吴夏慧
（江苏省中西医结合医院江苏南京210028）
【摘要】目的探讨重楼总皂苷与5-FU对人胃低分化腺癌BGC823细胞体外协同作用及机制。方法采用MTT法、流式细胞术检测重楼总皂苷与5-FU单独及联合用药对BGC823细胞抑制增殖和促凋亡的影响。结果重楼总皂苷联合5-FU对胃癌细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用优于各单药组。结论重楼总皂苷联合5-FU具有协同抗肿瘤作用，诱导细胞凋亡可能是其协同作用机制之一。
【关键词】重楼总皂苷5-氟尿嘧啶胃癌协同作用细胞凋亡
【中图分类号】R453【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）23-0210-02
当前胃癌的化疗以氟尿嘧啶类药物为基础，治疗中存在毒副反应大、耐药等问题。本实验采用MTT法和流式细胞术研究重楼总皂苷与5-FU对胃癌细胞体外协同抗肿瘤作用，从而提供重楼总皂苷联合5-FU临床应用的理论依据。
1材料和方法
1.1材料重楼（重庆重楼中药饮片厂有限公司，批号100401）、5-FU(上海旭东海普药业有限公司，批号101106)、MTT(Sigma公司)、细胞凋亡检测试剂盒(北京四正柏生物科技有限公司)、自动酶标读数仪（BioTek公司）、流式细胞仪（BectonDickinson公司）等。
1.2方法
1.2.1重楼总皂苷的制备采用80%乙醇热回流提取3次，滤液减压回收真空干燥制得重楼醇提物。重楼醇提物上样于D101型大孔吸附树脂，用纯水、40%乙醇、70%乙醇、90%乙醇顺序洗脱，70%乙醇部位滤液减压回收真空干燥制得重楼总皂苷。
1.2.2MTT法测定细胞增殖抑制作用BGC823细胞以6.0×103/孔密度接种于96孔板，培养24h，加入各组药物，重楼总皂苷组浓度为4.0、3.0、2.0、1.5、1.0μg/mL；5-FU组浓度为100.00、50.00、25.00、12.50、6.25μg/mL；联合用药组浓度为4.0+100.00、3.0+50.00、2.0+25.00、1.5+12.5、1.0+6.25μg/mL，同时设不加药物的空白对照组。培养48h，每孔加20?lMTT，培养4h后弃培养液，加150?lDMSO，570/630nm波长下全自动酶标仪测定吸光度值。
1.2.3流式细胞术测定细胞凋亡作用BGC823细胞以2.5×105/孔密度接种于6孔板中，培养24h，分别加入重楼总皂苷(2μg/mL)、5-FU(25μg/mL)、重楼总皂苷+5-FU(2+25μg/mL)，同时设不加药对照组。培养48h，胰酶消化收集细胞后PBS洗2次，加100μl结合缓冲液重悬细胞，加AnnexinV-FITC10μl、PI5μl，混匀避光孵育15min，加400μlPBS，流式细胞仪检测分析细胞凋亡率。
1.2.4统计分析SPSS17.0统计软件进行处理，数据统计采用t检验，数据均用x-±s表示。
2结果
2.1重楼总皂苷联合5-FU对BCG823增殖的影响重楼总皂苷、5-FU单用和联合对BGC823细胞生长抑制率分别为13.93±1.11、25.58±0.78、39.72±1.24、53.68±1.60、70.09±0.85；19.48±2.62、30.40±0.69、41.13±1.23、57.02±1.59、68.97±2.31；30.70±1.79、48.38±1.82、64.43±0.78、79.92±0.65、90.72±0.79。重楼总皂苷、5-FU单用与联合对BGC823细胞生长抑制效应随着药物浓度增加而增强。采用Webb系数法[1]判定重楼总皂苷与5-FU的相互作用，在各浓度范围内，联合应用时实际抑制率均大于预估效应，即产生协同作用。
2.2重楼总皂苷联合5-FU对BGC823细胞凋亡的影响空白对照组、重楼总皂苷组、5-FU组、联合组作用BGC823细胞48h，凋亡细胞所占比例分别为6.3%、16.8%、16.1%、61.9%。联合应用时早期凋亡和中晚期凋亡细胞比例增多，产生诱导BGC-823细胞凋亡的协同效应。
3讨论
中药重楼具有清热解毒、消肿止痛等功效，用于治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌扑伤痛等症。重楼皂苷具有抑制肿瘤细胞增殖、多途径诱导凋亡等作用[2]。本实验研究发现重楼总皂苷与5-FU联合应用可产生抑制人胃癌细胞增殖的协同作用。同时，重楼总皂苷与5-FU联合应用可显著促进细胞凋亡，提示促细胞凋亡可能是重楼总皂苷化疗协同作用机制之一。
参考文献
[1]OngRC,LeiJ,LeeRK,etal.PolyphyllinDinducesmitochondrialfragmentationandactsdirectlyonthemitochondriatoinduceapoptosisindrug-resistantHepG2cells[J].CancerLett,2008,261(2):158-64.