSE-DCBp可以通过增强抗原与DC的结合促进DC成熟,进而增加腹股沟淋巴结中Tfh细胞和GC B细胞的数量,从而诱导产生高水平的中和抗体,最终更好地保护小鼠免受致死性强毒的攻击,这表明r LBNSE-DCBp具有被开发为安全有效的狂犬病疫苗的潜力。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
温禾[5]（2018）在《靶向树突状细胞的卵清蛋白纳米疫苗诱导免疫耐受的研究及特应性皮炎皮肤、口腔、肠道菌群特征研究》一文中研究指出第一部分:靶向树突状细胞的卵清蛋白纳米疫苗诱导免疫耐受的研究特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一种慢性复发性炎症性疾病,发病机制中针对过敏原的Th2型为主的免疫反应起重要作用。传统药物治疗均不能防止复发。过敏原特异性免疫治疗(Allergen specific immunotherapy,AIT)是目前针对病因治疗的唯一有效的办法。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)纳米小球是疫苗载药系统的研究热点,是综合解决缓慢持续释放、提高靶向性及生物利用度的良好方案。本研究制备了荷载过敏原卵清蛋白(OVA)的PLGA纳米小球,并利用甘露聚糖(Mannan)修饰纳米小球,通过靶向树突状细胞(dendritic cells,DCs),提高其摄取效率,进而诱导T细胞的极化以达到过敏原特异性免疫治疗的目的。首先,我们利用复乳剂-溶液挥发法制备荷载OVA的PLGA纳米小球,采用吸附的方式将Mannan修饰在纳米小球表面,扫描电镜检测制备的纳米小球形状圆润规整,Zeta电位及激光粒度分析仪检测纳米小球粒径均在250nm-300nm之间,荷载了过敏原的纳米小球表面Zeta电势绝对值在20-30mv之间,粒径分布较为均匀一致,BCA蛋白测定法测定OVA包封率为69.5%±4.1%,并可在体外缓慢持续释放,CCK-8方法检测PLGA纳米小球细胞毒性较低。然后,将荷载OVA的PLGA-OVA纳米小球和PLGA-OVA-Mannan小球与外周血诱导的DCs(MoDCs)共孵育24小时,DCs表面CD80、CD86及CD83、HLA-DR的表达不同程度下降;细胞分泌促炎性细胞因子IL-6、TNF-α水平较阴性对照升高,但较游离OVA溶液刺激组显着降低,IL-10水平较阴性对照及OVA溶液组水平显着升高,实验结果提示荷载OVA的PLGA纳米小球可以降低DCs活化水平,诱导DCs向半成熟或未成熟方向发展。最后,将与纳米小球刺激过的DCs与自体来源初始T细胞体外共培养6天,流式检测T细胞的极化方向,结果显示与OVA溶液刺激组相比,分泌IL-4的Th2细胞亚群比例明显降低,分泌IL-22、IL-17、IFN-γ的Th22、Th17、Th1细胞亚群比例呈下降趋势,表达FoxP3的Treg细胞比例显着升高,提示纳米小球可抑制T细胞向Th2方向极化,诱导T细胞向Treg方向极化,参与诱导免疫耐受。以上实验结果表明,荷载抗原的纳米小球在体外可抑制DCs向成熟方向发展,进而诱导T细胞向Treg方向分化,诱导免疫耐受,有望成为新型的靶向DCs的过敏原疫苗,期望对过敏原特异性免疫治疗提供新思路。第二部分:特应性皮炎患者皮肤、口腔、肠道菌群特征及相关性研究关于AD患者皮肤和肠道菌群特征曾经有研究分别单独描述过;然而,从未有研究描述过AD患者口腔菌群特征,来自AD患者的不同部位菌群间的联系也尚不清楚。本研究分析、比较了 AD患者皮肤、口腔、肠道叁部位菌群的结构及功能。选取172名AD患者及120名健康对照者,收集皮肤、口腔和肠道标本,通过16sRNA基因扩增子测序获得叁部位菌群信息,同时收集临床信息。我们将测序结果汇总分析发现AD患者皮肤及口腔菌群多样性有不同程度的下降,下降程度和疾病严重性呈正相关,肠道菌群多样性未见明显下降。AD患者在不同部位的菌群结构与对照相比都有差异,这种差异在不同部位之间互不相同,而且AD患者皮肤和口腔菌群距离比健康对照更近。AD患者不同部位菌群有着部位特异性的改变,在AD中许多口腔特异性菌种在皮肤和口腔的富集方向是相反的。而且,AD患者皮肤及口腔菌群功能通路呈负相关性。以上结果表明,AD患者皮肤、口腔及肠道叁部位菌群结构和功能有部位特异性的改变。AD患者口腔菌群和皮肤菌群有着密切联系,可能对皮肤炎症起调控作用。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-04-15）
蒋浩海,赵鑫,赵华,朱新国,李德春[6]（2018）在《靶向PD-L1分子的RNAi增强树突状细胞疫苗对胰腺癌治疗作用的实验研究》一文中研究指出目的:研究通过RNA干扰敲减程序性死亡受体配体1(programmed death receptor ligand 1,PD-L1)分子能否增强树突状细胞疫苗对胰腺癌的治疗作用。方法:免疫组化法检测42例胰腺癌及对应胰腺组织中PD-L1的表达差异;纯化CD8+T细胞和制备成熟的树突状细胞(DC),将低表达PD-L1的Panc-1细胞Panc-1/PD-L1-RNAi、阴性对照Panc-1/LV-Control细胞以及野生型Panc-1细胞分别与CD8+T细胞+DC疫苗共同培养,检测细胞上清中干扰素(IFN)-γ表达水平;3组肿瘤细胞分别建立人源化严重免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,以DC疫苗为治疗手段进行尾静脉注射,观察肿瘤生长情况。结果:免疫组化实验显示,胰腺癌组织较胰腺组织中PD-L1高表达,差异有统计学意义(P<0.001)。T细胞反应实验显示,PD-L1敲减肿瘤细胞组与DC和CD8+T细胞共同培养的上清中IFN-γ表达水平明显高于其他2个对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。人源化SCID小鼠体内荷瘤实验显示,敲减PD-L1表达与应用DC疫苗治疗胰腺癌皮下移植瘤具有协同作用。结论:胰腺癌较胰腺组织中PD-L1高表达,敲减胰腺癌细胞PD-L1表达与应用DC疫苗治疗可能是胰腺癌免疫治疗的有效策略。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2018年01期）
黄一珂,刁思军,梁平,周婷婷,魏志涛[7]（2018）在《靶向沉默膀胱癌T24细胞系VEGF对树突状细胞分化成熟及免疫功能的影响》一文中研究指出目的观察靶向沉默膀胱癌T24细胞系VEGF对树突状细胞(DC)分化成熟及免疫功能的影响。方法构建VEGF慢病毒干扰载体LV-VEGFA-RNAi(实验组)及慢病毒阴性对照载体LV-CON(阴性对照组),分别感染各组T24细胞,空白对照组不采取任何干预措施。分别用RT-PCR和ELISA检测各组T24细胞VEGF mRNA和蛋白的表达。各组T24上清分别与PBMC来源的未成熟DC共培养,用流式细胞仪检测DC分化成熟指标CD1a、CD83及免疫功能指标CD86。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组T24细胞VEGF mRNA及蛋白的表达均受到显着抑制(P<0.05)。实验组DC表型CD1a、CD83和CD86较空白对照组明显增高(P<0.05),较阴性对照组亦明显增高(P<0.05)。结论靶向沉默膀胱癌T24细胞VEGF的表达,有利于微环境中DC的成熟及其免疫功能的发挥,可能通过修复DC被损害的免疫监视功能,增加DC的抗肿瘤能力。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2018年01期）
李坤[8]（2017）在《牛外周血树突状细胞亚群鉴定及抗原靶向递呈研究》一文中研究指出树突状细胞(dendritic cells,DCs)是专职的抗原递呈细胞,研究DCs细胞的表型与功能将为提高获得性免疫应答效力的方法研究提供理论依据。本论文旨在鉴定牛外周血中表达趋化因子受体XCR1和C型凝集素受体Clec9A的DCs细胞,分析XCR1~+/Clec9A~+DCs的表型特征及其在牛传统DC(cDCs)群体中cDC1和c DC2亚群中的分类地位;研究DCs表面受体的配体和抗体介导的抗原靶向递呈方法,为抗原靶向性动物分子疫苗设计提供思路。利用磁珠分选、多色流式细胞术分析和qRT-PCR定量等方法鉴定了牛外周血XCR1~+/Clec9A~+DCs的类群。结果表明:牛XCR1与Clec9A主要表达于CD26~+CADM1~+CD205~+MHCⅡ~+CD11c~+CD11b~-CD4~-CD8~-CD163~-lin~-DC细胞,代表cDCs的一类,而非浆性DC(pDCs)。牛外周血中cDCs可进一步划分为CD26~+CD172a~-CD11c~+MHCⅡ~+lin~-DC和CD26~-CD172a~+CD11c~+MHCⅡ~+lin~-DC,分别代表cDC1和cDC2。同样的方法证实:牛XCR1的配体XCL1主要表达于自然杀伤细胞(NK)以及活化的CD8~+T细胞上。趋化实验表明:鼠XCL1能够趋化牛外周血XCR1~+DC的迁移。利用化学合成截短的牛XCL蛋白进行磁珠缺失分选和qRT-PCR分析,结果表明:牛XCL1二硫键片段是结合XCR1受体的关键区域。研究中使用O型FMDV多表位重组蛋白(OB7)为模式抗原,设计表达了融合XCL1的靶向抗原分子XCL-OB7及突变体~△XCL-OB7,在牛体评价了XCL1介导抗原靶向免疫效果。结果表明:XCL-OB7可显着增强针对O型FMDV的中和抗体应答水平;XCL-OB7免疫组比~△XCL-OB7免疫组牛产生了较高水平的FMDV特异性抗体,差异显着(P<0.05);相反,将Poly(I:C)和XCL-OB7组合免疫牛则明显抑制了体液免疫应答水平。使用10000 BID_(50)的O型Mya98 FMDV攻毒,结果显示,单独免疫1mg或0.1mg XCL-OB7组,以及1 mg~△XCL-OB7加poly(I:C)组均获得了80%(4/5)保护率;单独免疫1 mg~△XCL-OB7组与1 mg XCL-OB7和poly(I:C)组分别获得60%和40%的保护率;灭活疫苗组对照获得100%保护率;PBS对照组全发病。Poly(I:C)与~△XCL-OB7组合免疫组相对于XCL-OB7单独免疫组,可明显阻断病毒的复制,攻毒后10天测定FMDV非结构蛋白抗体阳性率显着低于XCL-OB7单独免疫组(P<0.01),说明DC活化诱导的细胞免疫对阻断FMDV的复制至关重要。此外,本研究中利用合成多肽免疫小鼠的方法,成功制备出了叁株具有较好亲和力的抗牛Clec9A小鼠单克隆抗体,为抗体介导的抗原靶向递呈研究奠定了基础。综合以上研究结果得出:1)牛外周血中表达XCR1和Clec9A受体的DC是CD26~+CADM1~+CD205~+CD11c~+CD11b~-CD4~-CD8~-CD163~-lin~-c DC;2)牛XCL1分子中二硫键片段是与XCR1受体结合的关键区域;3)证明通过牛XCL1能够明显增强特异性体液免疫应答,为靶向性分子疫苗研究奠定了基础。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2017-06-01）
刘婷婷[9]（2017）在《金线莲苷靶向树突状细胞与CD8~+T细胞的相互作用抗自身免疫性肝炎作用机制研究》一文中研究指出背景自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一种由免疫耐受缺失导致的慢性肝脏疾病,如果不加以治疗控制,最终可能导致肝硬化。该病在世界范围内均有发生,近年来,国内文献报道的病例数呈明显上升趋势。80%-90%的AIH病人需要采用终身免疫抑制治疗,这很容易产生副作用和类固醇类药物耐受。因此,探索研究AIH复杂的免疫学发病机制,并发现潜在的新颖治疗策略是必要且有意义的。免疫细胞在AIH中有多种作用。其中,树突状细胞(dendriticcells,DCs)是一种重要的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),可以诱导效应性T细胞,B细胞产生免疫反应。它的作用有两面性,DCs趋向于成熟可以启动适应性反应,但未成熟状态下的DCs又能促进免疫耐受。免疫细胞的静悉或活化常伴随着细胞中代谢的改变,代谢增强可使免疫细胞激活。DCs和T细胞的存活、激活和成熟常伴随着细胞线粒体功能增强;糖酵解、脂肪酸合成增加;氧化磷酸化下降等。这些细胞内代谢改变则涉及到一系列受体和受体后信号通路的调控,如过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome prolixferator-activated receptor,PPAR)-γ 通路、AKT 通路、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路等。金线莲(Anoectochilus roxburghii,A.roxburghii)是一种广泛存在于热带、亚热带地区的传统中草药,由于其降糖、保肝等多种药理活性而受到广泛关注。金线莲苷(Kinsenoside,KD)是金线莲的一种重要的活性成分。本实验在此基础上,希望对KD在AIH中发挥的潜在治疗作用及其免疫学相关机制进行初步探讨。目的本研究旨在确定,在AIH发生发展过程中起到关键作用的免疫细胞亚型以及细胞间的相互作用,并探索KD对AIH的治疗作用,阐明KD对AIH疾病过程中免疫内环境和免疫细胞的调控机制及KD可能的作用靶点、信号通路。方法1.AIH小鼠模型的建立和KD治疗作用的评估采用T细胞缺陷裸鼠模型研究T细胞在AIH发生发展中的作用。KD对AIH的治疗作用采用刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导AIH小鼠模型进行评价。通过小鼠肝组织苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,H&E)染色和血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)等肝功能指标检测,评价AIH的严重程度和KD的治疗作用。采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测免疫细胞亚群变化。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子分泌情况。2.KD对DCs-CD8+T细胞相互作用的调控本实验采用一种新颖的小鼠AIH模型——DCs负载小鼠肝癌细胞(hepatocellular carcinoma cells,Hepa1-6)接种免疫小鼠诱导 AIH 模型(DC/Hepa1-6),来检测DCs和CD8+T细胞的相互作用。并分别过继转移来自正常、ConA肝炎和给予KD治疗的肝炎小鼠的骨髓源DCs(bone marrow dendritic cells,BMDCs)至健康小鼠脾脏,观察DCs对脾脏CD8+T细胞的刺激活化能力,以及KD的治疗作用。体外实验采用磁珠分选CD8+T细胞,与DCs共培养后,通过混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR),细胞毒实验、DCs提呈抗原能力分析等探索KD对DCs-CD8+T细胞相互作用的调控以及可能机制。3.KD对免疫细胞的代谢调控KD对免疫细胞代谢影响的相关研究通过检测DCs,T细胞和DC调控的CD8+T细胞的葡萄糖摄取、游离脂肪酸(non-esterified fatty acid,NEFA)分泌、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和葡萄糖转运功能来评价。在DCs、T细胞和DC调控的CD8+T细胞中,采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,qPCR)法检测糖酵解和脂肪代谢相关基因的表达水平,探究KD对免疫细胞糖脂代谢的调控机制。4.KD作用靶点的筛选和对受体后信号通路的调控采用2D药效团指纹筛选(2D fingerprint screen)、3D分子对接(molecular docking)模型分析、生化分析和受体阻断实验筛选KD的靶受体。采用蛋白免疫印迹分析(western blotting)、qPCR 和凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)等,分析KD作用于VEGFR2受体后,对代谢相关PI3K-AKT和炎症相关JAK2-STAT3信号通路相互作用的影响。采用受体拮抗剂、信号分子阻断剂和小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制受体和信号通路中信号分子的活性,研究VEGFR2受体和PI3K-AKT信号通路阻断后,KD对DCs的作用情况。在DCs中,采用染色质免疫沉淀技术(chromatinimmunoprecipitation assay,ChIP assay)检测PI3K-AKT通路下游关键信号分子叉头转录因子O1(forkhead box protein 01,FoxO1)与程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)和趋化因子受体7(CC chemokine receptor 7,CCR7)基因启动子区域的结合情况,明确KD抑制DCs激活的具体机制。结果1.KD对AIH有治疗作用,可调控在AIH的发生发展中起到关键作用的免疫细胞,特别是CD8+T细胞和DCs在缺乏T细胞的裸鼠体内,AIH的发生发展受到抑制,表明在AIH中,T细胞的调控至关重要。在ConA诱导的AIH模型中,KD的治疗显着减轻肝脏炎症病理损伤,减少促炎1型辅助性T细胞(Thelpercell type 1,Th1)的分化,血清中促炎因子白介素(interleukin,IL)-2、干扰素-γ(interferon-γ,IFN)分泌下降;提高抗炎Th2型细胞的分化,血清中抗炎因子IL-10和转化生长因子(transforming growthfactor-β1,TGF-β1)分泌增多。KD的治疗作用与阳性药水飞蓟素(silymarin)相当,与此同时,KD对健康小鼠没有表现出严重的不良反应。在AIH模型中,CD8+T细胞比例上调、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(regulatory Tcells,Tregs)分化下降,DCs趋向于成熟,KD的治疗可以显着逆转这些变化,但对其他免疫细胞的调控不显着。在体内或体外,KD均对DCs产生直接调控作用,抑制DCs成熟、迁移和抗原呈递能力。与之相反,KD对CD8+T细胞可能是非直接的调控作用。在体内存在DCs的环境中,KD可抑制CD8+T的分化和功能。小鼠体内清除CD8+T细胞后,KD的作用也不再显着。但是,磁珠分选出CD8+T细胞后进行体外实验,KD既不影响CD8+T细胞的增殖,也不影响它的杀伤作用。2.KD通过DCs介导对CD8+T细胞的作用在DC/Hepa1-6诱导的小鼠AIH模型中,给予KD治疗或采用KD处理后的DCs免疫小鼠,AIH的发病率和严重程度均显着降低,CD8+T细胞的分化和毒性也被抑制。小鼠脾脏过继转移DCs实验结果可见,AIH模型组DCs过继转移,脾脏内CD8+T细胞的比例和细胞毒性较过继转移正常DCs组显着增高,KD处理的DCs过继转移,CD8+T细胞的比例和活性下降。体外实验显示,KD不影响磁珠分选出CD8+T细胞的增殖、分化和杀伤能力,但CD8+T细胞与DCs共培养后,KD的作用得以恢复。这提示在AIH的发生发展和KD的治疗中,CD8+T细胞的激活需要DCs介导。进一步检测DCs和T细胞表面的受体和共刺激信号,结果显示,KD对DCs-CD8+T细胞相互作用的调控,主要是通过上调负性调控因子——PD-L1/程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)的相互作用实现的。3.KD调控免疫细胞的代谢,从而影响其功能KD抑制DCs和DC处理的CD8+T细胞的糖摄取、NEFA分泌和葡萄糖转运体-1(glucose transporter-1,GLUT-1)的表达,也降低了它们的MMP,抑制其线粒体功能。KD作用亦可抑制DCs和DC处理的CD8+T细胞的糖酵解和脂肪代谢相关基因的表达,但对未经DCs处理的T细胞内糖酵解相关基因影响不显着,提示KD可通过重塑免疫细胞,特别是DCs的代谢,下调其活性和功能,从而发挥免疫抑制作用。4.KD 靶向血管内皮生长因子受体 2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2),抑制受体偶联的代谢相关PI3K-AKT和炎症相关JAK2-STAT3信号通路的相互作用KD可嵌入VEGFR2的活性区域,且结合能低,亲和力高,VEGFR2可能是KD的重要靶点。KD处理后,DCs、DC调控的CD8+T细胞和肝靶细胞——肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中 VEGFR2 的表达下降,下游 PI3K-AKT和JAK2-STAT3这2条信号通路中信号分子的表达和磷酸化也随之下调,但KD对其他受体和通路影响不大。进一步的研究发现,KD抑制免疫细胞,肝组织和靶细胞细胞膜上磷酸化VEGFR2(p-VEGFR2)的表达。采用VEGFR2特异性拮抗剂阻断此受体后,KD的作用也被相应地阻断。对信号通路中其他可能靶点,如janus酪氨酸蛋白激酶2(janus kinase 2,JAK2)进行阻断,却不能削弱KD的作用,进一步证明VEGFR2可能是KD的作用靶点。KD可下调代谢相关PI3K-AKT和炎症相关JAK2-STAT3信号通路中信号分子的表达和磷酸化,上调JAK2-STAT3信号通路中负性调控因子——信号转导抑制分子 3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达。KD 亦可逆转 PI3K特异性激动剂740 Y-P引起的PI3K-AKT和JAK2-STAT3信号通路的活化。EMSA等实验也发现,STAT3作为介导VEGFR2和JAK2的重要的转录因子,KD的作用可抑制其DNA结合活性和二聚化,抑制p-STAT3的转录入核。因此,STAT3可能作为代谢相关PI3K-AKT通路和炎症相关JAK2-STAT3通路产生cross-talk的关键节点,来调控KD作用于VEGFR2后的信号转导。当脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激DCs活化成熟时,PI3K-AKT信号通路下游重要信号分子FoxO1与DCs内CCR7基因启动子区域的结合能力显着升高,与PD-L1基因启动子区域的结合显着降低,KD作用可逆转FoxO1对DCs中CCR7和PD-L1基因启动的调控,从而抑制DCs的迁移和抗原提呈能力。5.KD的药代动力学和成药性初步预测最后,我们对KD的药代动力学和成药性进行了初步预测,比较KD与其差向异构体Goodyeroside A在药理活性上的差异。结果显示,KD药代动力学稳定,具有较好的成药性,在免疫调控方面的药理活性明显优于其差向异构体。结论综上所述,我们明确了 KD靶向VEGFR2,调控免疫细胞内代谢相关PI3K-AKT和炎症相关JAK2-STAT3信号通路的相互作用,抑制DCs内CCR7基因的启动、促进PD-L1基因的高表达,进而调控DCs的成熟与功能。KD下调DCs与CD8+T细胞的能量代谢、上调DCs-CD8+T细胞负性共刺激分子PD-1/PD-L1的相互作用,干扰DCs对CD8+T细胞的刺激活化,在AIH中发挥免疫抑制作用。(本文来源于《华中科技大学》期刊2017-05-01）
刁思军[10]（2017）在《靶向干扰血管生长因子的树突状细胞疫苗对膀胱癌T24细胞影响的实验研究》一文中研究指出目的:利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,靶向下调膀胱癌T24细胞的VEGF(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达,观察下调膀胱癌T24细胞VEGF表达后对外周血来源的DC(dendritic cell,DC)前体细胞分化成熟的影响。利用膀胱癌T24细胞的全抗原制备DC疫苗进行体外细胞实验研究,观察下调VEGF后的DC疫苗介导的特异性T淋巴细胞对膀胱癌T24细胞的杀伤作用。方法:利用RNAi技术,以慢病毒为载体,构建LV-VEGFA-RNAi,转染膀胱癌T24细胞,下调膀胱癌T24细胞的VEGF表达。转染实验分为3组:转染组(LV-VEGF)、阴性转染组(LV-CO)及未转染组(CO)。用倒置显微镜及荧光显微镜观察各组细胞生长及荧光表达情况。利用q RT-PCR以及ELISA检测各组膀胱癌T24细胞VEGF的m RNA和蛋白表达水平。制备叁组DC疫苗:对照组(常规完全培养液)、干扰组(25%体积分数的转染组培养上清)以及未干扰组(25%体积分数的未转染组培养上清)。在体外利用rh IL-4(recombinant human interleukin-4,rh IL-4),rh GM-CSF(recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rh GM-CSF)诱导DC分化,第8天各组加入膀胱癌T24细胞全抗原,2h后加入LPS(Lipopolysaccharides,LPS)刺激DC成熟。继续培养至第14天,通过倒置显微镜观察DC形态,流式细胞技术鉴定DC表型:CD1a、CD83、CD86。利用尼龙毛柱法从人外周血中分离出T淋巴细胞,进一步用流式细胞技术鉴定CD3+T淋巴细胞。利用MTT法检测各组DC疫苗刺激T淋巴细胞增殖及活化的T淋巴细胞的细胞毒性,同时收集上清液,ELISA法检测IL-10、IL-12及IFN-γ水平。收集、整理实验数据,用SPSS17.0进行统计学分析。结果:以慢病毒为载体的RNAi序列成功下调膀胱癌T24细胞VEGF的表达,与未转染组相比,转染组膀胱癌T24细胞VEGF的m RNA及蛋白表达水平下降(P<0.05),阴性转染组与未转染组相比,二者无差别(P>0.05)。叁组DC疫苗经流式细胞技术检测细胞表型,与对照组相比,干扰组、未干扰组DC表面分子CD1a、CD83、CD86表达均有不同程度下降(P<0.05);与未干扰组比较,干扰组DC表面分子CD1a、CD83、CD86表达均上调(P<0.05)。叁组DC分泌IL-10、IL-12存在差异(P<0.05),与对照组相比,干扰组与未干扰组培养上清中IL-12含量有不同程度下降,而IL-10含量存在不同程度的升高。各组DC体外对自体T淋巴细胞刺激能力不同(P<0.001),对照组DC刺激T淋巴细胞增殖的能力(SI:10.90±0.49)最强,未干扰组DC刺激T淋巴细胞增殖的能力(SI:8.03±0.39)最弱,与未干扰组相比,干扰组DC刺激T淋巴细胞增殖的能力(SI:8.81±0.41)增强(P<0.001)。各组DC激活T淋巴细胞的得到的CTL对T24靶细胞的杀伤存不同,干扰组(46.23±1.07)%、未干扰组(32.50±0.38)%与对照组(54.64±0.90)%杀伤率存在差异(P<0.001),对照组DC刺激形成的CTL细胞杀伤T24细胞的能力最强,未干扰组DC刺激形成的CTL杀伤T24细胞的能力最弱,干扰组CTL杀伤T24细胞的能力比未干扰组更强(P<0.001)。叁组负载抗原的DC活化T淋巴细胞后分泌的IFN-γ量不全相同,干扰组(37.45±0.38)pg/ml、未干扰组(21.87±0.30)pg/ml与对照组(51.08±0.41)pg/ml之间存在差异,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:膀胱癌T24细胞分泌的VEGF在体外抑制DC的分化成熟,进一步抑制了DC介导的细胞免疫。体外抑制肿瘤VEGF的表达,有利于增强DC疫苗介导的CTL对膀胱癌T24细胞的杀伤效应。(本文来源于《西南医科大学》期刊2017-05-01）
树突靶向论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
引言树突状细胞(DCs)属于抗原递呈细胞,其表面存在受体分子CD11c,靶向到树突状细胞上CD11c的病毒抗原能诱导特异性T细胞反应。本研究旨在通过使用具有树突状细胞靶向作用的单链抗体aCD11c,构建一株树突状细胞靶向型乳酸菌,该株乳酸菌不仅在体外能增加对BMDCs的
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
树突靶向论文参考文献
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